Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Anaplastic lymfooma Kinase (ALK) positiivisuus edustaa uutta molekyylitason tavoite osajoukko Non-Small Cell keuhkosyövässä (NSCLC). Tutkimme Fluoresenssi

in situ

hybridisaatio (FISH) ja immunohistokemia (IHC) diagnostisia menetelmiä ALK positiivisten potilaiden ja kuvaamaan sen esiintyvyyttä ja tuloksia populaatiossa NSCLC potilaiden.

Methods

pienisoluista keuhkosyöpää aiemmin seulotaan epidermaalisen kasvutekijän reseptori (EGFR) meidän laitos valittiin. ALK-positiivisille potilaille tunnistettiin FISH ja arvo IHC (D5F3) tutkittiin.

Tulokset

yhdeksänkymmentäyhdeksän potilaita tunnistettiin. Mediaani-ikä oli 61,5 vuotta (vaihteluväli 35-83), kaikki olivat valkoihoiset, kahdeksankymmentä prosenttia oli adenokarsinoomat viisikymmentä yksi prosentti oli miehiä ja kolmekymmentäkahdeksan prosenttia oli tupakoijilla. Seitsemän (7,1%) potilasta oli ALK positiivinen FISH, kolmetoista (13,1%) oli EGFR mutantti, ja 65 (65,6%) olivat negatiivisia /Wild Type (WT) sekä ALK ja EGFR. ALK positiivisuus ja EGFR mutaatioita olivat toisensa poissulkevia. ALK positiivisten potilaiden yleensä nuorempia kuin EGFR mutatoitunut tai p- potilaille. ALK-positiivisille potilaille olivat pääasiassa tupakoimattomia (71,4%) ja adenokarsinooman (71,4%). ALK positiivinen ja EGFR mutantti potilailla on parempi tulos kuin negatiivinen /WT. Kaikki potilaat, joilla ALK FISH syöpäkasvain olivat negatiivisia ALK IHC. Out of 6 potilaiden positiivisia ALK FISH enemmän kudosta saatavilla, 5 oli positiivisia ALK IHC ja 1 negatiivinen.

Johtopäätökset

ALK-positiivisten potilaiden osuus 7,1% populaatiosta valittujen NSCLC. ALK-positiivisille potilaille on eri kliinisiä piirteitä ja parempaan lopputulokseen kuin EGFR WT ja ALK negatiivisilla potilailla. IHC on lupaava menetelmä havaitsemiseksi ALK positiivinen pienisoluista keuhkosyöpää.

Citation: Martinez P, Hernández-Losa J, M

Ángeles Montero, Cedres S, Castellví J, Martinez-Marti A, et al. (2013) Fluoresenssi

In situ

-hybridisaatio ja immunohistokemia kuin Diagnostic Methods for ALK Positive ei-pienisoluinen keuhkosyöpä Potilaat. PLoS ONE 8 (1): e52261. doi: 10,1371 /journal.pone.0052261

Editor: Mohammad O. Hoque, Johns Hopkins University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 25 kesäkuu 2012; Hyväksytty: 31 lokakuu 2012; Julkaistu: 24 tammikuu 2013

Copyright: © 2013 Martinez et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat ei ole rahoitusta tai tukea raportti.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Keuhkosyöpä on yleisin syy syöpää liittyvä kuolema maailmanlaajuisesti, mikä vastaa yli 1 miljoona kuolemaa vuosittain. [1] Vaikka solunsalpaajahoidosta yhä hoidon kulmakivi, että suurin osa potilaista, joilla on edennyt ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC), [2] tunnistaminen geneettisen vaurioita, jotka ajavat syöpäsolujen lisääntymistä on johtanut uusien tavoite hoitomuotojen potilasalaryhmässä NSCLC [3], [4]. Viime vuosina, anaplastinen lymfooma kinaasi (ALK) toisiintuminen, pääasiassa kanssa piikkinahkaisten mikrotubuluksiin liittyvä proteiini, kuten 4 (EML4) geeni, on todettu, että onkogeenisen tapahtuma osajoukko pienisoluista keuhkosyöpää [4]. ALK translokaatio tulokset konstitutiivista ilmentymistä tyrosiinikinaasidomeeniin ALK proteiinia, joka johtaa kasvaimen kasvua ja kehitystä. Kasvaimia synnyttävän riippuvuus Tämän tapahtuman perusteella osoittanut, että poistaminen ALK kinaasiaktiivisuuden kääntää pahanlaatuisen kuvio ja kasvun [5]. Äskettäin tulokset vaiheen 1 tutkimuksessa, joissa arvioitiin ALK estäjä, Crizotinib, jos potilaalla on ALK positiivinen NSCLC osoitti rohkaisevia tuloksia [6]. Kliinisissä tutkimuksissa, joissa Crizotinib ja muiden ALK estäjien tässä osajoukko väestöstä ALK positiiviset NSCLC potilaat ovat käynnissä.

