Krooninen sairaus

tiivistelmä

Ei-koodaaviin RNA: t (ncRNAs) ovat hallitseva tuote eukaryoottisten transkription. Nämä tuotteet vaihtelevat lyhyt MikroRNA (miRNA) pitkän intergeeniset Koodaamattomat RNA: t (lincRNAs). Pyöreä RNA: t koostuvat eksonisekvenssit edustavat tutkittu ilmiö muotoa ncRNA joka löydettiin yli 20 vuotta sitten. Käyttäen TaqMan-pohjaisen RT-PCR-määritys, olemme analysoineet suhde

CIR-ITCH

ilmaisun ja peräsuolen syöpä (CRC) on yhteensä 45 CRC ja pariksi viereisen ei-kasvain kudosnäytteitä. Huomasimme, että

CIR-ITCH

ilmentyminen tyypillisesti säädellä vähentävästi CRC verrattuna peritumoraalista kudokseen. Tämä tulos, sekä useita jatkokokeilu, osoittivat, että

CIR-ITCH

voisi nostaa

ITCH

, joka on mukana estyminen Wnt /β-kateniinin reitin . Siksi meidän tulokset osoittivat, että

CIR-ITCH

on rooli CRC säätelemällä Wnt /β-kateniinin reitin.

Citation: Huang G, Zhu H, Shi Y, Wu W, Cai H, Chen X (2015)

cIR-ITCH

Toistot estävä rooli peräsuolen syövän säätelemällä Wnt /β-kateniinin Pathway. PLoS ONE 10 (6): e0131225. doi: 10,1371 /journal.pone.0131225

Editor: Yifeng Zhou, Medical College of Soochow yliopisto, Kiina

vastaanotettu: 24 huhtikuu 2015; Hyväksytty: 30 toukokuu 2015; Julkaistu: 25 kesäkuu 2015

Copyright: © 2015 Huang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi.

Rahoitus: Tätä työtä tukivat avustusta Wenzhou Science and Technology Bureau Natural Science Foundation (Y20140700 Dr. XC). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on pahanlaatuinen kasvain, joka sijaitsee paksusuolen tai peräsuolen [1, 2]. CRC edelleen merkittävä syy syövän kuolleisuus kehittyneissä maissa, mikä johtuu suurelta osin sen taipumus etäispesäkkeitä [3]. CRC aiheuttaa suuri kansanterveydellinen ongelma, koska se on kolmanneksi yleisin diagnosoitu syöpä miehillä ja toiseksi yleisin naisilla. On ollut monia vertailevia tutkimuksia, jotka osoittavat epigeneettisellä muutoksia tiiviisti esiintyminen ja kehittämiseen CRC. Vaikka CRC tutkimuksen saavutuksia ovat merkittäviä, etiologinen tekijät ja synnyssä mekanismien CRC kehitys näyttävät olevan monimutkainen ja heterogeeninen.

Äskettäin pyöreä RNA, eräänlainen ei-koodaava RNA, joka ei yleensä ratkaisunsa koodaa proteiinia, havaittiin olevan läheisesti liittyvän kasvainten kehittymiseen [4]. Pyöreä RNA koostuu yleensä enemmän kuin yksi eksoni ja se on yleensä rikastettu toiminnallinen microRNA (miRNA) sitoutumiskohtia; esimerkiksi

CDR1

sisältää useita konservoituneita sitoutumiskohdat miRNA-7 (miR-7). Äskettäin yksi tutkimus kertoo, että

CIR-ITCH

on pyöreä RNA, joka ulottuu useiden eksonien Ubiquitin (Ub) proteiini-ligaasia (E3) (ITCH) [5-7]. Artikkelissa osoitti, että

CIR-ITCH

harbours monia miRNA sitoutumiskohtia, joka voi sitoutua 3′-UTR

ITCH

, mukaan lukien miR-7, miR-17, miR-214 , miR-128 ja miR-216b [5, 8]. Tutkimus miRNA on kypsempi kuin pyöreä RNA; miRNA ovat 21-nukleotidin mittainen ei-koodaavat RNA: t, jotka on tärkeä rooli lukuisissa biologisissa prosesseissa sekä kasvien ja eläinten [9]. Aikuinen miRNA olla tärkeä sääntelyn rooli solujen kasvua, lisääntymistä, erilaistumista ja solukuolemaa.

