Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Munasarjasyöpä on viides suurin syy syöpään liittyvät kuolemat naisilla. Viiden vuoden eloonjäämisluvut alkuvaiheen tauti on suurempi kuin 94%, mutta useimmat naiset ovat diagnosoitu pitkälle edenneessä vaiheessa 5 vuoden pysyvyys on alle 28%. Paremmat keinot varhaiseen toteamiseen ja luotettava potilasvalvonnan tarvitaan lisätä selviytymisen.

Menetelmät ja tärkeimmät havainnot

Hakeminen massaspektrometria-pohjainen proteomiikan, me pyrki selvittämään vastaamattoman biomarkkereiden tutkimus kysymykseen kyvyn määrittämään kasvaimen taakkaa havaittavissa munasarjasyöpäsolu biomarkkerit proteiinin peräisin suoraan kasvainsoluja. Koska aggressiivinen serous munasarjan epiteelin syövät muodostavat suurimman kuolleisuuden ksenograftimallia käytetään ihmisen SKOV-3 serous munasarjasyöpäsoluja perustettiin mallintaa etenemistä levitetään carcinomatosis. Käyttäen menetelmää pienimolekyylipainoisen proteiinin rikastamisen, jonka jälkeen nestekromatografia ja massaspektrometria analyysi, ihmisen peptidin sekvenssi S100A6 tunnistettiin seerumista hiirillä myöhäisvaiheen kokeellinen munasarjasyöpäpotilailla. S100A6 ilmentyminen dokumentoitu syövän ksenograftien samoin kuin munasarjasyövän potilaan kudoksiin. Pitkittäinen Tutkimus osoitti, että seerumin S100A6 pitoisuus liittyy suoraan kasvaintaakkaa ennusteita käänteinen regressio kalibrointia analyysi saatujen tietojen pesuaine-täydennetty antigeenin sieppaus immunoassay ja koko-eläimen bioluminesoiviin optisen kuvantamisen. Johtuvat eläinmallissa vahvistettiin kliinisissä materiaalia S100A6 havaittiin olevan merkittävästi koholla seerumeista naisten pitkälle munasarjasyövän verrattuna niihin, joilla varhaisessa vaiheessa sairaus.

Johtopäätökset

S100A6 ilmaistaan ​​munasarjojen ja muiden syöpä kudoksiin, mutta ei ole dokumentoitu aiemmin munasarjasyövän taudin seerumit. S100A6 esiintyy seerumissa pitoisuuksina, jotka korreloivat kokeellisen kasvaimen taakkaa ja kliinisen taudin vaiheessa. Tiedot merkitse sitä, että S100A6 voivat osoittautua hyödyllisiksi havaitsemiseen ja /tai seurantaan munasarjasyöpä, kun sitä käytetään yhdessä muiden biomarkkerit.

Citation: Wei BR, Hoover SB, Ross MM, Zhou W, Meani F, Edwards JB , et ai. (2009) Serum S100A6 Pitoisuus ennustaa Peritoneaalisille tuumoritaakka Hiiret epiteelin munasarjasyöpä ja liittyy pitkälle potilaissa. PLoS ONE 4 (10): e7670. doi: 10,1371 /journal.pone.0007670

Editor: Irene Oi-Lin Ng, The University of Hong Kong, Hongkong

vastaanotettu: 25 kesäkuu 2009; Hyväksytty: 29 syyskuu 2009; Julkaistu: 30 lokakuu 2009

