Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tausta ja tavoitteet

Transkriptiotekijän 3 (

TCF3

) implicates Wnt-signalointireitin aktivaatio ja säätelee E-kadheriinin ilmentymisen, joka on mukana aggressiivisuutta kasvaimia. Tutkimuksen tavoitteena on tutkia roolia

TCF3

ennustaa ennusteen potilaita, joilla on vaiheen II ja III peräsuolen syöpä (CRC).

Methods

Real-Time kvantitatiivinen PCR oli suoritettiin 64 tuoreen CRC kudosten ja 6 solulinjoissa tutkia

TCF3

mRNA ilmaisun. TCF3 proteiinin ilmentyminen dynamiikkaa havaittiin immunohistokemiallisesti 118 parafinoidut yksilöitä, ja kliininen merkitys TCF3 arvioitiin kliininen korrelaatio ja Kaplan-Meier analyysit. Poikkeava hypometylaatio

TCF3

promoottori tutkittiin myös käyttäen bisulfiitin sekvensointia ja metylaatiospesifisen PCR.

Tulokset

säätely ylöspäin

TCF3

mRNA oli usein havaittu sekä CRC kudoksissa uusiutui ja etäpesäkkeiden solulinjat. Ilmaisu taso TCF3 proteiinin korreloi merkitsevästi histologinen tyyppi (

P

= 0,038) ja tautivapaan elinajan ajan (

P

= 0,002). Korkeampi TCF3 ilme osoitti huono ennustetekijöitä tuloksia (

P

0,05, log-rank-testi). Monimuuttujamenetelmin osoitti myös vahvaa TCF3 proteiinin ilmentymisen ja hermoa invaasio olivat riippumattomia haittavaikutuksia prognosticators CRC (

P

= 0.010, 0.000). Lisäksi kävi ilmi, että promoottori hypometylaatio

TCF3

liittyy sen ylös-ilmentyminen.

Johtopäätökset

Tämä tutkimus korosti ennustetekijöiden arvo

TCF3

vaiheessa II ja III CRC. Ylös-säätely

TCF3

, joka johtuu pääasiassa promoottori hypometylaatio, on yksi molekyylitason mekanismeja mukana kehittämässä ja etenemiseen CRC.

Citation: Li C, Cai S, Wang X, Jiang Z (2014) hypometylaatio-Associated Up-asetus

TCF3

Expression ja uusiutuminen vaiheessa II ja III peräsuolen syövän. PLoS ONE 9 (11): e112005. doi: 10,1371 /journal.pone.0112005

Editor: Anthony WI. Lo, Queen Mary Hospital, Hong Kong

vastaanotettu: 10 huhtikuu 2014; Hyväksytty: 11 lokakuu 2014; Julkaistu: 06 marraskuu 2014

Copyright: © 2014 Li et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että hyväksyttyjä syistä, jotkut pääsy rajoitukset koskevat tietojen taustalla havainnot. Tiedot ovat saatavilla Fudanin yliopiston Shanghai Cancer Center eettinen komitea tutkijat, jotka täyttävät pääsyä luottamuksellisia tietoja. Pyynnöt saada tietoja voidaan lähettää professori Sanjun Cai (sähköposti: [email protected]).

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Postdoctoral Science Foundation Heilongjiangin maakunnassa (LRB87859), Lääketieteellinen Scientific Research Foundation Heilongjiangin maakunnassa (2011-144), The Opening Project Key Laboratory Lääketieteellisen genetiikan Heilongjiangin korkeakoulujen ja Natural Science Foundation of Heilongjiangin maakunnassa (H201332). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on yksi kolmesta johtavista syistä syövän liittyvät kuolemat keskuudessa kaikkialla maailmassa [1]. Vaiheen II ja III kasvaimet edustavat yhteensä noin 70% CRC potilaista [2]. Alueellinen imusolmuke etäpesäke on yksi tehokkaimmista indikaattorit aggressiivisuudesta CRC ja tukien ennustettaessa kliiniseen tulokseen. Kuitenkin kolmasosa CRC potilaista ilman histologiset imusolmukemetastaaseja kuolee viiden vuoden kuluttua leikkauksesta kaukaisten etäpesäke tai paikallisen uusiutumisen, joka ehdotti, että imusolmukestatuksesta voi ennustaa kliinistä CRC riittävästi [3]. Siksi on tärkeää tunnistaa ennustetekijöiden ennustavat huono tulos ja ohjaava terapia vaiheessa II ja III CRC.

