Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Proteiinikinaasit ovat keskeisiä säätelijöitä solun prosesseja ( kuten leviämisen, apoptoosin ja hyökkäys), jotka ovat usein vapautettu ihmisen syövissä. Niinpä kinaasi geenit ovat ensimmäisinä analysoitava järjestelmällisesti ihmisen kasvaimissa johtaa havaintoon, että monet onkogeenien vastaavat mutatoitunut kinaasien. Useimmissa tapauksissa geneettiset muutokset kääntää konstitutiivisesti aktiivisen kinaasin proteiineja, jotka voivat olla terapeuttista kohdentamista. Kasvaimet haima aggressiivisia kasvaimet, joille ei ole tehokkaita terapeuttisia strategia on tällä hetkellä saatavilla.

Menetelmät /Principal Havainnot

Teimme DNA-sekvenssianalyysi valittuihin 35 kinaasin geenien paneeli 52 haiman eksokriinisten kasvaimet, mukaan lukien 36 haiman adenokarsinooma, ja 16 ampulla ja Vater syöpä. Muiden muutosten löysimme somaattiset mutaatiot

ATM

,

EGFR, EPHA3, EPHB2

, ja

KIT

, joista yhtäkään ei ole aikaisemmin kuvattu syövissä.

Johtopäätökset /merkitys

Vaikka muutokset tunnistettu vaativat vielä kokeellista arviointia, lokalisointi kuluessa määritellyn proteiinidomeeneja ilmaisee toiminnallista merkitystä useimmat niistä. Osa mutatoidun geenien, kuten tyrosiini- kinaasien

EPHA3

ja

EPHB2

, ovat selvästi vastaanottavaisia ​​farmakologisen väliintulon ja voisivat edustaa uusia terapeuttisia tavoitteet näille parantumaton syöpien.

Citation : Corbo V, Ritelli R, Barbi S, Funel N, Campani D, Bardelli A, et al. (2010) Mutaatiotutkimukset Profilointi kinaasien Ihmisen kasvaimet Haiman alkuperä Tunnistaa Candidate Cancer Geenit Duktaalinen ja Vaterin Ampulla Karsinoomat. PLoS ONE 5 (9): e12653. doi: 10,1371 /journal.pone.0012653

Editor: Hana Algul, Technische Universität München, Saksa

vastaanotettu: toukokuu 20, 2010; Hyväksytty: 12 elokuu 2010; Julkaistu: 08 syyskuu 2010

Copyright: © 2010 Corbo et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat avustuksia Associazione Italiana Ricerca Cancro (AIRC, https://www.airc.it/), Fondazione CariParo (www.fondazionecariparo.it), Fondazione Monte dei Paschi di Siena (https://www.fondazionemps.it /); Italian terveysministeriön, Rooma, Italia (https://www.salute.gov.it/); Euroopan yhteisön FP VI Program Grant PL018771 (MolDiagPaca, https://www.moldiagpaca.eu/). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Proteiinikinaasit ovat keskeisiä säätelijöitä erilaisia ​​ja monimutkaisia ​​solun prosessit, kuten solusyklin etenemistä, erilaistuminen, apoptoosi ja hyökkäys [1] – [4]. Proteiinikinaasi täydennys (määritellään ”kinome”) edustaa merkittävää osa ihmisen perimän, ja äskettäin Manning

et al

. järjestäytynyt se johonkin dendogram sisältävä yhdeksän laajaan ryhmään geenejä [5]. Muutoksia on kinaasigeenissä voi johtaa poikkeava proteiinin aktiivisuutta, joka voi olla rooli syövän taudin alkamisen ja etenemisen [6], [7]. Nämä muutokset, kuten pistemutaatioita ja deleetioita domainia, usein johtaa konstitutiivisesti aktivoitua kinaasien, jotka ovat mahdollisia terapeuttisia kohteita syövän hoitoon. Itse asiassa on useita pienimolekyylisiä estäjiä tällä hetkellä käytössä tai arvioidaan kliinisissä kokeissa [8] – [10]. Mutaatiot kinaasigeenissä voi myös johtaa sen inaktivaatioon, kuten geenien mukana ylläpitoon genomin vakautta [11], [12] tai ohjaamalla solu-solu viestintä [13]. Viime vuosina laajaa sekvenssianalyysillä kasvaimen genomien ja erityisesti kinaasigeenissä perhe on tehty eri epiteelikasvaimissa, jotta voidaan määrittää eri somaattisista mutaatioista [14] – [22]. Nämä teokset osoittavat osajoukko kinaasin geenien, joilla tiedetään tai mahdollisten suhde kiinteiden kasvainten kehittymiseen, koska ne näyttävät melko usein mutaatioita.