CIR-ITCH

tärkeä rooli kehityksen ja etenemisen ESCC [7].

ITCH

n tavoitteita, mukaan lukien p63, p73, ja Notch1, liittyvät yleensä kasvaimen muodostumisen ja kemosensitiivisyys, osoittaa yhteyden ITCH syöpäbiologian [10]. Aiemmat tutkimukset keskusteltiin pyöreän RNA syöpälääkkeen toimintaa pahanlaatuisen melanooman solulinjoissa [11]. Kuitenkaan ole raportoitu tutkimuksia toiminnallisten roolien pyöreiden RNA CRC.

Tässä tutkimuksessa olemme arveltu, että

CIR-ITCH

samanlainen rooli CRC. Tämän hypoteesin testaamiseksi, kehitimme menetelmän rajaamiseksi transkription erot

CIR-ITCH

välillä CRC ja pariksi viereisen ei-neoplastisia kudoksia.

Materiaalit ja menetelmät

Tutkimus aiheista

Kaikki koehenkilöt tässä tutkimuksessa olivat homogeenisiä Han-kiinalaisia. Neljäkymmentäviisi CRC ja vastaavat paracancerous kudosnäytteitä saatiin potilailla, joilla oli ensimmäinen Affiliated Hospital Wenzhoun Medical College (Wenzhou). Ei ollut rajoituksia iästä, vaihe CRC, sukupuoleen tai histologian. Tällä rekrytointi, kuhunkin aiheeseen antoi kirjallinen lupa ajoittamalla haastattelu, jossa ne saivat strukturoidun kyselylomakkeen. Tutkimus hyväksyi Institutional Review Board Wenzhoun Medical College. Kliininen ominaisuudet kaikki potilaat ovat taulukossa 1.

Soluviljely

Ihmisen CRC solulinjat HCT116 ja SW480 ostettiin Cell Bank of Type Culture Collection, että Kiinan tiedeakatemia, Shanghai Institute of Cell Biology ja siirrostettiin alle 6 kuukautta.

rakentaminen pyöreän RNA plasmidi

rakennettu pyöreä RNA plasmidia käytettiin tässä tutkimuksessa. Konstrukti menetelmä on aiemmin julkaistu [8]. Saatu rakenne (

pcDNA3

.

1-CIR-ITCH

) varmistettiin suoralla sekvensoinnilla.

RNA ja reaaliaikainen kvantitatiivinen polymeraasiketjureaktio

Kokonais-RNA eristettiin soluista ja kudoksista käyttämällä TRIzol reagenssia mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Suhteellisen geeniekspression

CIR-ITCH

määritettiin käyttämällä qPCR, joka perustuu TaqMan menetelmällä.

GAPDH

käytettiin sisäisenä standardina valvonnan, ja kaikki reaktiot suoritettiin kolminkertaisina [12, 13]. Käytetyt alukkeet qPCR vahvistus on eteenpäin GCAGAGGCCAACACTGGAA, käänteinen TCCTTGAAGCTGACTACGCTGAG, koetin CCGTCCGGAACTATGAACAACAATGGCA.

RNaasi R pilkkomalla

RNaasi R pilkkomalla reaktio suoritettiin seuraavan aiemmin julkaistuja menetelmiä. Ruoansulatusta ja saostumisreaktioita toistettiin kahdesti suhteessa 3 U entsyymiä /mg RNA: ta [14].