Alustavien selvitykset ovat osoittaneet, että ALK positiivinen NSCLC potilaat ovat yleensä nuorempia, pääasiassa ei /valo tupakoitsijoille adenokarsinooma histologia kuin yleinen NSCLC potilaiden väestöstä [7]. Nämä kliinis ominaisuudet ovat myös usein potilailla, joilla on EGFR mutaatioita, mutta molemmat geneettisiä tapahtumia näyttävät olevan toisensa poissulkevia [8]. Valikoimattomissa potilaalla on NSCLC esiintyvyys ALK positiivisuus välillä 1%: sta 7% [9], mutta yli 30% potilaista valittiin EGFR Wild-Type (WT), adenokarsinooma ja tupakointi historia [7]. Sen esiintyvyys on valittu Euroopan väestöstä NSCLC potilaiden ei ole vielä tunnettu.

Kuitenkin, ALK positiivinen pienisoluista keuhkosyöpää ja niiden erityistä characterictics on selvitetty, mutta selkeää määrittelyä ALK positiivisuus on edelleen haastava ongelma. Ensimmäinen raportit yleisyydestä EML4-ALK uudelleenjärjestelyjä käytetään RT-PCR havaitsemiseksi potilailla, yleensä Retrospektiivinen analyysi resektoitiin yksilöitä pienisoluista keuhkosyöpää [4], [9]. Kuitenkin tämä menetelmä ei pysty tunnistamaan tuntemattomia EML4-ALK variantteja tai uudelleenjärjestelyjä muiden kumppaneiden erilainen EML4. Uudet alustat on kehitetty antamaan että puute [10]. Valitsemiseksi potilaille Crizotinib tutkimuksissa FISH tauko erilleen koetin ALK on diagnostinen menetelmä. FISH testauksen avulla havaitsemisen ALK translokaatioita, ei väliä kumppanin tai variantti, mutta ALK positiivisuus määritelmää FISH ja sen rajoitettua käyttöä resektoitiin tai kudosnäytteistä rajoituksia [11]. Inmunoshistochemistry (IHC) on myös tutkittu. IHC-analyysit käyttämällä vasta-aineita ALK proteiinia käytetään hematologinen malignances ovat osoittaneet huono herkkyys potilailla, joilla on NSCLC, johtunee alempaan ALK proteiinin tasot ilmaistuna verrattuna hematologista malignances ALK uudelleenjärjestelyjä. Uusi suuri herkkyys monoklonaalinen vasta D5F3 näyttää riittävän tarkkuuden tunnistaa potilaat voidaan jäljentää maailmanlaajuisesti tavalla [12], koska kaikki potilaat, joilla oli kudoksen tarpeeksi vaiheen 1 Crizotinib tutkimuksessa aiemmin valitsemaa FISH positiivisuus olivat myös positiivisia IHC , kun taas ainoastaan ​​kaksi kolmesta osasta potilaista, jotka olivat positiivisia RT-PCR: llä. FISH negatiivista näytettä ja normaali keuhkojen kudoksia ei ilmaissut ALK proteiinin IHC [6]. Viime aikoina muita diagnostisia menetelmiä on myös tutkittu [13], [14].