läsnäolon määrittämiseksi mutaatioiden mahdollisesti merkitystä terapeuttisina kohteina, teimme DNA-sekvenssianalyysi valittuihin kinaasin geenien paneelia kaksi erilaista haiman kasvaimet, mukaan lukien haiman adenokarsinooma (PDAC), ja ampulla ja Vater syöpä (AVC). Näiden kasvaintyypeille ole tehokkaita terapeuttisia aineita ovat tällä hetkellä saatavilla [23], [24]. Esimerkiksi PDAC on erittäin aggressiivinen ja vastustuskykyinen tavanomaisille ja kohdennettuja terapeuttisia aineita, jolloin synkkä 5 vuoden pysyvyys on 3%: sta 5% [24]. Tässä esittelemme mutaatioprosessiin profiilia 35 geenien kuuluvan kinaasigeenissä perheitä PDAC ja AVC. Erityisesti löysimme kuin synonyymi mutaatiot seuraavissa geeneistä:

ATM, BRAF, EGFR, EPHA3, EPHB2, erbB2, FGFR2, KIT

, ja

PIK3CA

. Näistä muutoksista oli sekä hyvin tunnettu mutaatiot ja vaikuttavia mutaatioita aminohappo ei aiemmin todettu mutatoitunut ihmisen syövissä.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Kaikki tutkimus joihin ihmisen osanottajat hyväksyi yliopiston ja sairaalan Trustin Institutional hallituksen. Tietoinen suostumus saatiin kirjallinen elävistä potilaista tai sukulaisten kaikkien kudosten Tässä tutkimuksessa käytetyt.

Näytteitä

paneeli 52 haimasyövän näytteitä saatiin kasvain pankin ylläpitämä laitos Patologian osasto anatominen Pathology, University of Verona (Verona, Italia), lukuun ottamatta kuusi haiman adenokarsinooma näytteitä Dr. Daniela Campani (Pisan yliopisto). Näytteitä kerättiin mukaan eettisiä vaatimuksia ja asetusten tarkastuslautakunta sekä Veronan yliopiston (Verona, Italia) ja University of Pisa (Pisa, Italia). Tämä paneeli mukana 36 PDAC ja 16 AVC (katso täydentävä taulukko S1 yksityiskohtaisia ​​kliinisiä tietoja syövän näytettä). 23 PDAC kasvaimia siirrostettiin in vitro, kuten solulinjojen tai nude-hiirten ksenograftien poistaa kontaminoivat ei-neoplastisten solujen [25]. Solulinjat kerättiin talteen enintään kuusi

in vitro

käytäviä nukleiinihapon valmistelu. Kolmetoista PDAC näytteet aiemmin kuvattu ihmisen haimasyöpäkasvainsolulinjo- linjat [26] (ks täydentävä taulukko S2 lisätietoja). Kudosnäytteet arvioitiin sisältävän enemmän kuin 80% kasvaimen soluja käytettiin. Perimän DNA eristettiin käyttäen DNeasy veren ja kudosten (Qiagen, Milano, Italia). Hyväksytty normaali DNA käytettiin määrittämään, ovatko mutaatiot olivat esimerkiksi somaattisten tai ituradan. Ei hyväksyttyjä normaalissa näytteessä oli käytettävissä 13 pysyviä solulinjoja mukana tutkimuksessa. Genomi-DNA oli edelleen eristää sen jälkeen, kun kryostaatti rikastamiseen jäädytetystä kudoksista ensisijaisen PDAC mutaatioiden varmistamiseksi lopulta tunnistettu vastaavan ksenosiirrettyjä kasvaimia.