Tämä on avoin-yhteys artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Public Domain ilmoitus, jonka mukaan, kun se on saatettu julkisia, tämä työ saa vapaasti kopioida, levittää, lähetetään, modifioitu, rakennettu, tai muuten käyttää kuka tahansa laillista tarkoitusta.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Intramural tutkimusohjelma, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, National Institutes of Health, Bethesda , Maryland, ja avustusta Instituto Superiore Di Sanita, Italiassa alle USA-ITALIA Oncoproteomics ohjelma. BRW ja RMD ovat työntekijöitä Scientific Applications International Corporation-Frederick, Inc., Frederick, Maryland, on sopimus National Cancer Institute Intramural tutkimusohjelma (Award N01-CO-12400). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Munasarjasyöpä (OVCA) osuus on vain 4% syöpätapauksista naisilla, mutta se on viides suurin syy syövän kuolemaan ja kaikkein vaarallisin gynekologinen syöpä tässä potilasryhmässä [1]. Vuonna 2008 oli arviolta 21650 uutta tapausta ja 15520 kuolemantapausta [1]. Sisplatiini, platina-pohjainen kemoterapeuttisen käyttöön vuonna 1978, on tullut olennainen osa OVCA solunsalpaajahoito ja on parantunut tulos alkuvaiheessa OVCA [2]; 5 vuoden pysyvyys I vaiheen potilaille on suurempi kuin 94% (http //: seer.cancer.gov/csr/1975_2006). Valitettavasti OVCA on harvoin diagnosoidaan varhaisessa vaiheessa, kun tauti rajoittuu usein oireeton. Lähes 70% OVCA tapauksista havaitaan levitetään vaiheissa eli vaiheet III ja IV, jonka aikana 5 vuoden pysyvyys vähenee 30% tai vähemmän.

Kiireellinen OVCA tutkimus prioriteetti on löytö ja validointi biomarkkereita hyödyllinen diagnosoimiseksi tappavin tyypit OVCA, joka usein edetä nopeasti [3]. Ainoa käytettävissä FDA-hyväksytty ei-invasiivisia menettely munasarjasyöpä diagnoosi tähän mennessä on mittaamalla seerumin CA-125 tasoilla. Vaikka 80%: lla, edenneen OVCA joilla seerumin CA-125, on suuren määrän vääriä positiivisia liittyy CA-125 testi [4] – [6]. Fyysiset olosuhteet kuten raskaus, sisäsynnytintulehduksen, hyvänlaatuinen kystat, kohdun kohdun tai infektio voi myös nostaa seerumin CA-125 tasolla [7], [8]. Muiden maligniteettien, mukaan lukien haima-, keuhko-, rinta-, maha- ja paksusuolen syöpiä on myös osoitettu lisäävän seerumin CA-125 [4], [8].

syntyminen massaspektrometriaa (MS) proteomiikka tekniikka on tuonut uusia mahdollisuudet löytää erityisiä proteiinimarkkereita varhaisen OVCA havaitsemiseen. Ihmisen seerumin seisoo houkuttelevana näytettä biomarkkereiden löytö MS koska näytteen ottamisen on vähän invasiivisia, ja seerumi on tavallinen fysiologinen neste käyttää diagnostisiin tarkoituksiin. Kuitenkin monimutkaisuus ja laaja dynaaminen alue seerumin proteiinipitoisuus tehdä analyysi seerumin proteomiin haastava; Seerumin proteiinin pitoisuudet vaihtelevat 9 suuruusluokkaa ja 99% seerumin kokonais-proteiinin massa on muodostettu vain noin 22 proteiinia lajia [9]. Tällaiset haasteet liittyvät seerumin proteomiikka varten biomarkkereiden löytö ei ole helppo voittaa [8], [10]. Siksi kokeellinen lähestymistavat sisältävät MS teknologian ja seerumin näytteen käsittely olisi tutkittava, jotta löytää kliinisesti merkittävää OVCA biomarkkereita. Todellakin, menetelmiä, kuten ehtyminen runsas proteiinien avulla affiniteettikolonneja ja proteiini fraktiointi on käytetty lisätä todennäköisyyttä paljastamiseksi kasvain peräisin olevaa proteiinia lajeja, jotka ovat usein matalan runsaasti [11]. Lähestymistapa tilalla merkittävä potentiaali on analyysi pienimolekyylipainoisen seerumi proteomiin /peptidomin [12]. Alhaisen molekyylipainon (LMW) proteiinien ja peptidien usein sitoutuvat korkean molekyylipainon seerumin proteiineja, mikä pitkittää puoliintumisajat LMW-fraktion liikkeeseen [13] – [15]. Siten seerumin LMW proteomia on houkutteleva säiliö, jossa kasvain- alhainen runsas proteiineja ja peptidejä voidaan paremmin säilynyt ja mahdollisesti havaita.