Tämän tutkimuksen tavoitteena on tutkia esiintyvyys ALK positiivisuus eurooppalaisessa kohortissa valittujen NSCLC potilaiden FISH, jotta voitaisiin määritellä tarkemmin sen kliiniset piirteet ja tuloksia ja, tutkia IHC diagnostisia menetelmä testaus ALK NSCLC potilailla.

potilaat ja menetelmät

potilaat

Kaikki mukana potilaat olivat saaneet hoitoa tai kuuleminen lääketieteellisestä Oncology Palvelua Vall d’Hebron yliopistollisessa sairaalassa. Kaikki NSCLC potilaat aikaisemmin seulotaan EGFR-mutaatio aseman välillä toukokuussa 2006 ja tammikuu 2010 valittiin. EGFR mutaatioanalyysit oli tehty perustuu lääkärin tapaus tapauksessa osoitus, ottaen huomioon sukupuoli, histologian ja tupakointi historiaa, mutta ilman kiinteitä parametreja. Potilastiedot tarkistettiin ja pohjapinta kliinis-hoidot ja tulokset kirjataan. Jos kudosta oli käytettävissä ALK analyysejä, potilaat testattiin ensin FISH sittemmin IHC. Institutionaalinen eettinen komitea tarkastettu ja hyväksytty tässä tutkimuksessa.

Tuumorinäytteet

unstained diat formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut (FFPE) kasvain näytteet koepaloja tai Aikasolujen rekonstruoida sytologia tai, ilman tätä, diat sytologisesta analysoitiin.

EGFR mutaatioanalyysit

DNA Extraction.

Näytteet saatu FNA ja FFPE hajotettiin 48 tuntia proteinaasi K ja 180 ui G2 hajotuspuskuria 37

AC, sitten DNA uutettiin EZ1 DNA Tissue Kit, jossa on Biorobot EZ1 työaseman eluoimalla näytteet 50 ul: ssa seuraten valmistajan ohjeita. Pitoisuus ja puhtaus uutettua DNA: ta määritettiin spektrofotometrisesti ja sen jälkeen DNA: ta säilytettiin -20 ° C: ssa.

PCR-monistuksella ja suoralla sekvensoinnilla.

PCR suoritettiin 30 ul: määriä käyttäen 50 ng templaatti-DNA: ta, 0,75 U AmpliTaq Gold DNA-polymeraasia (Perkin-Elmer, Roche Molecular Systems, Branchburg, NJ), 3 ui PCR-puskuria (Perkin-Elmer), 0,8 umol /l deoksinukleotiditrifosfaattia (Promega), 0,5 umol /L kutakin aluketta, ja MgCl2-konsentraatioissa, eksonit 19 ja 21 monistettiin PCR: llä. Primer sekvenssit saatiin kuvatulla täydentäviä tietoja. PCR-ohjelma suoritettiin 35 sykliä denaturointi 94 ° C: ssa 45 s, alukkeen 58 ° C: ssa 30 s, ja pidennys 72 ° C: ssa 30 s. Lopullinen laajentaminen eteni 72 ° C: ssa 10 min. Siteet PCR-tuotteita visualisoitiin elektroforeesilla geelillä Bret. Jokainen näyte sekvensoitiin kahtena sekä eteen- että taaksepäin käyttämällä BigDye Terminator Kit 3.1 (Applied Biosystems, Foster City, CA) ja ABI prisma 310 (Applied Biosystems) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Sekvenssit verrataan sitten GenBank-arkistoidut ihmisen sekvenssin

EGFR

(tulonumero AY588246) mukaan täyteläisyyden Pro Software.

EGFR määritys reaaliaikaista PCR.

Kaikki tapauksissa analysoitiin käyttämällä Therascreen EGFR PCR Kit (Qiagen. Manchester Ltd) valmistajan ohjeiden havaita mutaatioita reaaliaikainen PCR-reaktioissa. Reaaliaikainen PCR suoritettiin käyttäen ABI7500Fast (Applied Biosystems, Foster City, CA) seuraavissa olosuhteissa: Tiedot analysoitiin käyttämällä 7500 ohjelmistoa (versio 2).