Transkriptiotekijän 3-geenin (

TCF3

) sijaitsi kromosomi kaistalla 19p13.3.

TCF3

on läsnä kaikissa transkriptio säädin ja koodaa kahta perustyyppiä helix-loop-helix (HLH) transkriptiotekijöitä, E12 ja E47 [4]. Nämä kaksi proteiinia ovat ominaista laaja ilmentymiskuvio ja kyky sitoutua DNA: [5] – [8]. Useissa tutkimuksissa on raportoitu syntymässä roolia

TCF3

kokeellisissa kasvaimissa. Yliekspressio TCF3 on havaittu CRC [9], eturauhassyöpä [10], [11], mahasyöpä [12] ja munuaissyövän [13]. Transkription repressori E-kadheriinin,

TCF3

osallisena epiteelisolujen ja mesenkymaalitransitioon ja voidaan liittää kasvaimen aggressiivisuus [14]. Lisääntyvä transkriptionaalista aktiivisuutta

TCF /β-kateniinin

kompleksin ovat alkutapahtuman useimmissa peräsuolen satunnaista kasvaimia [15]. Vaikka huomattava tutkimukset olivat osoittivat

TCF3

oli kasvain promoottori, sen rooli syövän etenemisessä yhä kiistanalainen [16], [17]. Patel

et al

. edellyttäen kolme skenaariota osoittamaan mahdollisia

TCF3

säänneltyjä mekanismeja molekyylitasolla [11].

Tämän tutkimuksen tavoitteena on arvioida kliinistä merkitystä

TCF3

vuonna ihmisen CRC, ja tutkia mekanismeja välittävät yliekspressio

TCF3

, jotka auttavat alussa tunnistamaan korkean riskin toistumisen osajoukko potilaiden vaiheen II ja III CRC.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaille ja kudosnäytteiden

Huhtikuusta 2000 marraskuussa 2004 64 tuoreet CRC kudoksia, 36 uusiutui ja 28 ilman toistumisen, kerättiin heti toiminnassa Fudanin yliopiston Shanghai Cancer Center (Shanghai, Kiina ). Ominaisuudet näytteet osoittivat taulukossa 1. Yhteensä 118 parafinoidut näytteitä, 78 uusiutui ja 40 ilman toistumisen, kerättiin takautuvasti arkistomateriaalia tallennetaan patologian osaston Fudanin yliopiston Shanghai Cancer Center (Shanghai, Kiina) välillä helmikuu 1993 ja maaliskuussa 2004 nämä näytteet olivat eri potilaista, joita käytetään mRNA-analyysi (taulukko 2).

Kaikki näytteet tutkittiin otettiin elintärkeä ytimet histopatologisesti vahvisti syöpien perustuotannon kirurgian potilailla joille ei suoritettu mitään paikallista tai systeemistä hoitoa ennen käyttöä. Kasvaimen näytteet tarkistetaan vähintään 2 kokenut patologien, ja kasvaimen vaihe siirrettiin pohjalta järjestelmän International Union syöpää vastaan. Missään vaiheessa II, mutta kaikki vaiheen III potilaat saivat leikkauksen jälkeinen kemoterapia, mutta potilas sai sädehoitoa.

Tautivapaa eloonjääminen määritettiin aika kulunut alkuperäisen diagnoosin ulkonäön paikallisen uusiutumisen tai kaukana etäpesäke . Kirjallinen suostumus saatiin kaikilta potilailta, ja tutkimus protokolla hyväksyi eettinen komitea Fudanin yliopiston Shanghai Cancer Center.

Solulinjat

Kuusi ihmisen CRC solulinjat saatiin American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA). Kolme ovat ensisijainen-kasvain- linjat (SW480, Caco-2, HCT116), 2 ovat imusolmukkeiden-etäpesäkkeet johdettuja linjoja (SW620, LoVo), ja 1 on vatsan vesipöhö-etäpesäkkeitä johdettu line (Colo205). Solulinjat LoVo ja Colo205 viljeltiin RPMI-1640-alustassa, kun taas Caco-2 ja HCT116 viljeltiin Eaglen minimum essential keskipitkän ja McCoyn 5a keskipitkän muutettu vastaavasti. Sekä SW480 ja SW620 viljeltiin Leibovitzin L-15 väliaineessa. Kaikki alustat täydennettiin 10% naudan sikiön seerumia (GIBCO, USA), penisilliiniä 100 IU /ml, ja streptomysiiniä 100 ug /ml 37 ° C: ssa, 5% CO

