Krooninen sairaus

tiivistelmä

peräsuolen syöpä on yksi yleisimmistä syöpien yli viisikymmentä prosenttia potilailla on edennyt pitkälle. Retinoiinihappo on metaboliitti vitamiini ja on välttämätön normaalille solujen kasvua ja poikkeavaa retinoiinihappo aineenvaihdunta on sekaantunut tuumorigeneesiä. Tämä tutkimus on profiloitu ilmentymistä retinoiinihapon metaboloivien entsyymien avulla hyvin tunnettu peräsuolen syöpä kudos microarray sisältävän 650 ensisijainen peräsuolen syöpiä, 285 imusolmuke etäpesäke ja 50 normaalin paksusuolen limakalvon näytteitä. Immunohistokemia suoritettiin kudoksen mikrosirulla käyttäen monoklonaalisia vasta-aineita, jotka on kehitetty, että retinoiinihappo metaboloivia entsyymejä CYP26A1, CYP26B1, CYP26C1 ja lesitiiniä retinolia asyylitransferaasilla (LRAT) käyttäen puolikvantitatiivinen pisteytyssysteemin arvioida ilme. Kohtalainen tai voimakas ilmentyminen CYP26A1was havaittiin 32,5% syövistä verrattuna 10%: iin normaalista paksusuolen epiteelin näytteistä (p 0,001). CYP26B1 kohtalaisesti tai voimakkaasti ilmaistuna 25,2% kasvainten ja oli merkittävästi vähemmän ilmentyy normaaleissa paksusuolen epiteelissä (p 0,001). CYP26C1 ei ollut esitetty mitään näytteessä. LRAT osoitti myös merkittävästi lisääntynyt ilmentymistä ensisijainen kolorektaalisyövissä verrattuna normaaliin paksusuolen epiteelin (p 0,001). Vahva CYP26B1 ilmentyminen oli merkitsevästi yhteydessä huonoon ennusteeseen (HR = 1,239, 95% CI = 1,104-1,390, χ

2 = 15,063, p = 0,002). Vahva LRAT liittyi myös huonompi tulos (HR = 1,321, 95% CI = 1,034-1,688, χ

2 = 5,039, p = 0,025). Vuonna mismatch korjaus taitavia kasvaimia vahva CYP26B1 (HR = 1.330, 95% CI = 1,173-1,509, χ

2 = 21,493, p 0,001) ja vahva LRAT (HR = 1,464, 95% CI = 1,110-1,930, χ

2 = 7,425, p = 0,006) olivat myös yhteydessä heikompaan ennusteeseen. Tämä tutkimus on osoittanut, että retinoiinihapon metaboloivia entsyymejä CYP26A1, CYP26B1 ja LRAT yliekspressoituvat merkittävästi peräsuolen syövän ja että CYP26B1 ja LRAT liittyvät merkittävästi ennustetta sekä koko kohortti ja niissä kasvaimia, jotka ovat yhteensopimattomuuden korjauksen taitavia. CYP26B1 oli itsenäisesti ennustetekijöiden Monimuuttuja malli on sekä koko potilaan kohortin (HR = 1,177, 95% CI = 1,020-1,216, p = 0,026) ja mismatch korjaus taitavia kasvaimet (HR = 1.255, 95% CI = 1,073-1,467, p = 0,004).

Citation: Brown GT, Cash BG, Blihoghe D, Johansson P, Alnabulsi A, Murray GI (2014) Expression ja Prognostic merkitys retinoiinihapon metaboloivien entsyymien in peräsuolen syövän. PLoS ONE 9 (3): e90776. doi: 10,1371 /journal.pone.0090776

Editor: Natasha Kyprianou, University of Kentucky College of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 21 marraskuu 2013; Hyväksytty 4 helmikuuta 2014; Julkaistu: 07 maaliskuu 2014

Copyright: © 2014 Brown et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tutkimus rahoittivat Aberdeenin yliopiston Development Trust (https://www.abdn.ac.uk/giving/) ja Encompass (https://www.encompass-scotland.co.uk/). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Graeme Murray on tieteellinen neuvonantaja selkärankaisten vasta-aineet, jotka ovat osallistuneet tämän tutkimuksen. Ei palkkion on ollut tai on saanut tähän tehtävään eikä hän omista osakkeita tässä yrityksessä. Beatriz Cash ja Ayham Alnabulsi ovat työntekijöitä selkärankaisten vasta-aineita. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen PLoS One politiikkaa jakaa tietoja ja materiaaleja.

Johdanto

peräsuolen syöpä on yksi yleisimmistä tyyppisiä pahanlaatuisia kasvaimia, joiden 5 vuotta selviytyminen on edelleen noin viisikymmentä prosenttia käyttöönotosta huolimatta suoliston syöpäseulontaohjelmia [1]. Vaikka molekyyli patogeneesi tämän tyyppisen tuumorin on yhä ymmärretään ja määritellään erityisesti alkuvaiheessa paksusuolen syövän kehittymisen, joissa molekyyli muutokset on rajattu suurella yksityiskohtaisesti [2] – [4]. On kuitenkin edelleen selvästi tarpeen tunnistaa biomarkkerit kolorektaalisyövästä lukien prognoosi-, ennakoivaa ja diagnostisia markkereita [5] – [15].