kehittäminen ja käyttö OVCA eläinmallien voivat toimia täydentävinä apuaineina tunnistaa ja varmentaa, ennakoiva seerumin biomarkkerit. Käyttö eläinmalleissa on mahdollisuus minimoida joitakin syvällisiä geneettisten ja ympäristötekijöiden vaihtelun usein törmännyt ihmisten Proteome tutkimuksissa, joissa puolueeton vertailunäytteet on usein vaikea saada [16]. Tällaiset tutkimukset ihmisen syövän ksenograftimalleja on julkaistu aiemmin [17] – [20]. Ihmiskudosten syövän immuunivajaissa hiirillä on käyttökelpoinen malli löytämisen proteomic seerumin tai plasman profiileja, jotka korreloivat kasvaintaakkaa. Nämä mallit on lisäetuna on tarjota keinoja määrittää, onko kiinnostavan biomarkkerin on johdettu suoraan syöpäsolujen tai tuote isännän reaktion, koska voidaan tutkia läsnä tuumorisolujen peräisin olevan ihmisen spesifisten proteiinien. Target biomarkkerit tunnistaa MS voitaisiin edelleen validoitu tällaisia ​​malleja, mikä lisää todennäköisyyttä saada patologisesti asiaankuuluva merkki. Näin ollen ihmisen OVCA hiirimallissa perustettiin vuonna yritetään erottaa munasarjasyöpä proteiineja seerumissa käyttäen MS-pohjainen löytö. Tämä lähestymistapa paljasti S100A6, lisäksi muita ihmisen proteiineja, seerumista hiirissä, joilla OVCA. Expression of S100A6 tutkittiin edelleen ihmisen syövän solulinjoissa ja kudosten peräisin OVCA potilaista. Lisäksi järjestelmä haettiin korreloivan seerumin määrä S100A6 ja kasvaintaakkaa mallissa. Jälkimmäinen tavoite pyritään aloittamaan käsitellä tärkeitä avoimia kysymyksiä koskien kasvaimen kokoa tarpeen sallia

de novo

havaitseminen proteiinin allekirjoitusten massan veressä. Lopuksi pyrimme vahvistamaan ilmaisua profiilia S100A6 ihmisen seerumeissa käyttäen hyvin kontrolloidussa kliinisessä tutkimuksessa joukko naisia ​​varhaisen ja pitkälle munasarjojen syöpiä.

Tulokset

Yleinen kokeellinen lähestymistapa löytää LMW seerumin proteiineja, joilla voi olla merkitystä ihmisen OVCA hiirimallissa MS on esitetty kuviossa 1. sen jälkeen intraperitoneaalisen (ip) injektion hiiriä ihmisen vakavien SKOV-3 OVCA soluja tai suolaliuokseen, verta otettiin näytteitä eri ajankohtina, kun taas aikaisin ja progressiivinen carcinomatosis oltiin mallinnettu. LMW seerumi proteomiin analysoitiin proteiinien tunnistamiseksi spesifisiä, tai runsaampaa, syöpää kantavia hiiriä. Läsnäolo kasvain johdettujen S100A6 proteiini seerumissa tutkittiin edelleen ehdolle biomerkkiaine käyttäen vasta-analyysin perusteella. Kasvaintaakka korreloi läsnä ollessa tai seerumin proteiini S100A6 mallissa, joka siten voidaan pitää otaksutun biomarkkerina. Perusta edelleen validointi kliinistä merkitystä Näiden havaintojen OVCA potilaille luotiin havaitsemalla runsaammin S100A6 seerumista naisten pitkälle sairaus, verrattuna alkuvaiheessa tauti.

Voit selvittää syövän proteiineja ovat ehdokas biomarkkereiden potentiaali, (A) bioluminesoiva ksenograftimallia, (B) ECLISA, (C) Western blot, ja (D) OVCA kudoksen array immunohistokemia (IHC) hyödynnetään. Tämä seurattiin S100A6 analysoimalla ihmisen potilaiden seerumit.