2- kosteutetussa ilmakehässä. Menetelmän soluviljelmä kuvattu aiemmin [18].

mRNA-analyysi qPCR

Kokonais-RNA eristettiin RNeasy Mini Kit (Qiagen GmbH, Hilden, Saksa) ja käsiteltiin DNaasi. Mukaan valmistajan ohjeiden, cDNA syntetisoitiin oligo-dT-alukkeita (Promega, Madison, WI).

TCF3

erityisiä Käytetyt alukkeet olivat 5′-CTCGAGAAGAACAGGCCAAG-3 ’(forword) ja 5′-GGGGCAGGTACTGAACACAT-3’ (taaksepäin). Glyseraldehydi-3-fosfaattidehydrogenaasi (

GAPDH

) toimi kontrollina normalisoituminen geenien ilmentymistä ja monistettiin käyttämällä alukkeita 5′-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3 ’(eteenpäin) ja 5′-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3’ (taaksepäin) . QPCR suoritettiin käyttäen oletuksena PCR sykli järjestyksessä tunnistusjärjestelmä ABI Prism 7900HT (Applied Biosystems), ja monistettu cDNA havaittiin SYBR Green I väriaine (Qiagen GmbH, Saksa). Tiedot analysoitiin käyttäen ABI Prism 7900 SDS ohjelmisto (Sequence Detection System 2.0, Applied Biosystems). Suhteet intensiteettien kohdegeenin ja

GAPDH

signaalit käytettiin suhteellinen mitta ilmentymisen tason kohdegeenien. Kaikki kokeet toistettiin kolme kertaa.

immunohistokemia

Arkistointi hematoksyliinillä ja eosiinilla värjättyjen dioja tarkisti 2 kokeneet patologeja accordence vuoden 2000 Maailman terveysjärjestön luokitus. 3-porrastettua histologista arviointia järjestelmää sovellettiin. TNM vaiheessa arvioitiin mukaan vuoden 2002 International Union syöpää vastaan ​​luokitus.

polyklonaalista kanin anti-ihmis

TCF3

aineella (laimennos 1:400) saatiin Abcam (Cambridge, UK). Tutkimuksessa, 4 um: n osia arkistointia parafiiniblokit poistettiin parafiini ja kuumennettiin kaksi kertaa kulloinkin 10 minuuttia mikroaaltouunissa (500 W) ennen altistusta ensimmäiseen vasta-aineeseen. Immunoperoksidaasivärjäystä suoritettiin käyttäen 2-vaiheen EnVision menetelmällä (DAKO, Glostrup, Tanska) mukaan valmistajan ohjeiden ja visualisoidaan 3,3′-diaminobentsidiinillä tetrachloride (Sigma, St. Louis, MO).

Solulima ja tumavärjäystä mitattiin tämän vasta-aineen. Positiiviset solut laskettiin 2 patologit sokealle kliiniseen lopputulokseen. Sillä kliinis korrelaatio, käytimme 4-porrastettua pisteytystä (negatiivinen 3+), joka otti huomioon positiivisten solujen prosenttiosuuden ja värjäytymisen intensiteetti kuten aiemmin on kuvattu [18]. Yksityiskohtainen lähestymistapaa käytetään tuottamaan pisteet kullekin kudoksen ydin seuraavasti: mitään värjäytymistä tai värjäytyminen 10% tuumorisolujen (pisteet 0), heikko /tuskin havaittavissa osittainen värjäytymistä 10% tuumorisolujen (pisteet 1 +), heikko kohtalaiseen värjäytymisen 10% tuumorisolujen (pisteet 2 +), ja vahva värjäytymistä 10% tuumorisolujen (pisteet 3 +). Me erikseen tulkitaan TCF3 – ja 1+ ’alhainen ilmaisun ”ja

TCF3

2+ ja 3+ vahva ilmaus”.