Fluoresenssi

in situ

Hybridisaatio (FISH) B

valmistettiin 4 um parafinoidut histologisia osiot FISH-analyysillä. Kaupallinen Vysis LSI

ALK

Dual Color, hajota uudelleenjärjestely Probe (Abbott Molecular Inc., Des Plaines, IL) käytettiin mukaan valmistajan ohjeiden. Tulokset analysoitiin fluoresenssimikroskoopilla (Nikon 501) käyttäen Isis fluoresenssikuvantamisella järjestelmän ohjelmisto. Vähintään 100 ytimien pisteytettiin. FISH positiivinen tapaus määritelty olevan yli 15% kasvainsoluja osoittaa erottaa vihreän ja punaisen signaaleja tai yksi punainen signaalit tunnistetaan solut uudelleen järjestetyssä

ALK

. FISH suoritettiin ja analysoitiin kahden eri patologia.

Immnunohistochemistry

Lyhyesti 3 um: n paksuisia leikkeitä leikattiin kudosnäytteet ja asetettiin poly-L-lysiinillä päällystettyihin objektilaseille. Kaikki objektilasit värjättiin ALK-aineella (klooni D5F3 Cell Signalling Technology) laimennettu 01:50 käyttäen Ventana Ultraview DAB havaitseminen pakki Ventana BenchMark XT prosessori (Ventana Medical Systems, Inc., Tucson, AZ). Antigeeni haku oli normaali automaattinen prosessi on Ventana BenchMarkilla XT 37 ° C: ssa 16 minuutin ajan. Kaikki objektilasit analysoitiin kahdella eri patologeja ja luokiteltu. Näytteet pidetään IHC-positiivinen, jos kasvain-spesifistä värjäytymistä tahansa intensiteetti ≥10% tuumorisolujen olivat läsnä.

Tilastolliset analyysit

Ellei toisin ole mainittu, että analyysit kliininen ja molekyylitason markkereita potilaan näytteissä Fisherin testiä käytettiin arvioimaan korrelaatio kategorinen muuttujia, ja Studentin t-testiä käytettiin arvioitaessa yhdistyksen välillä jakaumia hoitotulokseen. Kaikki raportoidut p-arvot ovat kaksipuolisia ellei toisin ilmoiteta, ja me pidetään koe tilastollisesti merkitsevä, jos p≤0.05. Vertailla korrelaatio FISH ja IHC havaitsemaan ALK-positiivisille potilaille käytimme kappa menetelmällä.

Tulokset

Toukokuun 2006 tammikuu 2010 yhteensä 99 potilasta aiemmin seulotaan EGFR mutaatioita kudoksen käytettävissä ALK analyysejä FISH tunnistettiin. Saatavuus kudosta FISH ja IHC analyysit arvioitiin positiivisiksi olemassaolosta FFPE lohkon tai diat sytologia arkistoon toimielimemme. Sen jälkeen tutkimus menettelyjä, ei ollut riittävästi kudosta suorittaa pätevä FISH-määritys 14 potilaalla. IHC analyysi tämä määrä oli suurempi, 19 potilasta.

Basal potilaiden ominaisuuksiin on koottu taulukkoon 1 (taulukko 1). Potilaat olivat pääasiassa adenokarsinoomat (80%) ja ei koskaan /entiset tupakoitsijat (62%) ja tasainen jakautuminen sukupuolten.

Niistä 99 kasvain näytteet seulotaan, 13 potilasta (13,1%) kanna aktivoivaa EGFR-mutaatio 7 potilasta (7,1%) oli ALK positiivisia ja 65 potilasta (65,7%) oli EGFR WT ja ALK negatiivinen, ja 14 potilaalla (14,1%) ei ollut riittävästi kudosta suorittaa voimassa FISH määritys ALK (taulukko 2). EGFR-mutaatio ja ALK positiivisuus olivat toisensa poissulkevia.

ALK positiivisten potilaiden yleensä nuorempia (56 vuotta) kuin EGFR mutantti (63 vuotta) tai EFGR WT /ALK negatiivinen (62 vuotta) potilailla, mutta näitä eroja eivät olleet tilastollisesti erilaisia. Ei ollut mitään selkeää sukupuolta esiintyvyys ALK positiivisilla potilailla (4 narttua ja 3 urosta). Viisi heistä oli tupakoimattomia (71%) ja 2 olivat tupakoitsijoita aikaan diagnoosin. Kaikki ALK-positiivisille potilaille oli kuin levyepiteelikarsinooma histologia, 5 7 potilaista oli adenokarsinooma ja muut 2 potilaista oli ei ole muutoin täsmennetty (NOS) NSCLC. Neljä 5 ALK positiivinen adenokarsinooma potilailla esiintyi vankka ja acinar kasvumalli ja lisäksi neljä viidestä osoitti kuvion, allekirjoitettu rengas soluissa oli läsnä. (Kuvio 1) B