Transient transfektiot ja Lusiferaasimäärityksiä

HCT116 ja SW480-solut transfektoitiin toimittaja edellä kuvatut plasmidit käyttäen Lipofectamine 2000: Solut kotransfektoitiin miRNA mukaisesti valmistajan ohjeiden [15]. Kukin ryhmässä 6 rinnakkaisnäytteiden, ja kolmeen rinnakkaiseen toisistaan ​​riippumatonta koetta suoritettiin.

aktinomysiini D määritys

HCT116 ja SW480-soluja transfektoitiin ohimenevästi käyttämällä Lipofectamine 2000 ja kotransfektoitiin kanssa mRNA: t kuten 24 tuntia . Sitten solut altistettiin aktinomysiini D. Solut otettiin talteen, ja vakaus

CIR-ITCH

mRNA analysoitiin käyttämällä kvantitatiivista käänteistranskriptio-PCR (qRT-PCR). Määritys suoritettiin edellisessä artikkelissa.

Western blot

Western blot-analyysi arvioida Wnt3a, β-kateniinin ja β-toiminnan ilmentyminen suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [16].

solunelinkykyisyysmääritys

solujen elinkelpoisuus mitattiin käyttäen Cell Counting Kit-8 (CCK-8) mukaisen järjestelmän valmistajan ohjeiden mukaisesti. Oli 6 rinnakkaisnäytettä kustakin ryhmästä, ja kokeet toistettiin vähintään 3 kertaa.

Tilastolliset analyysit

Korrelaatio ilmaus

CIR-ITCH

ja

ITCH

geenin CRC kudoksissa määritettiin käyttäen yksisuuntaista varianssianalyysiä ja lineaarisen regression malleja. Erot ryhmien välillä arvioitiin pariksi, 2-tailed Studentin t-testiä.

P

-arvo 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

tunnistetiedot pyöreän RNA

Kahdet

ITCH

alukkeet suunniteltiin tätä tutkimusta varten: eriävän asettaa monistaa vain pyöreän muodon ja suppeneva asettaa täydentää lineaarinen muotoja. Olemme vahvistaneet, että pyöreän muodon monistettiin käyttämällä toisistaan ​​poikkeavia alukkeita. cDNA ja genomi-DNA: ta käytettiin valvontaa. Kuten odotettua, ei vahvistusta havaittiin käyttämällä toisistaan ​​poikkeavia alukkeita genomisen DNA. GAPDH käytettiin lineaarisen ohjauksen (kuvio 1A).

(A) Convergent alukkeita voidaan monistaa pyöreä-RNA: t ja lineaarinen RNA: t. Divergent alukkeita monistamaan pyöreä RNA: t vain cDNA verrattuna genomista DNA (gDNA). GAPDH on lineaarinen ohjaus. (B)

CIR-ITCH

ilmentyi korkeammalla tasolla noin 75,6%: n CRC viereisten kudosten verrattuna vastaamaan CRC kudoksiin. Ilmaisu taso

CIR-ITCH

analysoitiin qRT-PCR perustuu Taq-man ja normalisoidaan

GAPDH

. Tiedot esitetään keskiarvona ± SEM kolmesta itsenäisestä kokeesta. (C) Random alukkeita ja oligodT- alukkeita käytettiin vastaavasti käänteistranskriptioreagenssien kokeita. Ennustettu

CIR-ITCH

puuttuu poly (A) rikastettu näytteitä. (D) Ennustettu

CIR-ITCH

on reagoida RNaasi R hoitoon. 2-tailed opiskelijan t-testiä käytettiin testissä ryhmien välisten erojen * p 0,05 verrattuna kontrolliin.

ilmentäminen

CIR-ITCH

CRC ja ympäröivien kudosten

Käytimme eriävät alukeyhdistelmän ja hyödyntää TaqMan-pohjainen qRT-PCR-määritys vahvistaa läsnäolo pyöreä RNA: 45 CRC kudosten ja pariksi ei-syöpä kudoksiin.