Retinoiinihappoa (RA) on metaboliitti vitamiini (retinoli), joka suorittaa olennaisia ​​toimintoja normaalissa solun kasvua ja erilaistumista ja väärin säädellystä retinoiinihappo aineenvaihdunta on liitetty tuumorigeneesiä [16], [17]. Retinoideja termi, jota käytetään kuvaamaan luonnollisia tai synteettisiä yhdisteitä esittää rakenteellista tai toiminnallista yhdennäköisyys retinolia, on merkittävä roolinsa solujen kasvuun, erilaistumiseen ja apoptoosin [16]. Aktiivisimmat muoto RA, all-trans retinoiinihappo (ATRA), on geeni sääntelytehtävä ja sillä on ratkaiseva merkitys kehittämisessä useiden elinten. 4-okso-9-cis-retinoiinihappo (9-cis-RA) ja 4-okso-13-cis-retinoiinihappo (13-cis-RA) ovat stereoisomeerit ATRA ja niillä on myös tärkeä rooli RA signalointi . Jotkut retinoidit hallussaan syövänvastaisia ​​ominaisuuksia, jotka on jo käytetty hyväksi hoidettaessa useiden syöpätyyppien, kuten kohdunkaulan syövän ja promyelosyyttinen leukemia.

solunsisäinen käsittely retinolin sisältää lesitiiniä retinoli asyyli transferaasi (LRAT), joka on vastuussa esteröinti retinolia [18], [19], kun taas hydroksylaatio retinolin suoritetaan retinoidihappoa hydroksylaasien (CYP26A1, CYP26B1, CYP26C1), jotka ovat kaikki jäsenet sytokromi P450 (P450) entsyymien perheen, [20], [21] .

kolme jäsentä CYP26 perhe ovat kaikki pystyvät metabolisoivien aTRA osaksi vähemmän biologisesti aktiivisia 4-hydroksi, 4-okso- ja 18-hydroksi-RA välituotteiden [22] – [24], ja jossa, 4-okso-RA on yleisin metaboliitti [16]. Vaikka aikaisemmat tutkimukset ovat tutkineet P450 ilmentyminen kasvaimissa ja esitetään kasvainten valikoiva ilmentyminen yksittäisten P450 -entsyymien etenkin CYP1B1 [25] CYP26 perheen P450 -entsyymien on saanut vain vähän ennen huomiota suhteessa niiden ilmentyminen kasvaimissa.

Tämä tutkimus on profiloitu ilmaus retinoiinihapon metaboloivia entsyymejä CYP26A1, CYP26B1, CYP26C1 ja LRAT käyttäen hyvin tunnettu peräsuolen syövän kudoksen microarray monoklonaalisilla vasta-aineilla CYP26A1, CYP26B1, CYP26C1 ja LRAT vastaavasti, jotka on kehitetty, ja tunnettu siitä, niiden käyttöä immunohistokemia formaliinilla kiinteä vaha upotettu kudosta.

Materiaalit ja menetelmät

monoklonaalisia vasta-aineita

monoklonaalisia vasta-aineita CYP26A1, CYP26B1, CYP26C1 ja LRAT kehitettiin yhteistyössä selkärankaisten vasta-aineet Ltd (Aberdeen, Iso-Britannia ) käyttäen synteettisiä peptidejä. Peptidit sisällä on mahdollinen proteiinin sekvenssit tunnistettiin, jotka olivat antigeeninen, ulkopinnalle ja ainutlaatuinen kohdeproteiiniin. Aminohapposekvenssit ja sijainti proteiinit on esitetty taulukossa 1. Peptidit saatiin Almac Sciences Ltd, (Edinburgh, UK) ja konjugoitu yksittäin ovalbumiinille varten immunisointia ja naudan seerumialbumiinia varten ELISA [26]. Hiirien, tuotannon hybridoomasolut ja ELISA seulontaa suoritettiin oleellisesti, kuten aikaisemmin on kuvattu [26], paitsi että antigeeni annettiin ihon alle. Hybridoomat kloonattiin rajoittavalla laimennuksella, kunnes yhden ELISA positiivinen pesäke kasvatettiin 96-kuoppaiselle levylle. Yksittäiset solulinjat sitten kasvatettiin suureen solutiheyteen valmistamiseksi vasta-aineen varastossa, jota käytettiin myöhemmin niiden kuvaamista immunoblottauksella ja immunohistokemiallisesti.