bisulfiittimodifiointi genomista sekvensointia (BGS) B

genominen DNA eristettiin kudoksista käyttäen DNeasy Kit (Qiagen, Hilden, Saksa) ja säilytettiin -20 ° C: ssa ennen käyttöä. DNA muutettiin EZ DNA Metylointi-Gold Kit ™ (ZYMO, Orange, CA) mukaan valmistajan ohjeiden. Yleisesti, 1 ui modifioitua DNA: ta käytettiin myöhemmissä PCR. Alukkeet BGS ovat 5′-GTATAAGGTTGAAAATTTGGGT-3 ’(eteenpäin) ja 5′-CTCCCTAAAATCCTAAAAATCTTA-3’ (reverse). PCR lämpösyklitys olosuhteet olivat 1 sykli 95 ° C: ssa 15 minuuttia; 30 sykliä 94 ° C 30 sekuntia, 52 ° C: ssa 30 sekunnin ajan ja 72 ° C: ssa 30 sekunnin ajan ja lopullinen pidentäminen 72 ° C: ssa 7 minuutin ajan. PCR-tuotteet puhdistettiin kanssa Gel Extraction -kittiä (Qiagen), kloonattiin pMD20-T Vector (Promega, Madison, WI, USA), ja sitten muunnetaan

Escherichia coli

-kannan DH10B. 10-15 pesäkkeet valittiin vahvistaa läsnäoloa ja koko kloonatun insertin. Viisi positiivista kloonia jokaisesta näytteestä valittiin ja monistettiin käyttäen vektorin universaalina alukkeita P2, 5′-GTAAAACGACGGCCAGT-3 ’, P4, 5′-AGAGGATAACAATTTCACACAGGA-3’. Puhdistamisen jälkeen sekvenssi PCR-tuote analysoitiin käyttäen ABI 3730 DNA Sequencer (Applied Biosystems).

metylointi PCR (MSP) B

Alukkeet metyloitu sekvenssin TCF3 geenin olivat 5′ AATTTTATAGGAAAAAGGCGC-3 ’(eteenpäin) ja 5′-AACCTCGAACGCACATACTA-3′ (reverse). Sillä metyloimaton sekvenssi oli 5’-TGGAATTTTATAGGAAAAAGCTGT-3 ’(eteenpäin) ja 5′-AAAAACCTCAAACACACATACTA-3’ (reverse). Qiagen HotStarTaq DNA-polymeraasia käytettiin PCR: ään. Lämpösykliolosuhteita käytettiin 1 sykli 95 ° C: ssa 15 min; 30 sykliä 94 ° C: ssa 30 s, 53 ° C (M alukesarja) tai 51 ° C (U alukesarja) 30 s, ja 72 ° C 30 s; ja lopullinen pidennys 72 ° C: ssa 7 min. PCR-tuotteet laitettiin 2% agaroosigeeleillä, mitä seurasi värjäys etidiumbromidilla ja sitä visualisoitiin valaisemalla UV-valolla. Näyte luokiteltiin hypermetyloitunut kun metylointi amplifikaatiotuote yksin havaittiin, osittain metyloidut kun sekä metyloidut ja metyloimattomien monistustuotteet nähtiin, ja metyloitumattomat kun se osoitti metyloimaton monistustuotteita yksin tai ei vahvistusta Tuotteita ei löytynyt. Jotta tilastollinen analyysi, hypermetyloitunut ja osittain metyloitu näytteitä pidetään metyloitu (M) ryhmä ja verrattiin metyloitumattomalla (U) ryhmä [19].

Tilastollinen

Tilastolliset analyysit olivat suoritettiin Stata (versio SE /10; StataCorp, College Station, TX). Yhdistyksen joukossa kategorisen datan analysoitiin käyttämällä χ2 testiä. Survival käyrät tuottamat Kaplan-Meier menetelmällä, ja yhden muuttujan elossapysymisaikajakaumat verrattiin käyttämällä log-rank-testi. Monimuuttujakalibrointi Coxin suhteellisten riskien mallia käytettiin havaitsemiseen itsenäisten prognosticator. 2-tailed

P

vastinetta merkitys vahvistettiin 0,05.

Tulokset

TCF3

ilmaisu oli säädellään ylöspäin toistuvia CRC kudoksissa ja CRC – etäpesäke solulinjat

64 tuoreet näytteet,

TCF3

mRNA: n ilmentyminen oli merkitsevästi korkeampi toistuvia CRC kudoksissa kuin niissä uusiutumatta (

P

= 0,026; Kuva 1 a). Vastaanotin-operaattori käyrä (ROC) analyysi osoitti, että paras raja-arvo erottaa toistuvien ja kertaluonteisten CRC oli 0,0041. The alueilla ROC käyrät oli 0,668 (95% CI ,534-+0,803) (kuva 1b). Suhteelliset määrät

TCF3

mRNA: n CRC-solulinjoja ilmaistuna N-kertainen ero suhteessa Caco-2 ja normalisoitiin

GAPDH

viitteenä geenin.