FISH-analyysillä käyttäen hajota anturi. Positiiviset solut osoittavat fuusio punaista ja vihreää signaalia vastaavat ehjä kromosomiin, ja jakaa signaaleja, jotka osoittavat, että ALK toisiintuminen (nuolet). Immunohistokemiaallisesti ALK on NSCLC avulla D5F3 vasta-ainetta. Kasvainsolun näytä sytoplasmisen proteiinin ekspressiota, kun taas loput solut ovat täysin negatiivisia (20 x).

EGFR-mutantti potilailla oli myös pääasiassa adenokarsinooma histologia (100%) ja oli pääasiassa tupakoimattomia (71 %), mutta selvästi sukupuolten alttius naisilla (77%).

EGFR paino /ALK negatiivinen ryhmä ja EGFR paino /ALK tuntematon ryhmä ei eroa perusinsuliininsa ominaisuudet ja olivat verrattavissa ominaisuuksia koko kohortin 99 potilasta.

tutki myös paras kliininen vaste EGFR-TKI tai platinaa perustuu kemoterapiahoidon metastasoitunutta tai uusiutunut potilaat mukaan EGFR ja ALK tila. Kuten odotettua, ALK positiivinen hoidetuilla potilailla erlotinibin ollut objektiivista vastauksia; kuitenkin vain kaksi ALK positiivisten potilaiden on hoidettu EGFR-TKI: n. Ei vastauksia EGFR paino /ALK-negatiivisilla potilailla havaittiin käsiteltiin EGFR-TKI. Sitä vastoin 75% vastauksista havaittiin ryhmästä EGFR mutantti potilailla. Vastaukset ensimmäinen rivi platinaa kemoterapian oli 29% ALK positiivisten potilaiden 60% EGFR mutantti potilasta ja 40% EGFR WT /ALK negatiivinen. (Taulukko 3)

Tuolloin analyysin, seuranta-ajan mediaani on 65 potilasta, joilla on edennyt /uusiutunutta NSCLC oli 9,5 kuukautta hoidettavien joukossa edelleen elossa; tuolloin, 57 potilasta oli kuollut. Analysoimme yleinen (OS) potilaista mukaisen ALK ja EGFR genotyyppi. Mediaani OS EGFR paino /ALK negatiivinen potilasta oli 4,5 kuukautta, EGFR mutantti potilaista oli 15,7 kuukautta (p = 0,018) ja oli ei saavuteta ALK positiivisilla potilailla (p = 0,103). Vuonna ALK positiivinen ryhmässä oli neljä potilasta (yhteensä seitsemän), jotka olivat saaneet crizotinib osana hoitoa joskus aikana heidän sairautensa. (Kuva 2)

Lopuksi teimme ALK IHC kanssa D5F8 vasta-aineen 80 potilasta, joilla oli materiaalia vielä saatavissa jälkeen EGFR ja FISH analyysit (kuva 3). Kaikki 73 potilasta negatiivisiksi ALK FISH olivat myös negatiivisia IHC. Kuuden ALK FISH positiivinen potilaiden testattu IHC, 5 olivat positiivisen ja yhden negatiivisen. Tämä tulos on positiivinen ennustearvo IHC kanssa D5F8 vasta 100% ja maailmanlaajuisen hyvän sopimuksen (Kappa 0,783, alue 0,642-0,924) (taulukko 4).