immunoblottauksella

kokosolulysaateista soluista (ihmisen alkion munuaissoluja) jotka yli-ilmentävät CYP26A1, CYP26B1, CYP26C1 ja LRAT käytettiin positiivisina kontrolleina immunoblottauksella kun lysaatit soluista, jotka sisältävät ainoastaan ​​vektorilla, käytettiin negatiivisina kontrolleina. CYP26A1 Solulysaatti ja sen ohjaus ostettiin Abnova (Taipei, Taiwan), kun taas CYP26B1, CYP26C1 ja LRAT sisältävät solulysaateista ja niitä vastaavat verrokit saatu (Novus Biologicals, Cambridge, UK). Solulysaateista (5 ug proteiinia /kaista) erotettiin elektroforeesilla NuPAGE 4-12% Bis-Tris geeleillä (Fisher Scientific, Loughborough, UK). Proteiinin siirto membraanit blokattiin 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa-Tween-20 (PBST), joka sisälsi 1% (w /v) rasvatonta maitojauhetta. Membraaneja inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa CYP26A1 (1/5 laimennos), CYP26B1 (1/2 laimennos), CYP26C1 (1/2 laimennos) tai LRAT (1/2 laimennos) monoklonaalisia vasta-aineita laimennettiin PBST: hen. Membraanit pestiin (6 kertaa) 1 tunnin ajan 1% rasvatonta maitoa. Kalvot jälkeen hybridisoitiin 1 tunti koettimena, jossa sekundäärinen vasta-aine oli konjugoitu piparjuuriperoksidaasiin konjugoidun anti-hiiri-IgG: tä (1/2000, Sigma-Aldrich, Dorset, UK). Sitten membraanit pestiin (6 kertaa) 1 tunnin ajan 1% rasvatonta maitoa, ja proteiinivyöhykkeet visualisoitiin käyttäen tehostettua kemiluminesenssidetektiojärjestelmää (Fisher Scientific).

peräsuolen syövän kudoksen microarray

Kaikki tapaukset peräsuolen syövän mukana tässä tutkimuksessa oli takautuvasti valittu Aberdeen peräsuolen kasvain pankki (nyt sisällytetty ja governanced NHS Grampianin Biorepository, Aberdeen, Iso-Britannia). Kaikkiaan kasvain näytettä 650 potilasta oli mukana tutkimuksessa, kussakin tapauksessa, diagnoosi ensisijainen kolorektaalisyövän oli tehty, ja potilaat olivat tehty elektiivinen leikkaus ensisijainen peräsuolen syövän, Aberdeen, vuosina 1994 ja 2009. Mikään potilasta oli saanut minkäänlaista ennen leikkausta kemoterapiaa tai sädehoitoa. Erityisesti potilailla, joilla peräsuolen syöpä, joka oli saanut neoadjuvant hoitoa, kuten lyhytkestoinen sädehoito suljettiin pois. Tiedot potilaista ja niiden kasvaimet mukana tässä tutkimuksessa on esitetään taulukossa S1. Survival tiedot (kaikki kuolinsyyt) oli saatavilla kaikille potilaille ja aikaan sensuroidaan potilaiden hoitotuloksiin data olisi ollut 309 (47,5%) kuolemia. Keskimääräinen elossaololuku oli 115 kk (95% CI 108-123kuukausi).

kasvaimia ilmoitettiin mukaan The Royal College of patologi UK suuntaviivat histopatologisen raportointia paksusuolisyövän resektion yksilöitä ja joka sisältää opastusta version 5 TNM lavastus järjestelmää [27]. Histopatologisen käsittely peräsuolen syöpä leikkaaminen yksilöt on yksityiskohtaisesti materiaalit ja menetelmät S1.

peräsuolen syöpä kudos microarray rakennettiin sisältävä normaali paksusuoli limakalvonäytteistä (n = 50), ensisijainen (n = 650) ja metastasoituneen kolorektaalisyövän syöpä näytteitä (n = 285), kuten aikaisemmin on kuvattu [28] – [30]. Tiedot rakentaminen kudosten microarray annetaan Materiaalit ja menetelmät S1.

immunohistokemia

immunohistokemia kullekin vasta-aineelle suoritettiin biotiini-vapaa Dako Envision järjestelmä (Dako, Ely, UK) käyttäen Dako Autostaineriin (Dako), kuten aiemmin on kuvattu [28] – [30]. Tiedot immunohistokemiaa on esitetty materiaalit ja menetelmät S1. Leikkeet arvioitiin valon mikroskooppinen tutkimus ja intensiteetti immunovärjääminen kunkin ytimen arvioida itsenäisesti kaksi tutkijaa (GTB ja GIM) käyttäen pisteytystä aiemmin kuvattu arvioimiseksi proteiinin ilmentymisen kasvaimen mikrosiruja [28] – [30]. Intensiteetti immunovärjääminen kunkin ytimen pisteytettiin negatiivisiksi, heikko, kohtalainen tai voimakas. Sub-sijainti solun (ydin-, sytoplasman tai kalvo) Immunovärjäyksen tallennettiin myös. Vaihtelu immuunivärjäykseen väliin ytimien tapauskohtaisesti ei tunnistettu. Poikkeamia immunohistokemiallinen arviointi kudoksen ytimien välillä tarkkailijaa erotettiin samanaikaisesti mikroskooppisen uudelleenarviointia.