CIR-ITCH

ilmentyi korkeammalla tasolla noin 75,6%: n CRC kudosten verrattuna sovitetun ei-syöpä näytteistä (kuvio 1 B).

karakterisointi

CIR -ITCH

CRC soluissa

konstruoitu vektorina ilmentämään

cIR-ITCH

soluissa seuraavissa edellisessä tutkimuksessa ja sitten suoritetaan kokeiluja. Laskennallinen plasmidit transfektoitiin lyhytaikaisesti HCT116 ja SW480-soluissa.

käänteisen transkription kokeissa käytettiin satunnaisia ​​alukkeita ja oligo (dT) alukkeita. Pyöreä tuotteet köyhdytettyä polyA-rikastettu näytteitä verrataan lineaarisen tuotteita. Kun käytetään oligo (dT) alukkeita, ilmaisu määrä (normalisoida GAPDH) lineaarisen

ITCH

oli merkittävästi korkeampi kuin pyöreä

ITCH

(kuvio 1 C) [11].

käytetään entsyymin RNaasi R, erittäin tuottavia 3′-5 ’exoribonuclease, testata ennusteita pyöreän RNA ominaisuudet. Tämä eksonukleaasi pilkkoo lineaarisen RNA-molekyylejä in 3’-5 ’suuntaan, mutta se ei toimi pyöreä RNA: t [17, 18]. Kuten odotettua, toisin kuin lineaarisen ohjauksen RNA: t, jotka oli hajonnut, ennustettu pyöreä RNA oli resistentti RNaasi R hoitoa (kuvio 1 D).

vuorovaikutus

CIR-ITCH

ja miRNA

Äskettäin, pyöreä RNA on todettu runsas luokan sääntelyn selostukset, jotka toimivat miRNA sienet [5, 8]. Miranda ohjelmistoa käytettiin ennustaa tavoite miRNA. Sekvenssi ennusti MikroRNA sitoutumiskohdat esitetty taulukossa 2. Totesimme, että miR-7, miR-20a, ja miR-214 voi sitoutua 3′-transloimaton alue (UTR) ja

ITCH

ja

cIR-ITCH

. Siksi lisäsimme

ITCH

sitovan sekvenssin psiCHECK-2 ja rakennettu lusiferaasin toimittajille näiden 3 miRNA ohimenevästi kotransfektoimalla ne HCT116 soluihin. Rakennelma oli alentanut merkittävästi lusiferaasivaikutusta Mir-7, miR-20a, ja miR-214 pitoisuutena riippuvaisella tavalla kontrolliryhmässä HCT116-solut (1 pmol miRNA-7: 1,02 ± 0,028 versus 1,236 ± 0,068,

P

= 0,05; 40 pmol miRNA-7: 0,808 ± 0,052 versus 1,236 ± 0,068,

P

= 0.02; 1 pmol miRNA-20a: 2,09 ± 0,123 versus 2,498 ± 0,068,

P

= 0,02; 40 pmol miRNA-20a: 1,887 ± 0.11versus 2,498 ± 0,068,

P

= 0,006; 1 pmol miRNA-214: 1.511 ± 0.059 versus 1,88 ± 0,043,

P

= 0,03; 40 pmol miRNA-214: 1.38 ± 0,058 versus 1,88 ± 0,043,

P

= 0,006). Samanlaisia ​​tuloksia havaittiin, kun toistuva saman kokeiden valvonnassa SW480 soluja.

Suoritimme saman kokeen

CIR-ITCH

hyper-ilmentyminen soluissa. Tulokset osoittivat, että ei ollut merkittäviä eroja lusiferaasiaktiivisuudessa kun psiCHECK-2-

ITCH

sitovan kohdan kanssa miR-7 ja miR-20a transfektoitiin HCT116 ja SW480-soluissa, mutta että oli merkittävä ero mir-214 (1 pmol miRNA-7: 1,147 ± 0,041 versus 1,236 ± 0,042,

P

= 0,069; 40 pmol miRNA-7: 1,138 ± 0,015 versus 1,236 ± 0,042,

P

= 0,12; 1 pmol miRNA-20a: 2,424 ± 0,017 versus 2,526 ± 0,058,

P

= 0,11; 40 pmol miRNA-20a: 2,345 ± 0,04 versus 2,526 ± 0,058,

P

= 0,069 ; 1 pmol miRNA-214: 1,539 ± 0,038 versus 1,877 ± 0,039,

P

= 0,001; 40 pmol miRNA-214: 1.407 ± 0,051 versus 1,877 ± 0,039,

P

= 0,004) ( kuvio 2A).