Geenit, PCR ja sekvensointi

Kolmekymmentä viisi geeniä, jotka kuuluvat proteiinikinaasi geeniperheen valittiin sen perusteella, niiden korkea tiheys mutaatioita ihmisen syövissä muu kuin haiman arvioidut aikaisempiin töihin [14] – [22]. Nämä geenit olivat:

AKT2, ATM, ATR, AURKC, BRAF, BRD2, DDR1, DYRK2, EGFR, EPHA3, EPHA5, EPHB6, EPHB2, erbB2, erbB4, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, FLT1, FLT3, FRAP1 , KDR, KIT, MAP2K4, MET, NTRK2, NTRK3, PAK4, PDGFRA, PDPK1, PI3KCA, RPS6KC1, STK11, TGFBR2

. Amplifikaatioalukkeet ja sekvensointi DNA suunniteltiin käyttäen Primer3 ohjelmaa (https://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi) ja viittaavat National Center for Biotechnology Information (NCBI, http: //www.ncbi.nlm.nih.gov) viitesekvenssin tiedostot Gene ja Transcript ID (RefSeq) annetaan täydentäviä taulukossa S3. PCR-alukkeet suunniteltiin monistamaan valittu eksonit ja reunustavat intronisekvenssit, mukaan lukien silmukointi luovuttajan ja vastaanottajan alueilla. PCR-tuotteet ~400 emäsparin pituinen, jossa on useita päällekkäisiä amplimerit suuremmille eksonit. PCR-olosuhteet, puhdistus, ja suora sekvensointi on kuvattu aiemmin [14].

Tietojen analysointi

Sequence eroista NCBI referenssijaksoa tunnistettiin manuaalisella tarkastus linjassa elektroferogrammit avustaa Mutaatio Surveyor ohjelmistopaketti (SoftGenetics, State College, PA). Geneettinen muutos tunnistettu oli viittauksia varianttiin tietoja NCBI SNP tietokanta, Ensemble Genome Browser (https://www.ensembl.org), Swiss-Prot (https://ca.expasy.org) ja GeneBankissa tietokannat https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank), COSMIC tietokanta (https://www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic), ja kirjallisuus. Lisäksi ei-synonyymejä geneettisiä muutoksia, havaitsimme lukuisia hiljainen sekvenssin muunnelmia, jotka analysoitiin käyttämällä ASSP (https://www.es.embnet.org/~mwang/assp.html) sekvenssianalyysillä työkalu jättää että arvoituksellinen jatkosta sivustot saattaa aktivoitua. Nämä hiljaiset mutaatiot ei ole esitetty ja edelleen analysoitiin täällä. Kaikki uudet sekvenssi data on talletettu GenBank.

Tulokset ja keskustelu

suoritettu mutaatiomuutoksilla profilointi 35 kinaasin geenien paneelia 36 PDAC, ja 16 AVC, kuten primaarikasvainten, ksenografteja ja solulinjat. Kullekin geenille, kaikki eksonit, jotka somaattisen mutaation oli aiemmin tunnistettu analysoitiin. Eksonin alukkeet suunniteltiin monistamaan ja sekvenssin koodaavan alueen, ja vähintään 15 introni emästä sekä 5 ’että 3’-päähän, mukaan lukien silmukointi donori- ja akseptorikohdat. Kaikkiaan 8321 PCR-tuotteiden, ulottuu yli 3 Mb kasvaimen genomisen DNA: n, synnytettiin ja altistettiin suoralla sekvensoinnilla. 147 eksonit uutettu, 92% kalustettu hyvä sekvenssi jälkiä (eli yli 90% emäksistä kohdealueen oli Phred pisteet (määritelty -10 [log

10 (raaka per-base error)]) ja vähintään 20 vähintään kolme neljäsosaa näytteistä analysoidaan), ja siksi analysoitiin etsivät spesifisiä mutaatioita. Muutokset aiemmin kuvattu yhden emäksen monimuotoisuus (SNP) jätettiin pois lisäanalyysiä. Sen varmistamiseksi, että lopulta havaittu mutaatiot eivät PCR tai sekvensoinnilla esineitä, amplikoneihin olivat itsenäisesti monistettiin uudelleen ja uudelleen sekvensoitiin vastaavassa kasvaimia. Kaikki todennetut muutokset uudelleen sekventoituja rinnakkain vastaaviin normaaleihin DNA, erottaa somaattisten mutaatioiden ja SNP ei ole aiemmin kuvattu.