Arvio yhteensopimattomuuden korjauksen tila

Mismatch korjauksen tila (MMR) arvioitiin immunohistokemiallisesti käyttämällä vasta-aineita MLH1 ja MSH2 kuten aiemmin on kuvattu [28], [30]. MMR asema kirjattiin joko taitavia tai viallinen.

Tilastot

tilastollinen analyysi tiedoista, mukaan lukien U-testi, Wilcoxonin testi, khiin neliö testi, Kaplan-Meier selviytymisen analyysi, log-rank-testi ja Cox monen variate analyysi (muuttujat kirjattu kategoriseksi muuttujat), mukaan lukien laskeminen riskisuhteita ja 95% CI suoritettiin käyttäen IBM SPSS version 21 for Windows 7 ™ (IBM, Portsmouth, UK). Log-rank testiä käytettiin määrittämään selviytymisen erot yksittäisten ryhmien. Todennäköisyys arvo p≤0.05 pidettiin merkittävänä. Vaikutus eri poiskytkentäpisteiden suhteessa selviytymisen tutkittiin dichotomizing intensiteettiä pisteet kunkin merkin. Ryhmät, jotka analysoitiin olivat negatiivisesti värjätty versus mitään positiivista värjäytymistä, negatiivinen ja heikkoa värjäytymistä vastaan ​​kohtalainen ja vahva värjäytyminen ja negatiivisia, heikkoja ja kohtalainen värjäytyminen verrattuna vahva värjäytyminen.

Ethics

Hanke oli hyväksyminen Pohjois-Skotlannissa tutkimuksen eettisen komitean (vrt. nro. 08 /S0801 /81 ja 11 /NS /0015). Tutkimuksen eettinen komitea ei vaatia kirjallinen potilaan suostumus takautuva kudosnäytteitä, jotka olivat mukana peräsuolen syöpä kudos microarray.

Tulokset

monoklonaalisia vasta-aineita

spesifisyyden monoklonaalisia vasta-aineita CYP26A1, CYP26B1, CYP26C1 ja LRAT määritettiin ELISA: lla käyttäen immunogeeniset peptidit ja immunoblottauksella (kuvio 1) käyttämällä kokosolulysaateista soluista, jotka yliekspressoivat kunkin proteiinin. Vyöhyke, jotka liikkuvat odotettu molekyylipaino havaittiin kullekin vasta-aineelle lysaatissa valmistetaan soluista, jotka yliekspressoivat asiaa proteiinia, kun taas ei vyöhykkeet havaittiin vastaavan ohjaus-lysaattia.

vasemmalla kaistalla kunkin paneelin sisältää säätökennoa lysaatti taas oikealla kaistalla kunkin paneelin sisältää lysaatin valmistetaan soluista yli-ilmentävät asiaa proteiinia. 5 mikrogrammaa proteiinia ladattiin per kaivo.

immunohistokemia

CYP26A1, CYP26B1 ja LRAT kaikki osoittivat immunologista sekä normaalissa paksusuolen epiteelin ja ensisijainen ja metastasoitunut kolorektaalisyöpä ja kussakin tapauksessa Immunovärjäys paikallistettu solujen sytoplasmassa (kuvio 2). Ei ollut ydin- tai solun pinnalla kalvon imunoreactivity. Normaalissa paksusuolen epiteelissä immunovärjäyksellä on pääasiassa paikallisia pinnan epiteelisolujen eikä intratumour heterogeenisuus havaittiin joko primaarinen tai metastaattinen Kolorektaalituumorien. CYP26C1 ei osoittanut mitään immuunivärjäyty- tahansa kudosnäytteitä tarkasteltiin.

intensiteetti immunovärjäyksen oli merkitsevästi korkeampi ensisijainen peräsuolen syövän verrattuna on normaalia koolonin limakalvoa CYP26A1 (p = 0,002), CYP26B1 (p 0,001) (kuvio 3, taulukko 2). Ei ollut eroa intensiteetti ilmentymisen joko CYP26A1 tai CYP26B1 välillä Dukes C peräsuolen syövän ja niitä vastaavat imusolmuke etäpesäke taas LRAT oli merkittävä väheneminen immunoreaktiivisuus että imusolmuke etäpesäke verrattuna vastaavaan primäärikasvaimissa (p 0,001 ) (kuvio 3 ja taulukko 2).

ilmentymistä CYP26A1 oli korreloivat voimakkaasti sekä CYP26B1 ilme (χ

2 = 192,2, p 0,001) ja LRAT lauseke (χ

2 = 89,54, p 0,001), kun taas CYP26B1 ilmentyminen korreloi myös ilmaus LRAT (χ

2 = 144,88, p 0,001).