(A) Suhteellinen lusiferaasin aktiivisuus psiCHECK-2-ITCH rakentaa ko-transfektoitiin miR-20a, miR-7, miR-214 ja inhibiittorin HCT116 ja SW480-soluissa. Vuonna

CIR-ITCH

hyper-ekspressiosoluja, ei ollut merkittäviä eroja lusiferaasiaktiivisuudessa kun psiCHECK-2-

ITCH

sitovan kohdan kanssa miRNA kotransfektoitiin HCT116 ja SW480-soluissa. Kuusi rinnakkaista kunkin ryhmän ja koe toistetaan vähintään kolme kertaa. Tiedot ovat keskiarvo ± SEM. (B) HCT116 ja SW480-soluissa sen jälkeen, kun on transfektoitu

CIR-ITCH

ja valvonta-soluja vastaavasti transfektoitiin miR-20a, miR-7 ja inhibiittori 24 tuntia ja sitten edelleen altistettiin aktinomysiini D 1, 2 ja 3 h. Solut kerättiin ja vakaus

CIR-ITCH

mRNA analysoitiin qRT-PCR suhteessa aikaan 0, kun estää uusien RNA-synteesin aktinomysiini D; tiedot ovat keskiarvo ± SEM, normalisoitu

GAPDH

.

HCT116 ja SW480-solut transfektoitiin plasmidin hoidettiin aktinomysiini D: n läsnä ollessa 1 tai 40 pmol miR-7 ja miR-20a, ja kokonais-RNA kerättiin osoitetuissa aikapisteissä. Tulokset osoittavat, että valvonta soluissa,

CIR-ITCH

pysyivät 20-30%; oli kuitenkin vain vähän muutosta

CIR-ITCH

tasot HCT116-soluissa inkuboinnin jälkeen aktinomysiini D. Toistimme näitä kokeita SW480 solut samalla tuloksiin (kuvio 2B).

Association of

cIR-ITCH

ja

ITCH

CRC

Äskettäin

cIR-ITCH

ilmoitettiin säädellä geeniekspressiota kautta rooliaan miRNA sieni, mikä suojaa miRNA ”kohdegeeneissä. Siksi testasimme korrelaatio

CIR-ITCH

ja

ITCH

ylimääräiseen 15 paria CRC adjuvanttia ei-syöpä kudoksiin. Tulokset osoittivat, että potilaat, joilla on korkeampi

CIR-ITCH

ekspressiotasot CRC kudoksissa oli merkittävä säätely ylöspäin lineaarinen

ITCH

(R

2 = 0,32,

P

0,01; Kuva 3A).

(A) lineaarinen korrelaatiot

cIR-ITCH

ekspressiotasot ja lineaarinen

ITCH

testattiin. Suhteellinen ilmentyminen arvo normalisoitiin

GAPDH

ekspressiotason. (B) TCF lusiferaasireportterigeenin määritys suoritettiin. Lusiferaasiaktiivisuus normalisoida Renilla lusiferaasiaktiivisuus. (C) proteiini tasot Wnt3a ja β-kateniinin arvioitiin CRC soluissa (HCT116-solut ja SW480-solut) Western blot. (D) mRNA taso

c-myc

ja

cyclinD1

havaittiin kvantitatiivisen RT-PCR jälkeen transfektoitu

CIR-ITCH

tai Kontrollisolut CRC soluissa. (Ylempi on

c-myc

ja alempi on

cyclinD1

) Tiedot ovat keskiarvo ± SEM ja edustavat kolmen erillisen kokeen. (E) HCT116 ja SW480-solut ympättiin 96-kuoppaisille levyille, kun on transfektoitu, ja solujen lisääntyminen suoritettiin päivittäin 3 päivää käyttäen CCK-8-määrityksessä. Kuusi jäljittelee kunkin ryhmän ja koe toistetaan kolme kertaa. Tiedot ovat keskiarvo ± SEM. *

P

0,05 verrattuna kontrolleihin.