Discovery of OVCA Associated Seerumin proteiinit

Kokeellinen tauti eteni solujen neoplastisten kylvön vatsakalvon aikana engraftmentissa on levitettävä carcinomatosis matkien etenemistä alueellisista kaukaisiin pitkälle OVCA naisilla. Kaikki Skov-3-ympätty hiirten useita, vaihtelevasti kokoinen infiltroiva tan, kiinteä kasvain kyhmyjä jaetaan koko vatsakalvon 4 viikon kuluttua inokulaation (p.i.). Tähän liittyi neoplastiset vuodatuksia vatsaontelon useimpien SKOV-3-ympätty hiirillä. Histologisesti, suoliliepeen massat koostuivat morfologisesti vaihteleva populaatio neoplastisten munasarjaepiteelisoluilla. Nämä solut tapahtui expansile, papillaarinen kasvaimet kanssa luupalkkien 2-3 solujen paksu, tai kiinteinä tiheään solujen massoja tukee rajoitettu sidekudoksen (kuvio 2A ja B). Kaikki suolaliuos-ympätty ohjaus hiirillä säilyi tautivapaita.

(A) edustaja OVCA näyttelyitä pääasiassa kiinteän kasvaimen kasvu, todisteet papillaarisen ennusteiden ja satunnaista minuutin kystat (bar = 25 pm). Inset, Tarkempaa mikrovalokuva kuvaa cuboidal on polygonaalinen pleomorphic microcystic epiteelin anisokaryosis ja epätyypillisten mitoosien munasarjasyöpäsolujen ytimet (bar = 50 pm). (B) OVCA kasvaimen kyhmyn implantti kohdun infundibulo-munasarja nivelside (nuolenkärki) vieressä munasarja (nuoli) (bar = 25 pm). Kasvain implantit ollut läpi vatsaonteloon, peri-munasarja sidekudosta, ja tunkeutuu ympäröiviin kudoksiin, kuten suolet, maksan ja pallean. Hematoksyliinillä ja eosiinilla (H ohjaus) mitattuna t-testiä (p-arvo 0,05), tai vähintään 100% ero spektrin laskee ((syöpä laskee – ohjaus määrä) /(keskiarvo syövän ja ohjaus määrä) x 100%). Nämä tulokset on esitetty taulukossa 1.

tunnistamisen jälkeen nämä ehdokas differentiaalisesti runsaasti (syöpä kontrolli) ihmisen proteiineja, ihmisen peptidisekvenssejä tunnistetaan MS /MS-spektrit etsitään sitten vastaan ​​hiiren tietokannan tutkivat, peptidisekvenssi oli homologinen ihmisen ja hiiren ja tarkistaa tarkoituksenmukaisuutta sekvenssikutsu (tai oliko epäselvyyttä aminohappo nimitys). Proteiinit luokiteltu, jossa on (1) ihmisen spesifisten peptidien vain, (2) peptidejä, jotka ovat homologisia sekä ihmisen ja hiiren, ja (3) sekä 1 ja 2 (taulukko 1). Proteiinit tunnistettu ihmisen peptideillä on mahdollisesti suurempi arvo, koska ne todennäköisesti peräisin ksenosiirrettyjä ihmisen syöpäsoluja.

S100A6 valittiin jatkotutkimuksiin. Tapaamisen lisäksi kriteerit merkitystä perustettu erottamiselle syöpään liittyvän seerumin proteiinit ohjaus yksilöt (taulukko 1), S100A6 pidettiin ehdokkaaksi ylimääräisen koska sen voimistunutta ilmentymistä erilaisissa ihmisen syövissä ja sen suhteellisen pieni koko (10,5 kDa ). Jälkimmäisessä suhteessa S100A6 oli houkutteleva sen potentiaalia olla ehjä proteiini kertyvät LMW erottaminen strategiaa käytetään rikastamiseksi proteiinien molekyylipaino on alle -25 kDa. Kuten taulukossa 1 on esitetty, kolme S100A6 peptidit tunnistettiin; kahden sekvenssin yhteisiä ihmisen ja hiiren versiot tämän proteiinin (punainen ja sininen fontteja), ja yksi peptidi ainutlaatuinen ihmisen version (vihreä fontti) (kuvio 3A). MS /MS-spektri, jota käytetään tunnistamaan ainutlaatuinen ihmisen peptidi, LMEDLDR, on esitetty kuviossa 3B. Vastaava hiiren sekvenssi on asparagiinihappo kolmannessa tähteen asema, sen sijaan, että glutamiinihappo ihmisen sekvenssissä. Esiintyminen ihmisen peptidin vahvistettiin myöhemmin toisessa MS /MS-analyysi suoritettiin seeruminäytteistä kerätty on kasvain kolmannessa kohortin eläinten (katso materiaalit ja menetelmät).