Suhde kliinis-patologinen parametrien

vertaaminen ilmentymisen CYP26A1, CYP26B1 ja LRAT ja kliinis-patologisia parametrit on koottu taulukkoon 3. CYP26B1 ja LRAT molemmat osoittivat merkittävästi yhdistysten kasvainpaikkaa, kasvain (T) vaiheessa ulkopuolinen laskimoiden invaasio ja yleistä vaiheessa. Sen sijaan CYP26A1 vain osoitti suhdetta kasvaimen päällä ja eivät osoittaneet suhdetta minkään muun kliinis-patologisia parametrejä tutkittiin.

Survival analyysi

Koko potilaan kohortissa.

suhde ilmentymisen CYP26A1, CYP26B1 ja LRAT kanssa kokonaiselossaolo tutkittiin käyttämällä erilaisia ​​katkaisurajapisteet (negatiivinen v heikko tilavuus kohtalainen v vahva, negatiivinen v positiivinen, negatiivinen /heikko positiivinen v kohtalainen /strong ja negatiivinen /heikko /kohtalainen v voimakas) on immunohistokemiallisella pisteytys ja on esitetty yhteenvetona taulukossa 4 ja kuvassa 4.

A-D koko potilaan kohortissa. A. eloonjäämiseen osoittaa yksittäisen CYP26B1 luokkia. B-D vaikutuksen eri leikkaus pisteitä näytetään. E-H Mismatch korjaus taitavia kohortissa. E. eloonjäämiseen osoittaa yksittäisen CYP26B1 luokkia. F-H vaikutuksen eri poiskytkentäpisteiden näkyy.

Oli johdonmukaista ja merkitsevästi yhteydessä CYP26B1 ilmaisun ja tulos (kuva 4). Kun otetaan huomioon kunkin CYP26B1 intensiteetti ryhmässä erikseen, kasvava intensiteetti CYP26B1 immunoreaktiivisuus yhteydessä heikompaan ennusteeseen (HR = 1,239, 95% CI = 1,104-1,390, χ

2 = 15,063, p = 0,002). Sillä CYP26B1 syöpäkasvain (n = 242) keskimääräinen elinaika oli 133 kuukautta (95% CI = 118-148 kuukautta) varten CYP26B1 heikko ilmentävien kasvainten (n = 216) keskimääräinen elinaika oli 106 kuukautta (95% CI = 95-116 kk), sillä CYP26B1 kohtalainen ilmentävien kasvainten (n = 106) keskimääräinen elinaika oli 103 kuukautta (95% CI = 85-120kuukausi) ja voimakkaasti ilmentävien CYP26B1 kasvain (n = 58) keskimääräinen eloonjäämisaika oli 81 kuukautta (95% CI = 60-101 kuukautta).

Vertaamalla CYP26B1 syöpäkasvain kanssa kasvaimia, jotka osoittivat mitään CYP26B1 immunologista sitten huonompi selviytyminen liittyi CYP26B1 ilme (HR = 1,352, 95% CI = 1,054-1,735, χ

2 = 5,707, p = 0,017). Sillä CYP26B1 syöpäkasvain (n = 242) keskimääräinen elinaika oli 133 kuukautta (95% CI = 118-148 kuukautta), kun taas CYP26B1 kasvaimia (n = 380) keskimääräinen elinaika oli 107 kuukautta (95% CI = 98-116kuukausi ). Vertaamalla CYP26B1 negatiivinen ja heikosti positiivisia kasvaimia CYP26B1 kohtalainen ja vahva ilmentäviä kasvaimia osoitti, että oli erittäin merkittävää yhteyttä selviytymisen (HR = 1,465, 95% CI = 1,151-1,865, χ

2 = 9,832, p = 0,002). Mean selviytymisen negatiiviseen /heikko kasvain (n = 458) oli 125 kuukautta (95% CI = 115-135 kuukautta) ja keskimääräinen eloonjääminen varten kohtalainen /vahva ryhmä kasvain (n = 164) oli 96 kuukautta (95% CI = 108-124 kuukautta). CYP26B1 negatiivinen /heikko /kohtalainen ilmentävien kasvainten verrattuna CYP26B1 voimakkaasti ilmentäviä kasvaimia osoitti myös erittäin merkittävää yhteyttä selviytymisen (HR = 1,737, 95% CI = 1,248-2,418, χ

2 = 11,092, p = 0,001). Keskimääräinen selviytymisen CYP26B1 negatiivisten /heikko /kohtalainen (n = 564) oli 119 kuukautta (95% CI = 111-128 kuukautta), kun taas keskimääräinen selviytymisen CYP26B1 vahva kasvain (n = 58) oli 80 kuukautta (95% CI = 60-101 kuukautta).

LRAT oli merkittävä suhde eloonjäämisen (HR = 1,321, 95% CI = 1,034-1,688, χ

2 = 5,039, p = 0,025), kun immunohistokemian intensiteetti pisteet olivat dichotomised osaksi LRAT negatiivinen ja heikko tapauksissa (n = 239) verrattuna LRAT kohtalainen ja vahva tapauksissa (n = 383) (kuva 5). Sillä LRAT negatiivinen ja heikko tilanteen mukaan sitä eloonjääminen oli 132 kuukautta (95% CI = 119-146 kuukautta), kun taas LRAT kohtalainen ja vahva tilanteen mukaan sitä eloonjääminen oli 106 kuukautta (95% CI = 96-116kuukausi). Ei ollut yhdistyksen välillä CYP26A1 ja selviytymisen koko potilaan kohortin.