TCF3

mRNA ilmaisun SW620, LoVo, ja Colo205 lisättiin 3,4-, 1.8- ja 6.9-kertaiseksi, verrattiin Caco-2. Kun taas

TCF3

mRNA tasoilla SW480 ja HCT116 laskivat 0.5- ja 0.4-kertaiseksi (kuva 1c). Saat 118 immunovärjäyty- näytteitä, TCF3 proteiinin ilmentyminen oli merkitsevästi liittyy uusiutumisen (taulukko 3).

(a) toistuvia CRC,

TCF3

mRNA lisääntyivät merkitsevästi comared CRC ilman toistumisen ( Wilcoxonin Signed Ranks Test,

P

0,05). (B) ROC käyrä suorituskykyä

TCF3

ennustaa toistumisen CRC. Alapuolinen alue (AUC) = 0,668 (95% CI 0,534-0,803),

P

arvo = 0,012. (C)

TCF3

mRNA mitattiin qPCR 6 CRC solulinjoissa.

GAPDH

signaalit käytettiin suhteellinen mitta ilmentymisen tason kohdegeenien. Edustaja tulokset, suoritettiin kolmena rinnakkaisena, näytetään keskimääräisenä ± SD.

korrelaatio

TCF3

proteiinin ilmentymisen ja kliinis-

Positiivinen värjäytyminen oli havaittu pääasiassa solulima ja ydinvoiman syöpäsolujen. Analyysi TCF3 ilmentymisen 118 CRC kudosten osoitti, että 37% näytteistä, jotka osoittavat vahvaa (2+ ja 3+) intensiteetit ja 63% matalan (- ja +) intensiteetit. Immunovärjäys TCF3 proteiinin on esitetty kuviossa 2.

Esimerkkejä immunovärjäys TCF3 voimakkaaseen ilmentymistä (a, b) ja heikkoa ilmentymistä (c, d) tasot (suurennos x 400).

merkittäviä eroja ei havaittu koskien ikä, sukupuoli, koko, lymphvascular ja hermoa hyökkäystä. Kuitenkin Tautivapaan eloonjäämisaste oli merkitsevästi pienempi potilailla, joilla on korkea TCF3 proteiinin ilmentyminen kuin niillä, joilla on alhainen ilmentyminen (

P

= 0,002), ja TCF3 ilmentyminen merkitsevästi liittynyt histologisia syöpätyyppi (

P

= 0,038). Taulukko 2 osoitti suhteita kliinis ja TCF3 proteiinin ilmentymiseen in118 näytteitä.

TCF3

proteiinin ilmentymisen ja taudista vapaan eloonjäämisajan

Univariate analyysi Kaplan-Meier tontteja paljasti että vahva TCF3 ilmentyminen merkitsevästi yhteydessä epäedullinen tautivapaan elinajan tulokset (

P

= 0,0001). Kaplan-Meier käyrät eivät osoittaneet eroa eloonjäämisessä CRC mukaan muut parametrit, kuten sukupuoli, ikä, kasvaimen sijainti, ja lymphvascular invaasio (

P

0,05). Kuitenkin elossapysymisaikajakaumat olivat merkittävästi erilaiset CRC kanssa ja ilman hermoa hyökkäystä. Tyypilliset käyrät TCF3 ilmaisun ja hermoa invaasio on esitetty kuvassa 3. Vahva TCF3 ilmentyminen liittyi toistumisen (taulukko 3). Coxin monimuuttuja-analyysi osoitti, että hermoa invaasio, TCF3 proteiinin ilmentyminen, ja kemoterapiaa olivat riippumattomia muuttujia (

P

= 0.00, 0.01, ja 0.01) (taulukko 4).

(a) Potilaat, joilla on korkea TCF3 lauseke (n = 44) oli merkitsevästi huonompi prognisis kuin ne, joilla on alhainen TCF3 ilme (n = 74;

P

0,05, log-rank-testi). (B) Potilaat, joilla hermoa invaasiota (n = 17) osoitti merkittävästi huonompi prognisis kuin ilman tällaista invaasiota (n = 101;

P

0,05, log-rank-testi).