Keskustelu

ALK aktivointi on tunnistettu kuljettaja kasvaimia synnyttävän muutos osajoukko NSCLC potilaiden. Uudelleenjärjestelyt joihin ALK geeni on esimerkki onkogeenisten riippuvuutta. ALK positiivisten potilaiden osoittavat pääasiallisena histologialtaan adenokarsinoomaa, ei koskaan /kevyt tupakointitavoista ja nuoremmat ikä diagnoosin. Kehityspalvelut uusien lääkkeiden kohteekseen muutos johti vaikuttava kasvainvasteita tässä potilasryhmässä. Äskettäin crizotinib, pieni molekyyli, joka estää tyrosiinia kinaasiaktiivisuutta ALK, on ​​hyväksytty hoitoon potilaille, joilla on pitkälle edennyt ALK positiivinen NSCLC jälkeen vaikuttava tuloksia testeissä [6]. Samaan aikaan, diagnostinen molekyyli FISH testi on hyväksytty Food and Drug Administration havaitsemiseksi ALK positiivisten potilaiden. Yhdessä nämä kaksi tosiasiaa, osoittavat, kuinka tärkeää on, että aikakauden tavoite hoitojen tunnistamiseksi ja vahvistaa biomarkkereiden valitsemiseksi niille potilaille sopivampi saavuttaa etua, vaikka sillä aikaisintaan kehittämiseen.

Meidän raportissa, valitsemme potilasalaryhmässä sillä perusteella, että aiemmin määrittäminen EGFR aseman olkaamme tunnistamaan potilaspopulaatiossa sopivampi satamaan ALK muutos. Tämä kriteereitä käyttäen biomarker, antaisi meille tunnistaa rikastetun populaation NSCLC potilaiden jossa molekyyli ominaisuuksia pidettiin kliinisesti merkittävä. Tässä kohortissa, esiintyvyys EGFR mutaatioita oli 13,1%, mikä on lähellä taajuutta raportoitu Espanjan Lung Cancer Group samalla väestöstä [15], joka epäsuorasti osoittaa, että valitut väestö edustaa kokonaissummaa potilaiden mitä valitsemalla EGFR seulonta rutiinikäytännön. ALK-positiivisille potilaille FISH edustaa tutkimuksessamme 7,1% koko, joka on yhtäpitävä julkaisuissa muut tutkijat tässä potilasryhmässä [7] – [9], [16] ja että ensimmäinen ALK esiintyvyys raportti kohortin pääasiassa metastaattisen Euroopan NSCLC potilaat.

Kuten aikaisemmin ilmoitettiin, ALK positiivisten potilaiden olivat pääasiassa adenokarsinoomat, joilla on alhainen edellinen tupakoinnin historiaa ja yleensä nuorempia kuin määrä NSCLC potilaiden. Siksi ALK-positiivisille potilaille ei osoittanut vasteita EGFR-TKI: n, mutta vastaavaa hyötyä kemoterapiaa kuin ALK negatiivisilla potilailla. Vaikka aiemmissa raporteissa on mukaan pemetreksedi voisi olla ensisijainen kemoterapeuttinen aine ALK-positiivisille potilaille [17], [18], koska pieni koko meidän ALK positiivisia väestöstä emme olleet omiaan suorittaa tätä analyysejä. Kiinnostavaa kyllä, kaksi ALK positiivisten potilaiden meidän serie olivat nykyisen tupakoitsijoita hetkellä diagnoosi.

Viimeaikaiset tiedot näyttävät osoittavan, että puuttuessa ALK kohdennettujen aineiden ALK positiivisuus on haitallinen ennustetekijä varten pienisoluista keuhkosyöpää [19 ]. Kuitenkin potilailla, joilla on pitkälle edennyt, ALK-positiivinen NSCLC, crizotinib hoito liittyy parantunut eloonjääminen verrattiin crizotinib-naiivi valvontaa [20]. Tutkimuksessamme olemme analized selviytymisen mukaan molekyyli- asemaan riippumatta hoidettavan crizotinib tai muiden ALK estäjä ja huomaa, että nämä ALK positiivinen NSCLC potilaat elävät yleensä pidempään kuin EGFR paino /ALK-negatiivisilla potilailla. Emme suorita analyysi selviytymisen ALK positiivisten potilaiden säätämisen crizotinib hoitoon johtuen pienestä koosta kohortin. Kuitenkin, neljä ALK positiivisten potilaiden oli hoidettu crizotinib hetkellä selviytymisen analyysin. Yhdessä nämä tulokset osoittavat, että aikakaudella ALK kohde hoitoja, ALK positiivinen pienisoluista keuhkosyöpää on parempi tulos kuin EGFR WT /ALK-negatiivisilla potilailla. Nämä tulokset olisi analized varoen, yksi valinta bias tässä tutkimuksessa on, että potilaat, joilla on huonompi suorituskyky asema kuin yleinen keuhkosyöpäpotilaita oli sisällytetty. Tärkein syy tähän bias on, että potilailla, joilla on parempi suorituskyky oli värvätty kliinisiin tutkimuksiin ja EGFR ei testattu meidän paikallinen laboratorio. Toinen mahdollinen harha on, että potilailla, joilla on huono suorituskyky o suurempi komorbiditeetteja EGFR mutaatiostatuksesta riippumatta analysoitiin koska nämä potilaat eivät sovellu saada muunlaista hoitoa kuin EGFR-TKI: n, jos EGFR mutaatio osoitettiin. Molemmat harhat voi rikastuttanut kohortin kanssa potilailla, joilla on huonompi tuloksia ja näin ollen vain 15 potilaista EGFR paino /ALK negatiivinen potilasta hoidettiin platinun kemoterapiaan.