CIR-ITCH

osallistuu säätelyyn Wnt /β-kateniinin signalointireitin in vivo

ITCH proteiini ubiquitinates fosforyloidun muodon Dvl2 ja edistää sen hajoamista, mikä rajoitti kanoninen Wnt signalointia [19]. Edelleen tarkistaa, onko

CIR-ITCH

säätelee Wnt /β-kateniinin signalointireitin CRC-soluissa, käytimme β-kateniinin /TCF-reagoiva lusiferaasireportterilla määrityksessä. Tulokset osoittivat, että yli-ilmentyminen ITCH esti TOP flash-aktiivisuuden annoksesta riippuvaisella tavalla (kuvio 3B). Β-kateniinin ja Wnt3a tasot analysised käyttäen western blot soluihin, joissa

ITCH

hyperilmentämisestä, ja kuten on esitetty kuviossa 3C, oli selvä lasku β-kateniinin tasoilla, kun taas ei ollut mitään muutosta Wnt3a ilmaisua. Sitten testattiin ekspressiota

c-myc

ja

cyclinD1

kaksi kohdegeenien Wnt /β-kateniinin signalointireitin, transfektoiduissa soluissa

CIR-ITCH

. Niiden ilmentyminen oli myös tukahdutettiin (kuvio 3D).

CIR-ITCH

moduloi solujen kasvua

suoritetaan CCK-8 määrityksiä vaikutusten testaamiseksi

olo- ITCH

soluproliferaatioon CRC soluissa. Havaitsimme johdonmukainen väheneminen solujen lisääntymisen ja HCT116 (28% -39%: n lasku) ja SW480-soluja (15% -33%: n lasku), kun

CIR-ITCH

oli yli-ilmentynyt fysiologisessa tasojen läpi CCK-8 määrityksiä verrattuna ohjaus (kuvio 3E).

keskustelu

tässä tutkimuksessa tunnistimme

cIR-ITCH

CRC ja totesi, että se oli dramaattisesti alas- säännelty CRC kudoksissa käyttäen TaqMan-pohjainen RT-PCR-määritys, joka osoittaa mahdolliset funktio

cIR-ITCH

CRC. Useita kokeiluja kuvitettu korrelaatio

CIR-ITCH

ja miRNA, osoittamalla, että

CIR-ITCH

tärkeä rooli kuin miRNA sieni prosessissa CRC kehitystä.

Tuhansia lincRNAs on havaittu ihmisillä ja hiirillä, ja monet liittyvät läheisesti kehittää erilaisia ​​syöpien, kuten ruokatorven okasolusyöpä (ESCC) ja kohdun limakalvon karsinooman [20, 21]. Circular RNA on yksi tyyppi lincRNA, että on rooli kasvaimen kehittymisen. Tietääksemme

ITCH

on yksi E3 ubikitiinipromoottori proteiini ligaasit, joka kohdistetaan erityisesti p73 [22], Dvl2 [19], ja Notch1 [23], jotka kaikki liittyvät yleensä kasvaimen muodostumisen ja kemosensitiivisyys.