. Suhdetta LRAT ja selviytymistä kaikissa kolorektaalisyövissä ja B. suhdetta LRAT ja selviytymisen mismatch korjaus taitavia kasvaimia.

yksityiskohtainen suhde CYP26A1, CYP26B1 ja LRAT ilme, patologinen parametrit ja kokonaiselossaoloaika on esitetty taulukoissa S2, S3, S4 ja S5.

monimuuttuja-analyysissä CYP26B1 pysyi itsenäisesti ennustetekijöitä (p = 0,026), kun taas ei ollut itsenäistä ennustetekijöiden merkitys LRAT ilmaisun (taulukko 5). Jos monimuuttujamenetelmin malli sisältää vain muuttujia, jotka olisivat käytettävissä koepala paksusuolisyövän (eli ei tietoa pT vaiheessa PN vaihe ja EMVI) sitten CYP26B1 on merkittävä itsenäinen prognostinen markkeri (p = 0,017, taulukko S6)

MMR taitavia kohortti.

MMR taitavia kasvaimia oli johdonmukainen suhde intensiteetti CYP26B1 ilmaisun ja eloonjäämiseen (taulukko 6, kuva 4). Lisääntyvä intensiteetti CYP26B1 immunoreaktiivisuus yhteydessä heikompaan ennusteeseen (HR = 1.330, 95% CI = 1,173-1,509, χ

2 = 21,493, p 0,001). Sillä CYP26B1 syöpäkasvain (n = 200) keskimääräinen elinaika oli 143 kuukautta (95% CI = 127-158 kuukautta) varten CYP26B1 heikko kasvain (n = 186) keskimääräinen elinaika oli 106 kuukautta (95% CI = 94-116kuukausi ), sillä CYP26B1 kohtalainen kasvain (n = 87) keskimääräinen eloonjäämisaika oli 96 kk (95% CI = 82-112kuukausi) ja voimakkaasti ilmentävien CYP26B1 kasvain (n = 49) keskimääräinen eloonjäämisaika oli 77 kk (95% CI 56- 98 kuukautta).

Vertaamalla CYP26B1 syöpäkasvain kanssa kasvaimia, jotka osoittivat mitään CYP26B1 immunologista sitten huonompi selviytyminen liittyi CYP26B1 ilme (HR = 1,604, 95% CI = 1,207-2,132, χ

2 = 10,796, p = 0,001). Sillä CYP26B1 syöpäkasvain (n = 200) keskimääräinen elinaika oli 143 kuukautta (95% CI = 127-158 kuukautta), kun taas CYP26B1 kasvaimia (n = 322) keskimääräinen elinaika oli 104 kuukautta (95% CI = 94-114kuukausi ). Vertaamalla CYP26B1 negatiivinen ja heikosti positiivisia kasvaimia CYP26B1 kohtalainen ja vahva ilmentäviä kasvaimia osoitti erittäin merkittävää yhteyttä selviytymisen (HR = 1,617, 95% CI = 1,242-2,105, χ

2 = 12,962, p 0,001). Mean selviytymisen negatiiviseen /heikko kasvain (n = 386) oli 130 kk (95% CI = 120-141 kuukautta) ja keskimääräinen selviytymisen kohtalainen /vahva ryhmä kasvaimia oli 92 kk (95% CI = 79-106kuukausi ). CYP26B1 negatiivinen /heikko /kohtalainen ilmentävien kasvainten verrattuna CYP26B1 voimakkaasti ilmentäviä kasvaimia osoitti myös erittäin merkittävää yhteyttä selviytymisen (HR = 1,948, 95% CI = 1,366-2,777, χ

2 = 14,149, p 0,001). Keskimääräinen selviytymisen CYP26B1 negatiivisten /heikko /kohtalainen (n = 473) oli 123 kuukautta (95% CI = 113-132 kuukautta) ja keskimääräinen selviytymisen CYP26B1 voimakkaasti ilmentävien kasvainten oli 77 kk (95% CI = 56-98 kk).

LRAT oli merkittävä suhde eloonjäämisen (HR = 1,464, 95% CI = 1,110-1,930, χ

2 = 7,425, p = 0,006), kun immunohistokemian intensiteetti pistemäärät dichotomised osaksi LRAT negatiivinen ja heikko tapauksissa (n = 198) verrattuna LRAT kohtalainen ja vahva tapauksissa (n = 326) (kuvio 5). Sillä LRAT negatiivinen ja heikko tilanteen mukaan sitä eloonjääminen oli 139 kuukautta (95% CI = 124-156 kuukautta), kun taas LRAT kohtalainen ja vahva tilanteen mukaan sitä eloonjääminen oli 106 kuukautta (95% CI = 96-116kuukausi). Ei ollut yhdistyksen välillä CYP26A1 ja eloonjäämisen MMR taitavia potilaan kohortin.