Tärkeä kysymys Lääkäreille on tunnistaa ne potilaat sopivia käsiteltyjä crizotinib. FISH-analyysi on standardimenetelmää. Kuitenkin IHC on tutkittu eri ryhmien yritetään on tunnistaa paremmin maailmanlaajuisesti sopiva menetelmä seulontaan ja diagnosointiin ALK positiivisten potilaiden. Ensinnäkin vasta, aiemmin käytetty diagnosointiin haemathological malignances, osoitti ole tarpeeksi herkkyyttä voidaan soveltaa ALK positiivisten potilaiden [12]. Koska ne, kaksi herkkä strategioita on tutkittu. Yksi niistä on parantaa testi herkkyyttä ja kehittää IHC pisteet valitsemiseksi potilaille FISH-analyysi [21], [22]. Toinen lähestymistapa, on kehitetty suuri herkkyys ja spesifisyys ALK vasta johtaneet tunnistaa ALK positiivisten potilaiden itse [23], [24]. Tutkimuksessamme käytimme uusi suuri herkkyys ja spesifisyys monoklonaalinen vasta D5F3 kohortin valittujen potilaiden NSCLC rinnalla FISH tunnistamiseksi ALK positiivisten potilaiden. Huomasimme, että kaikki ALK positiivisten potilaiden IHC olivat myös positiivisia FISH. Kuitenkin yksi FISH positiivinen potilas johtanut negatiivinen IHC. Tämä väärä negatiivinen potilaalla ei ole enää kudosten saatavilla toistaa analyysia, mutta oli aikaisemmin palvelukseen crizotinib tutkimuksessa toisella FISH positiivinen analyysin keskeinen lab tutkimuksen. Yhdessä voisimme päätellä, että positiivisen IHC analyysin kanssa D5F3 monoklonaalisella vasta-aineella pitäisi riittää valita potilaalle saada käsittelemällä ALK estäjä kuin mitään potilas positiivinen IHC oli todettu olevan negatiivinen FISH. Kun kliinikon tulisi harkita suorittaa FISH analyysi potilaalla, jolla on negatiivinen tulos IHC, tai päinvastoin, on kysymys, että olisi käsiteltävä tulevaisuudessa. Vielä, mikä on tarkoitettu kala testin positiivisuus alle 15% soluista tai mitä pitäisi tehdä niille potilaille, joilla ei ole yhdenmukaisia ​​tuloksia IHC ja kalat ovat joitakin koskevat kysymykset voidaan standardoida tulevaisuudessa.

Lopuksi tutkimuksessamme osoitimme, että esiintyvyys ALK positiivisten potilaiden on 7,1% valkoihoisia valitun populaation NSCLC FISH. Aikakaudella ALK kohdennettujen hoitojen ALK positiivisten potilaiden on eri kliinisiä piirteitä ja parempaa prognostiset kuin EGFR WT ja ALK negatiivisilla potilailla. IHC kanssa D5F3 monoklonaalinen vasta ALK on tarkka menetelmä havaitsemiseksi ALK positiivinen pienisoluista keuhkosyöpää.