Up-ilmentymä

TCF3

liittyy sen promoottorin CpG-saarekkeen hypometylaatio

CpG-saarekkeen kattaa noin 2,3 kb löydetty ihmisen

TCF3

geeni promoottorialue (kuvio 4c). Ymmärtää mekanismia

TCF3

sääntelyn CRC, metylaatiostatuksen promotoivassa alueella

TCF3

testattiin. Olemme monistettiin ja sekvensoitiin promoottorialueen

TCF3

käyttäen natriumbisulfiitti-käsitellyn genominen DNA valmistettiin CRC kudoksista. Tiheämmin metyloitu CpG sivustoja (90,7% vs. 44,3%) havaittiin kertaluonteisia CRC kudoksia tässä tutkimuksessa (kuvio 4d, 4e ja 4f). Edelleen vahvistaa sekvensointi tulokset, promoottorialue oli ominaista MSP käyttämällä metylointi tai unmethylation alukkeita 47 CRC yksilöitä. Metylointi

TCF3

havaittiin 23 (95,8%) 24 kertaluonteisia CRC yksilöitä. Sen sijaan, taajuus metylaatio oli huomattavasti pienempi toistuvia CRC yksilöiden (16/23, 69,6%;

P

= 0,023, kuvio 5a, 5b). Lisäksi osoitettiin, että

TCF3

ilmentyminen liittyy merkittävästi metylaatiostatuksen, mikä osoittaa epigenetical inaktivaatio voisi olla tärkeä rooli sääntelyn on

TCF3

lauseke (

P

= 0,001, kuva 5c).

Sijainti

TCF3

geenin sisällä ihmisen kromosomin 19 (ch19p13.3). (A): n eksoni rakenne ihmisen

TCF3

geenin. (B) rakenne 5′-päässä

TCF3

geenin. Kaavio prosentteja guaniinin (G) ja sytosiini (C) nukleotidit koko tämän alueen sijainti CpG dinukleotidissä tällä alueella, ja rajat CpG-saarekkeen (varjostettu alue). (C) Tyypillisiä esimerkkejä kromatogrammit CpG sivustoja saatu bisulfiittimassasta sekvensointi

TCF3

fragmentti CRC ilman toistumisen (d) ja toistuminen (e, f).

M, metyloitu alleeli; U, metyloimaton alleeli. (C) käänteinen korrelaatio

TCF3

promoottori metylaatiostatuksen ja geeniekspression tasolla qPCR analyysi

TCF3

ilmentymistä 47 CRC kudoksiin. Palkki edustaa suhdetta

TCF3

ja

GAPDH

mRNA ekspressiotasot.

TCF3

ekspressiotasoja korreloi metylaatiostatuksen geenin (

P

= 0,001, Mann-Whitneyn U-testi).

Keskustelu

Tutkimuksemme selvittää korrelaatio TCF3 ilmaisun ja kliinis-potilailla, joilla on vaiheen II ja III CRC. TCF3 ilmentyminen toistuvia CRC kudoksissa havaittiin huomattavasti paremmat kuin ilman toistumisen. Survival analyysi osoitti, että vahva TCF3 proteiinin ilmentymisen ja hermoa invaasio olivat riippumattomia haitallisesti ennustetekijät, ja kemoterapia oli itsenäinen suojakerroin. Eliminoimiseksi hoito aiheuttama harha adjuvanttihoitoa, analysoimme korrelaation TCF3 ilmaisun ja eloonjäämisaika vaiheessa II ja III potilaista. Kemoterapia ei vaikuttanut yhdistyksen välillä TCF3 ilmaisun ja ennustetta (kuvio S1).

hypometylaatio promoottorin CpG-saarekkeiden onkogeenin kykenee aktivoimaan näistä geeneistä. Sen määrittämiseksi, onko säätelyä TCF3 oli liittyy poikkeava metylaatio, tutkimme metylaation taajuus 47 CRC kudoksissa MSP. Metyloitu alleeli havaittiin 39 47 (83%) kasvaimia testattiin. Taajuus metylaatio oli merkitsevästi pienempi toistuvia CRC yksilöiden verrattuna tuumoreihin toistumisen (

P

= 0,023).