Vaikka toimintoja miRNA ovat kaukana täysin ymmärretä, on ennustettu, että noin 30% proteiinia koodaavien geenien ohjataan miRNA [24], ja jotkut tutkimukset ovat ehdottaneet, että miRNA voi sitoutua 3 ”-UTR on

ITCH

vähentää sen ilmentymistä [25]. Memczak et ai. (2013) ja Hansen et al. (2011) ehdotti, että pikkuaivojen degeneraatio liittyvä proteiini 1 (CDR1) lokukseen satamat 70 säilytetyn ottelut MIR-7 siemen. Tämä silmiinpistävä piirre viittasi siihen, että pyöreä RNA on mahdollinen vaikutus kuin miRNA sieni [5, 8, 26]. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että

CIR-ITCH

toimii sienen miR-7, miR-17, ja miR-214, kun taas tässä tutkimuksessa, huomasimme, että CRC solulinjoissa, miR-7 ja miR-20a alas-säädellä

ITCH

ilmentymistä sitoutumalla sen 3′-UTR. Lisäksi nämä miRNA aina kanna mukaan

CIR-ITCH

. Tutkimuksessamme

CIR-ITCH

ei ole toiminut sienen miR-214. Tietääksemme ektooppinen ilmentyminen miR-214 estää solujen lisääntymisen, migraation ja invaasion in vitro, kun taas miR-214 knockdovvn edistää solujen lisääntymisen, migraation ja invaasion CRC solulinjoissa [27].

miRNA ovat pitkään olleet syöpään liittyvä. Kohonnut miR-7 ilmentyminen on kuvattu erilaisia ​​kasvaimen tyypit, mukaan lukien CRC, ja on liitetty onkogeneesiin, luokittelu, ja syövän etenemistä [28]. miR-20a edistää lisääntyvän leviämisen ja invasiivisuus CRC solujen [29]. Näiden tietojen perusteella, huomaamme tarkistaa edeltäjillämme työtä. Edellä esitetyt tiedot, osoitettiin, että

CIR-ITCH

osallistuu kehittämiseen CRC säätelemällä miRNA aktiivisuuden.

Aberrant sääntely Wnt-signalointireitin on tullut vallalla teema syöpäbiologian, ja se on ratkaisevan tärkeää puhkeamiseen ja etenemiseen ihmisen CRC. Noin 90% satunnaista koolonsyöpien näyttää poikkeava Wnt signalointia [30].

CIR-ITCH

toimii miRNA sienellä ja lisää taso

ITCH

, joka osallistuu Wnt /β-kateniinin reitin. Aiempien tutkimuksen ITCH voi edistää ubikitinaation ja hajoaminen fosforyloitua Dvl2, ja näin ollen estää kanoninen Wnt signalointia [19]. Β-kateniinin /TCF-reagoiva lusiferaasireportteri määritystä käytettiin tutkimaan, onko yksittäinen geeni säätelee Wnt /β-kateniinin signalointireitin. Tutkimuksemme ja muut aiemmat tulokset ilmoitetaan, että yli-ilmentyminen

CIR-ITCH

merkittävästi tukahdutti suhteellinen TCF transkriptionaalista aktiivisuutta.

onkogeenien

c-myc

ja

cyclinD1

ovat efektoriproteiinit on karyomitosis signaalin, joka voi laukaista ja säädellä geenien transkriptiota, jotka liittyvät leviämisen. Ne ovat usein yli-ilmentyy useissa ihmisen kasvaimissa, mukaan lukien CRC [31]. Tulokset osoittavat, että solut, jotka on transfektoitu

CIR-ITCH

, ilmaus

c-myc

ja

cyclinD1

oli merkittävästi vähentynyt. Siksi ehdotamme, että

CIR-ITCH

on estävä vaikutus kanoninen Wnt-reitin.

CIR-ITCH

soittaa anti-kasvain rooli ohjaamalla miRNA toimintaa, ja sillä on estävä rooli kanoninen Wnt-reitin, estämällä

c-myc

ja

cyclinD1

ilme.

Yhteenvetona tämänhetkisiin tutkimus osoittaa, että miRNA sieni

cIR-ITCH

edustaa uuden sukupolven teknologiaa varten miRNA eston.

CIR-ITCH

osallistuu Wnt /β-kateniinin reitin, ja estämällä tämän reitin, se on rooli CRC.

Kiitokset

Tätä työtä tukivat by avustusta Wenzhou Science and Technology Bureau Natural Science Foundation (Y20140700).