(A ) tasattu ihmisen ja hiiren S100A6 sekvenssit kuvaa 3 aminohapon erot kahden lajin (pystysuorat viivat). Kolme peptidejä havaittiin LC-LTQ MS /MS kasvain hiiri seerumia; sekvenssit esitetään väri fontti. Peptidit punainen ja sininen fontti ovat homologisia ihmisen ja hiiren, kun taas peptidisekvenssi vihreä fontti on ainutlaatuinen ihmisen S100A6, johtuen yhden aminohapon ero. (B) MS /MS-spektri ihmisen erityisiä S100A6 peptidi, LMEDLDR. Tämä sekvenssi ei havaittu suolaliuoksella siirrostettiin kontrollihiiriin seerumeista.

ilmentäminen S100A6 vuonna OVCA

Anti-S100A6 immunoblottaus suoritettiin vahvistaa läsnäoloa ehjä S100A6 hiiren sera käytetty MS analyyseihin. Käyttämällä mukautettua anti-ihmis-S100A6 vasta-aine, C1, 10,5 kDa: n vyöhyke, joka vastaa molekyylipainoa S100A6 havaittiin seerumiseos kerättiin 4 viikkoa infektoinnin jälkeen kasvain-hiirille, joita käytetään alkuperäisen MS-analyysit (kuvio 4A). S100A6 ei havaittu seerumista täsmäsi-tutkimuksesta suolaliuoksella kontrollihiiriin. C1 anti-S100A6 immunoblottaus suoritettiin myös muita sarjan seerumeista näytteet yksittäisistä SKOV-3 solu-pistetään eläimiä kokeellisen loppuvaiheen tauti, sekä seerumit naiiveja ohjaus eläimistä; S100A6 10,5 kDa: n vyöhykkeen havaittiin ainoastaan ​​eläinten seerumeissa, kasvaimia, ei hallitse hiiren seerumista (tuloksia ei ole esitetty). Todisteita S100A6 proteiinin ilmentymistä OVCA ksenografteissa ja hiiren vatsaontelon elinten tutkittiin käyttäen immunohistokemiallista määritystä (IHC). S100A6 immunoleimaus havaittiin kasvainkudoksessa, mutta ei ympäröivään suoliliepeen tai vatsan elinten (suoliston, maksan, munuaisten, virtsarakon, perna, haima, kohtu, ja munasarjojen) (kuvio 4B ja C).

(A) immunoblot-analyysi läsnäolo S100A6 yhdistetyssä raaka seerumeissa syöpää kantavia hiiriä (1) ja suolaliuoksella kontrollihiiret (2). Seerumi käytettiin LMW proteiinifraktio valmistelu MS analyysin biomarkkereiden löytö. (B) OVCA ksenograftien ilmaista S100A6 analysoituna IHC. -tuumoriksenografti Implantti suoliston suoliliepeen paljastaa S100A6 proteiini rajoittuu kasvain, jossa puute immunoleimaus viereisissä suolistossa ja suolilieve. (C) Serial jakso kudoksesta esitetään B, jota käytetään IHC reaktiossa ohjaus, paljastaa puute immunoreaktiivisuus kun ensisijainen S100A6 vasta-aine on jätetty pois IHC. Immunoperoksidaasitesti, hematoksyliinillä vastavärinä (Bars = 50 pm).

mahdollista kliinistä merkitystä löytää S100A6 seerumeista hiirten SKOV-3 ksenografteissa tutkittiin tarkemmin tutkimalla ilmentymistä S100A6 muissa OVCA ihmisen potilaasta johdettujen näytteiden avulla Western blot. Pariksi syöpä- ja vastaaviin normaaleihin munasarjan lysaatit 2 potilasta, S100A6 kohosi karsinooma kudoksessa verrattuna sen täsmäsi ei-neoplastisten munasarjakudoksessa (kuvio 5A ja B). Ihmisen OVCA johdetut solulinjat ilmensivät eri tasoilla S100A6 (kuvio 5C ja D). Kaikki OVCA solut testattiin, paitsi OVCAR-4 ja solulinjasta peräisin kirkas cell munasarjasyöpäpotilailla (ACI-89-2), ilmaistuna S100A6 yläpuolella taustataso (normaali munasarja).