Tämä lähestymistapa johti tunnistamiseen yhteensä 10 erilaista kuin synonyymi mutaatiota (taulukko 1) . Näistä mutaatioista, 9 oli missense; yksi oli pieni lisäys, kun taas mitään mutaatioita löydettiin silmukointikohdista tai UTR alueille (taulukko 1).

Mitä PDAC analysoitiin yhteensä 36 näytettä, joista 13 otettiin käyttöön solu linjat. Yhteensä 7 eri missensemutaatioita vaikuttavat seuraaviin geeneistä havaittiin:

BRAF, EGFR, EPHA3, EPHB2, FGFR2, KIT, PIK3CA

(taulukko 1). Näiden mutaatioiden

FGFR2

P582L

ja

PIK3CA

H1047R tunnistettiin adenokarsinooma solulinjoissa (PT45 ja GER, vastaavasti), joista ei vastaaviin normaaleihin näyte oli saatavilla. Siksi somaattinen tila Näiden mutaatioiden ei ole voitu varmistaa.

PIK3CA

H1047R mutaatio on aiemmin liittyvät syöpään ja laajalti tunnettu [27] – [30]. Vaikka mutaatiot

FGFR2

on aiemmin löydetty ihmisen syövissä, [16], [31], [32], ei ole mutaatioita tämän geenin on raportoitu liittyvän haimasyöpä tasalla. Meidän luonnehdinta perustettu haimasyöpäkasvainsolulinjo- linjojen kanssa suhteessa geneettisiä muutoksia tässä potentiaali syövän tavoite perhe vihdoin tarjoaa sopivan solun järjestelmiä tietojen tulkinta, tavoite validointi sekä prekliinisissä että kehittää uusia kohdennettuja syöpälääkkeiden.

BRAF

G464V on aiemmin liittyvät syöpään ja tunnettu [33]. Havainto on

BRAF

mutaatio PDAC on jotenkin odotettavissa, koska siihen liittyvät polku muuttuu lähes kaikissa haiman adenokarsinooman [34], vaikka yksittäiset

BRAF

mutaatiot ovat melko harvinaisia ​​tämäntyyppisessä syöpä ja yleensä esiintyy kasvaimissa, joissa ei ole

KRAS

mutaatioita [35], [36]. Mielenkiintoista, mutaatio löysimme oli homotsygoottinen tilassa (kuvio 1 B), jonka ei odoteta proteiinia, joka toimii määräävässä tavalla. Sama missense somaattiset mutaatiot

EPHB2

(D283H) havaittiin kahdessa eri PDAC näytettä (kuvio 1A), joista yksi näytetään myös missense-mutaatio

EPHA3

(K207N). Mutaatiot tunnistettiin

BRAF

ja

EPHB2

analysoitiin uudestaan ​​vastaavaan primäärikasvaimissa (Täydennyskuvio S1) edelleen vahvistaa läsnäoloa mutaatioiden ja siten sulkea pois sitä mahdollisuutta, että geneettisiä muutoksia voitaisiin olla seurausta siirteen nude-hiirissä. Erityisesti sekvenssianalyysi ensisijaisen syövän vastaava ksenograftin 377 (taulukko 1) vahvisti myös homotsygoottisia tila mutaatiosta

BRAF

geenin. Eph reseptorit muodostavat suurimman alaryhmään transmembraaninen tyrosiinikinaasireseptorit ja ovat ensisijainen mukana prosessissa soluadheesion ja siirtolaisuuden kehityksen aikana, homeostaasin ja tauti [13], [37]. Tässä tutkimuksessa raportoimme mutaatioprosessiin profiilia neljä tämän perheen jäseniä (

EPHA3

,

EPHA7

,

EPHB2

, ja

EPHB6

), joiden on todettu usein mutatoitunut tai vaiennettu aiemmissa tutkimuksessa ihmisen syövistä [13]. Esimerkiksi mutaatiot EPHB2 joka oletettavasti johtaa aktiivisuuden menetykseen on löydetty peräsuolen ja eturauhasen syöpä [38], [39], kun taas mutaatiot