Monimuuttuja-analyysissä CYP26B1 pysyi itsenäisesti ennustetekijöitä (p = 0,026), kun taas ei ollut itsenäistä ennustetekijöiden merkitys LRAT ilmaisun (taulukko 7). Jos monimuuttujamenetelmin malli sisältää vain muuttujia, jotka olisivat käytettävissä koepala paksusuolisyövän (eli ei tietoa kasvaimen vaiheesta, solmukohtien vaiheessa ja extra-seinämaalaus laskimoiden invaasio) niin CYP26B1 on erittäin merkittävä itsenäinen prognostinen markkeri (p = 0,001, Taulukko S6)

ei ollut suhdetta viallinen MMR kasvaimista CYP26A1, CYP26B1 tai LRAT ilmaisun ja kokonaiselossaolo.

keskustelu

peräsuolen syöpä on yksi Tavallisimmin syöpien, joiden esiintyvyys lisääntyy edelleen ja vaikka molekyyli- tapahtumasarjasta, varhaisessa vaiheessa paksusuolen syövän kehittymisen on kuvattu yksityiskohtaisesti on edelleen selvä vaatimus määrittää, kuvata ja vahvistaa biomarkkerit paksusuolisyövän [4] – [6] , [12].

Tämä tutkimus on määritellyt ilmaisun profiilia retinoiinihapon metaboloivia entsyymejä CYP26A1, CYP26B1 ja CYP26C1 jotka ovat jäseniä P450 perheen entsyymien ja LRAT suuressa kohortissa hyvin tunnettu ja peräsuolen syöpiä. Ennustavia merkitys ilmaisun näiden retinoiinihapon metaboloivia entsyymejä on myös perustettu.

P450 -entsyymien ovat suuri joukko NADP riippuvainen -hydroksylaasien luokiteltiin perheisiin alaryhmiin ja yksittäiset jäsenet [31] – [34] . On olemassa kaksi erillistä toiminnallista ryhmää P450 -entsyymien perustuu niiden substraattispesifisyys joko vierasaineiden tai endogeenisten yhdisteiden. CYP1, CYP2 ja CYP3 ovat pääasialliset perheitä metaboliaan osallistuvia vierasaineiden taas muita perheitä CYP4 ylöspäin osallistuvat aineenvaihduntaan erityisryhmien biologisesti aktiivisten endogeenisen yhdisteitä kuten eikosanoidien, steroidihormonien, sappihapot ja vitamiineja kuten A-vitamiinia ja D [ ,,,0],35] – [42]. Heillä on useita transkription ja transkription jälkeisen sääntelymekanismeja [43]. Vierasaineita metaboloivan muodot P450 on tutkittu laajasti kasvaimia ja monta yksittäistä jäsentä on osoitettu yli-ilmentyvän tietyissä kasvaimia etenkin CYP1B1 jonka on osoitettu lisääntyneen ekspression monenlaisia ​​kasvaimia [25], [44 ] – [52]. Kasvaimen valikoiva ilmentyminen P450 on ehdotettu terapeuttisena kohteena erityisesti P450 välitteisten pro-drug aktivointi [51] – [57]. P450 -entsyymien mukana endogeenisen yhdisteen aineenvaihduntaan ovat yleensä saaneet paljon vähemmän tutkimus kasvaimia lukuun ottamatta P450 -entsyymien osallistuvien sukupuolihormonien (estrogeenin ja testosteronin) aineenvaihduntaan liittyviä tavoitteita rinta- ja eturauhassyöpää vastaavasti [58] – [60].

Rakenteellisesti P450 -entsyymien osoittavat suurinta aminohappo monimuotoisuutta niiden C-päät, joka on hydrofiilinen osa proteiinin toisin N-päähän, joka on kaikkein lipofiilinen osa proteiinia. Kun otetaan huomioon, on merkitty C-terminaalisen aminohapon muutos ja sen hydrofiilisyyden käyttöä peptidien C-päähän yksittäisten P450 immunogeeneinä tuottamaan monoklonaalisia vasta-aineita yksittäisiä muotoja P450 on osoittautunut monien tutkimusryhmien myös omat olla erittäin tehokas strategia kehittää yksittäisiä muotoon erityinen P450 monoklonaaliset ja polyklonaaliset vasta-aineet [30], [61], [62].

tässä tutkimuksessa olemme tuottaneet vasta-aineita, jotka ovat spesifisiä yksittäisten muotojen CYP26 perheen eli CYP26A1, CYP26B1 ja CYP26C1. Kaikki kolme CYP26 entsyymit hydroksylaatiksi retinoiinihappo ja kaikkein täysin ominaista on CYP26A1 joka on vallitseva muoto mukana retinoiinihappo hydroksylaatio. CYP26B1 ja CYP26C1 ovat viime aikoina tunnistettu jäseniä CYP26 perheen ja ovat huonommin tunnettu verrattuna CYP26A1. CYP26C1 näyttää olevan vallitseva mutta ei välttämättä yksinomainen ilmaisua tietyillä alueilla aivoissa [22], [23].