TCF3

ilmentyminen 39 kasvaimissa, joissa promoottori metylaatio oli merkittävästi pienempi kuin 8 tapauksissa ilman promoottoria metylaatio (

P

= 0,001), mikä osoittaa, että promoottori hypometylaatio oli tärkein mekanismi säätelyä

TCF3

. Lisääntynyt

TCF /β-kateniinin

signalointi on yksi tunnusmerkkejä CRC [20]. Me, tässä, antaa todisteita siitä metyloinnin

TCF3

on yleinen tapahtuma Kolorektaalituumorien. Nämä tiedot viittaavat siihen, että

TCF3

metylaatio inaktivointi on tarpeen estävää onkogeeninen potentiaali

TCF /β-kateniinin

signalointia. Päinvastoin, poikkeava hypometylaatio kasvaa

TCF3

ilmaisu, joka liittyy uusiutumisen vaiheen II ja III CRC.

jäsenet

TCF

perhe sitoutuvat fosforyloitumaton β- kateniinin [21] – [24] ja säätelevät kohdegeenien transkriptiota, kuten

TCF

itsensä ja onkogeenien

sykliini D1

ja

c-myc

[25], [26]. Misregulation Tämän signalointireitin on tärkeä tapahtuma kehittämisessä useiden maligniteettien, kuten paksusuolen syöpä, melanooma ja eturauhassyöpää. Lisäksi misregulation on

TCF /β-kateniinin

reitin tuumorisoluissa, se on tunnettua, että vika on E-kadheriinin mahdollistaa kasvainsolujen hyökätä ympäröivien kudosten [27]. E-kadheriinin ilmentyminen myös heikentynyt tai puuttuu monia epiteelisyöpien, kuten maha- ja rintasyövän [28] – [30]. Koska transkription repressori, rooli

TCF3

on alaspäin säätäminen E-kadheriinin aikana syövän etenemistä [31], [32].

TCF3

sitoo E-box elementtien proksimaaliseen promoottorikohtaan E-kadheriinin johtaa transkription inaktivointi E-kadheriinin ja E-kadheriinin downregulation on tärkeä rooli vähentää solu-solu-adheesion järjestelmät ja edistää etäpesäke [33].

Kun otetaan huomioon kattavien tietojen esitetään tässä tutkimuksessa, ehdotamme, että yli-ilmentyminen TCF3 vaiheessa II ja III CRC potilaita oli merkitsevästi yhteydessä huonoon ennusteeseen ja matalan taudista vapaan eloonjäämisaste (kuva 3), joka osaltaan tunnistaa ne suuren riskin CRC potilailla. Jossakin vaiheessa II ja kaikki vaiheen III CRC tapauksissa voitaisiin harkita liitännäishoitona [34]. Kuitenkin rooli adjuvanttihoitoa niillä potilailla vaiheen II kasvaimia on vielä epäselvä [35], [36]. Valitseminen korkean riskin vaiheen II tauti ja hyötyjen maksimoimiseksi adjuvanttihoito itsenäinen ennustetekijöitä markkeri voisi olla avuksi tunnistamaan aggressiivinen fenotyypit sisällä vaiheen II CRC. Olemme tunnistaneet GAS1 tekijänä valita potilaille, joilla on suuri riski toistumista edellisessä työssä [18], ja joitakin mielenkiintoisia kandidaattigeenit kuin ennustavat tekijät nämä näytteet myös validointi laboratoriossamme (julkaisematon data). Tässä tutkimuksessa osoitimme, että vahvat

TCF3

ilmaisu voi tunnistaa potilasalaryhmässä hyvin alttiita uusiutumisen ja nämä potilaat saattavat hyötyä enemmän aggressiivinen hoito.

Yhteenvetona tietomme korostaa keskeistä roolia

TCF3

hypometylaatio CRC toistuvia kehittämiseen. Nämä tulokset korostavat mahdollisia ennustetekijöiden arvo

TCF3

biomarkkerina valita adjuvanttihoito potilaille hyvin alttiita huonon tuloksen.

tukeminen Information

Kuva S1.

Kaplan-Meierin arvioitu eloonjäämisaste mukaan TCF3 ilme. Potilaat, joilla on korkea TCF3 ilme verrokkeja köyhempi prognisis kuin ne, joilla on alhainen TCF3 ilme II vaiheessa (a) ja III potilaalla (b) (

P

0,05, log-rank-testi).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0112005.s001

(TIF) B