(A ja B) Pariksi lysaatit of OVCA (syöpä) ja viereisen normaalin munasarjan kudoksessa (normaali) 2 OVCA potilasta blotattiin varten S100A6 ilme. SKOV-3 solu- lysaattia käytettiin vertailussa. (C ja D) S100A6 ilmentyminen OVCA solulinjoja NCI60 (SKOV-3, OVCAR-3, 4 ja 5), ​​samoin kuin johdetut solulinjat OVCA potilaille (katso myös Materiaalit ja menetelmät).

määritellä tarkemmin ero S100A6 ilmentymistä ihmisen OVCA potilaan kudoksissa, tutkittaessa pahanlaatuisen, rajatapaus, hyvänlaatuinen, ja noncancerous munasarjojen kudoksiin suoritettiin käyttäen IHC. Kudosleikkeet puuttuu S100A6 immunoreaktiivisuus, samanlainen huomautuksia IHC negatiivinen reaktio ohjaus, pidettiin negatiivista. Immunoreaktiivisuus selvästi negatiivinen kontrolli nimitettiin positiivinen. Näytteet muutamia määriä heikosti positiivisten solujen katsottiin epäselvä. Niistä 140 pahanlaatuinen OVCA yksilöitä, 116 (83%) oli positiivisia S100A6 immunoleimaus (taulukko 2). Korkea S100A6 positiivinen ilmaantuvuus (yli 80%) havaittiin kaikissa pahanlaatuinen tyyppisiä OVCA lukuun ottamatta selkeitä karsinooma, joista vain 2 ulos 4 näytteet olivat S100A6 positiivisia. Lähes 85% hyvänlaatuisia adenoomia myönteisesti S100A6 reaktiivisuus samoin; merkinnöissä intensiteetti oli verrattavissa pahanlaatuinen OVCA. Ei ilmeinen suhde merkintöjä intensiteetin ja syöpä vaihe tai laatu ei havaittu. Sen sijaan normaalin munasarjan kudosten ja ei-kasvainkudoksessa vieressä kasvaimia esiintyi vähän tai ei lainkaan S100A6 merkintää. Nämä tulokset, jotka osoittavat, S100A6 ekspressio eri potilaasta peräisin munasarjan epiteelin syövän solulinjat ja kudoksissa, vahvistaa, että ilmentyminen S100A6 in OVCA on melko tavallista. Tässä yhteydessä todetaan ihmisen erityisiä S100A6 peptidisekvenssi seerumissa ihmisen OVCA kantavien hiirten osoittaa, että S100A6 voi olla hyötyä ehdokkaaksi proteiinin seurantaan OVCA. Lisäksi positiivinen ilmaus S100A6 vuonna hyvän- että pahanlaatuisia OVCA, toisin kuin sen lähes olemattoman pinnalla normaalin munasarjan, ehdottaa S100A6 voi olla sopiva merkkiaineena diagnostisessa kuvantamisessa auttaa paikantamaan ja vahvistaa munasarjojen proliferatiivisia muutoksia.

Serum S100A6 taso korreloi OVCA kasvaintaakkaa

Voit selvittää, onko määrä S100A6 seerumissa voitaisiin käyttää korrelaattina arvioimiseksi tuumorikuorma,

in vivo

bioluminescent kuvantaminen ja modifioitu ELISA-määritys (ECLISA) levitettiin. Ensinnäkin, antaa arvioita tuumoritaakka solujen määrä, 35 eläimiin ruiskutettiin vaihteleva määrä lusiferaasin ilmentävien SKOV-3-solut (SKOV-3-Luc) ja

in vivo

bioluminesoiviin fotoni signaalit kvantitoitiin (toinen kohortti , Human munasarjasyöpä eläinmallissa, materiaalit ja menetelmät). Regressioanalyysi suoritettiin (log

10) fotoni ulostulo vs. (log

10) määrä ympättiin soluja tuottamaan standardin kalibrointikäyrän (kuvio 6A). Käänteisen ennustuksen yhtälön (katso materiaalit ja menetelmät) oli peräisin regressioanalyysin estimaattien saamiseksi solujen määrä, eli ennustaa kasvaimen taakka fotonivuon lähtö eläviä eläimiä.