peräsuolen syöpiä voidaan luokitella niiden mikrosatelliittien epävakautta /MMR tila ja tämä on merkittävä polun peräsuolen syövän kehitystä [63], [64]. Tässä tutkimuksessa löydettiin ennustetekijöitä merkitys CYP26B1 sekä koko potilaan kohortin ja niissä kasvaimia, jotka määriteltiin mikrosatelliittimerkkien ennallaan tai vakaa. Sen sijaan ne, kasvaimia, jotka olivat viallinen MMR eivät osoittaneet ennustetekijöiden merkitystä viittaa siihen, että erilliset sääntelymekanismeja voidaan toimivan MMR taitavia ja viallinen MMR kasvaimia.

CYP26 entsyymejä on ehdotettu syöpälääkettä tavoitteet [65 ] ja lisääntyneen ilmentymisen CYP26A1 ja CYP26B1 kolorektaalisyövässä viittaa siihen, että nämä entsyymit voivat olla merkityksellisiä terapeuttisia kohteita tämän tyyppisen kasvaimia. Useat sarja yhdisteitä, jotka perustuvat erilaiset rakenteelliset ominaisuudet, on syntetisoitu, jotka estävät CYP26 [66] – [69]. Nämä yhdisteet ovat erittäin selektiivisiä CYP26 ja osoittaa korkea estoaktiivisuus (nanomolaarinen voimakkuus) kohti CYP26A1. Kuitenkin inhiboivaa aktiivisuutta näiden yhdisteiden kohti CYP26B1 ja CYP26C1 ei ole vielä arvioitu. Epidemiologiset tulokset ovat myös ehdottanut kohdentamiseen retinoidien ja retinoiinihappo väyliä kemopreventioon paksusuolisyövän ja lisääntyneen ilmentymisen CYP26A1 ja CYP26B1 kolorektaalisyövässä osoittaisi, että kohdistaminen nämä entsyymit voivat olla hyödyllinen lähestymistapa [70] – [72].

Havaittiin myös voimistunutta ilmentymistä LRAT perusterveydenhuollossa kolorektaalisyövässä tavanomaiseen verrattuna paksusuolen epiteelin. Tämä havainto näyttää kontrastin aikaisempiin tutkimuksiin muissa elimissä kuten virtsarakon syöpä [73], rintasyövän [74] ja eturauhassyövän [75], jotka ovat ehdottaneet, vähensi LRAT ilmentymistä syöpäsoluissa joskin näissä tutkimuksissa suhteellisen pieniä määriä kasvain näytteistä oli analysoidaan ja pääasiassa biokemialliset määritykset koko kasvainuutteiden käytettiin tuloksena arvioinnissa ”keskimääräinen taso”, kuten kasvain strooman ja nekroottista kudosta on mukana. Oli merkittäviä assosiaatioita LRAT ilmentymistä sekä koko potilaan kohortin ja MMR taitavia kasvaimia kun LRAT pistemäärät dichotomised negatiiviseksi /heikko /kohtalainen ja vahva. Tätä yhteyttä ei merkitty muille katkaisurajapisteet ja oli vähemmän kiinteää kuin havaittu CYP26B1 kannalta prognoosi- merkitykset.

Suurin ongelma useimpien syöpien, kuten paksusuolen ja peräsuolen syöpä, on etäpesäkkeitä ja hoito on yleensä suunnattu etäpesäke vaikka fenotyypin arviointi, johon hoitopäätökset tehdään usein analysoimalla primaarikasvaimen yksilöitä. Toisin kuin hyvin järjestäytynyt molekyylitason tapahtumia, jotka johtavat kehitystä paksusuolen syövän polkuja etäpesäkkeiden ovat saaneet paljon vähemmän huomiota [76]. Tämä tutkimus suunniteltiin sisältyä arviointi ilmiasuilmeneminen sekä primaareja kasvaimia ja niitä vastaavat imusolmuke etäpesäke. Todettiin, että ei ollut eroa ilmaisun CYP26A1 tai CYP26B1 välillä ensisijaisen kasvaimia ja vastaavien imusolmuke etäpesäke. Kuitenkin LRAT osoitti merkittävää vähenemistä ilmentymisessä imusolmuke etäpesäke verrattuna vastaavaan ensisijainen kasvaimia. Tämä viittaa siihen, molemmat primaarikasvaimen liittyviä tekijöitä ja microenvironmental tekijät osallistuvat säätelyyn ilmentymistä näiden entsyymien etäpesäkkeiden kolorektaalisyövän. Mahdolliset seuraukset muuttuneen ilmentymisen CYP26A1, CYP26B1 ja LRAT metastaattisessa kolorektaalisyövässä solut ja niiden osuutta pro-metastasoitunut fenotyyppi on esitetty kuvassa 6.

.