EPHA3

on kuvattu melanooma, keuhkosyöpä ja peräsuolen syöpä [14] – [16], [19]. Tähän mennessä ei ole mutaatioiden

EPHB2

on raportoitu liittyvän haimasyöpä. Muuten hyvin viime työtä syvästi analysoi proteiinia koodaavan geenien haiman adenokarsinooman raportoitu esiintymisen introni- pistemutaatio

EPHA3

[34]. Mutaatiot

EPHB2

ja

EPHA3

löysimme tässä tutkimuksessa lokalisoitu evoluution konservoitunut Cys-rikkaan solunulkoisen alueen, joka on ajateltu olevan mukana määritettäessä sitoutumisaffiniteetti niiden ligandit sekä tetramerization aktivoitujen reseptorien [40]. Itse asiassa nämä aminohapon muutokset (D283H ja K207N) voivat vaikuttaa sitoutumiseen reseptoreiden niiden ligandit ja siten mahdollisesti häiritä normaalia signalointi cascade. Lisäksi yhä enemmän näyttöä viittaavat rooliin efriini reseptorin /efriini järjestelmä invasiivisuus syövän sekä sen potentiaalinen merkitys terapeuttisen kohdentamiseen [41]. Mutaatioita EGFR (L815F), jotka vaikuttavat Kinaasidomeenia päässeen vain yksi PDAC näytteiden mukaan esiintyvyys on alhainen EGFR somaattisten muutoksia löytyi haimasyövän muiden [42], [43]. Lopuksi, raportoimme ensimmäistä kertaa somaattisen mutaation kinaasidomeenia KIT (R740K) in PDAC syöpä.

KIT

, myös nimetty

CD117

, usein vaikuttaa aktivoimalla mutaatiot ruoansulatuskanavan stroomakasvaimet [44], [45], mikä edustaa loogista terapeuttinen kohde tämän maligniteetti [46 ]. Vaikka useat tutkimukset osoittavat osallistuminen KIT haiman Karsinogeneesin ei somaattisia mutaatioita on aiemmin havaittu [47] – [49].

Bottom

, kromatogrammi sekvenssin kasvaimen näyte;

Top, kromatogrammi sovitetun normaalin. Nuolet osoittavat sijainnin missensemutaatio. Numero sekvenssin yläpuolella jäljet ​​ovat osa ohjelmistoa lähdön. Nukleotidi- numerointi käyttää A ATG-siirto aloituspaikasta kuin nukleotidin +1, joka perustuu viitesekvenssit annetaan Täydentävä taulukossa S3. A, mutaatio PDAC; B, mutaatio PDAC; C, mutaatio AVC.

Lyhenteet:

g., Genomisen sekvenssin; p., proteiinisekvenssi.

osalta AVC analysoitiin yhteensä 16 näytettä, joista 15 primaarikasvaimista ja yksi solulinja. Olemme löytäneet yhteensä neljä erilaista somaattisista mutaatioista, joista kolme oli missense ja yksi oli pieni lisäys, vaikuttavat seuraavat geenit (taulukko 1):

ATM, EGFR, EPHA3

, ja

ErbB2:

. Somaattiset mutaatio

ErbB2

V777L on aiemmin löydetty ihmisen syövissä [50], [51]. Lisäksi huolellinen analyysi

ErbB2

järjestyksessä elektroferogrammi osoitti, että piikin mutaatio oli vähäinen verrattuna villin tyypin vastine (kuvio 1 C). Tämä viittaa siihen esiintyminen tämän variantin vain alapopulaatio kasvainsolujen näytteiden. Yksi mielenkiintoisimmista muutokset löydettiin oli insertio esiintyy eksonissa 22 EGFR, joka johtaa ennenaikaiseen lopetuskodoniin aminohappo 896 katalyyttisen domeenin sisällä proteiinin. Tämä mutaatio kuitenkin on vielä arviointi, jossa määritetään sen toiminnallinen merkitys. Mielenkiintoista on, että

EPHA3

K207N mutaatio on myös havaita PDAC näytteessä. Tämä mahdollisesti viittaa osittain sama spektri geneettinen muutos taustalla nämä erilaiset haimasyöpä alatyyppejä elleivät nämä mutaatiot tapahtuvat sattumalta.

Johtopäätöksenä tässä tutkimuksessa tunnistettiin 10 erilaista mutaatiota vaikuttavista 9 kinaasi geenien haiman adenokarsinooma ja ampulla ja Vater syöpiä. Mitään varmaa kuvio somaattisten mutaatioiden tunnistettiin kullekin kasvain tyypit ja vain yksi muutos (

EPHA3

K207N) osoitti päällekkäisyyttä kasvaintyypeissä analysoitu. Yhteisymmärryksessä tuloksia aiemmista tutkimuksista havaitsimme matalataajuista spesifisten somaattisten mutaatioiden kinaasi geeni [15], [16], [18] – [22], [34]. Lukuun ottamatta

FGFR2

ja

PIK3CA

mutaatioita, jotka vaikuttavat ihmisen tuumorisolulinjoja, loput 8 mutaatiot löydettiin näytteistä peräisin ensimmäisen kasvaimia ja oli somaattisen alkuperää arvioituna sekvensointi Hyväksytty normaalia DNA: ta (tuloksia ei ole esitetty). Mitä PDAC äskettäin Jones

et al.

Suoritetaan kattavan geneettinen analyysi, jotta voidaan määrittää määritellyistä osittain päällekkäisiä signalointireittien jotka muutettiin, vaikka muutokset vaikuttavat yksittäisen komponentin vaihteli suuresti välillä yksittäiset kasvaimet [34]. Itse asiassa yksikään somaattisista mutaatioista kuvataan Jones

et ai

havaittiin analyyseihin ja päinvastoin. Meidän ja aiemmat tulokset viittaavat siis että syvä geneettinen analyysi kunkin geenin voitaisiin suorittaa suuren joukon haiman adenokarsinooma näytteitä purkaa panos tietyn geenin haiman kasvaimien syntyyn.

Lopuksi mikään muutoksista löysimme primaarikasvainten kuvattu aikaisemmin syövissä. Nämä muutokset edellyttävät lisää kokeellista arviointia määrittää niiden toiminnallista merkitystä ja joissakin tapauksissa saattaa osoittautua edustaa matkustajan sijaan kuljettajan mutaatioita. Toisaalta, lokalisointi määrätyissä proteiinidomeeneja osoittaa toiminnallista merkitystä useimmissa geneettisiä muutoksia havaittu. Lisäksi mutaatiot vaikuttavat geenit, jotka ovat mahdollisesti merkitystä tavoitteeksi farmakologisen toimenpiteistä saatavan syöpätyypit. Se on kyse lupaavimpia muutokset löysimme vaikuttavia

EPHA3

ja

EPHB2

geenien haiman adenokarsinooma ja AVC näytteitä, koska ne ovat kehittymässä rooli houkutteleva terapeuttinen kohde syövän [41].

tukeminen Information

Kuva S1.

Esimerkkejä somaattisten mutaatioiden tunnistettu ensisijainen PDAC näytteissä. Kromatogrammit viittaavat sekvenssin kasvainnäytteet. A, homotsygoottinen mutaatio BRAF (g.143148 G T, p.G464V). B, heterotsygoottinen mutaatio EPHB2 (g.152108 G C, p.D283H). Nuolet osoittavat sijainnin missensemutaatio. Numerot sekvenssin yläpuolella jäljet ​​ovat osa ohjelmistoa lähdön. Nukleotidi- numerointi käyttää A ATG-siirto aloituspaikasta kuin nukleotidin +1, joka perustuu viitesekvenssit annetaan Täydentävä taulukossa S3.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0012653.s001

(1,35 MB TIF)

Taulukko S1.

kliiniset tiedot haimatuumorien mukana tutkimuksessa.

doi: 10,1371 /journal.pone.0012653.s002

(0,06 MB DOC) B Taulukko S2.

Haiman kasvainsolulinjoja mukana tässä tutkimuksessa.

doi: 10,1371 /journal.pone.0012653.s003

(0,03 MB DOC) B Taulukko S3.

proteiinikinaasi geenejä ja alukkeita, joita käytetään PCR-monistukseen ja sekvensointiin.

doi: 10,1371 /journal.pone.0012653.s004

(0,24 MB DOC)