(A) fotonivuon mittaustulosten hiiristä kätkeminen määritelty määrä bioluminesoivista SKOV-3-Luc solujen vatsaontelossa. Regressioanalyysi suoritettiin (log

10) fotoni ulostulo vs. (log

10) määrä ympättiin soluja tuottamaan standardin kalibrointikäyrän avulla käänteistä ennusteen yhtälö (katso materiaalit ja menetelmät). Tätä käytettiin ennustamaan kasvaimen taakan fotonivuon mittauksista (katso myös kuva 6C). (B) Vertailu seerumin S100A6 in kasvain (T, umpinaiset ympyrät) ja suolaliuoksella siirrostettiin kontrollihiiriin (SC, avoimet ympyrät). Seerumin S100A6 pitoisuuksia, testataan yksittäisiä yksilöitä useista hiirillä ECLISA (merkitty yksittäiset arvot vaakaviivan mediaani), olivat merkittävästi erilaiset välillä T vs. SC kussakin kolme kertaa testattu inokulaation 9 päivää (p = 0,015) 15 päivää (p = 0,036), ja 21 päivää (p = 0,0031) (Wilcoxonin Rank Sum testi). (C) välinen korrelaatio arvio kasvaimen taakkaa OVCA carcinomatosis ja seerumin S100A6, mitattuna ECLISA päässä on kasvain (r = 0,79, p 0,0001).

Sen määrittämiseksi, onko seerumin S100A6 tasot kärjistyi kasvaintaakka lisääntyi ajan päällä tutkimuksessa hiirille ruiskutettiin SKOV-3-Luc tai suolaliuosta (kolmas kohortti, Human munasarjasyöpä eläinmallissa, materiaalit ja menetelmät). Päivinä 9, 15, 21 ja 28 infektoinnin jälkeen, kaikki SKOV-3-Luc-inokuloitiin hiiret olivat optisesti kuvattavan saada fotoni ulostulo kasvavia syöpiä. Fotonivuon data muutettiin sitten arvioiden

in vivo

kasvainsolun taakka. Kymmenen eläintä kukin kasvain ja kontrolliryhmien otettiin verta ja poistettiin tutkimuksesta kunakin ajankohtana; Seerumin S100A6 taso kvantitoitiin ECLISA kaikkien tutkimuksessa hiirille. Vertailut seerumin S100A6 keskittymän tuumoreita kantavaa hiirtä ja suolaliuoksella injektoitiin valvonta paljasti, että, kuten jo 9 päivää infektoinnin jälkeen, oli merkittävästi suurempi seerumin S100A6 pitoisuus on kasvain, kauan ennen kuin tunnistaa kasvaimen massat olivat läsnä; merkittävä ero seerumin S100A6 taso säilyi koko päivä 15 päivään 21 p.i. (Kuvio 6B). Useimmat päivä 28 p.i. seerumia käytettiin MS /MS-analyysiä varten, ja numerot jäljellä seeruminäytteistä oli riittämätön tähän tilastollista vertailua.

korrelaatio kasvaimen taakkaa ja seerumin S100A6 tasolla yksilöiden näistä samoista SKOV-3-Luc : itä hiiret haettiin seuraavaksi. Kun kasvaintaakkaa (solujen määrä) piirrettiin seerumin S100A6 proteiinipitoisuus näillä eläimillä, tulokset osoittivat erittäin merkittävä korrelaatio (r = 0,79, p 0,0001); Seerumin S100A6 pitoisuus oli suurempi kuin kasvaintaakkaa kasvoi ajan mittaan eläinten annetaan SKOV-3-Luc (kuvio 6C). Määrä S100A6 suolaliuoksella ruiskutetaan ohjaus hiirillä säilyi lähellä perustaso kaikissa tutkimuksen ajankohtina, tyypillisesti lähentämällä alaraja S100A6 ECLISA tunnistus (kuvio 6B, SC). Kasvavat konsentraatiot S100A6 havaittiin myös kerättyjen seerumeiden jaksoittain 1, 2, ja 4 viikkoa infektoinnin jälkeen Yksittäisten hiirien sisällä alkuperäisestä kohortin 20 hiirillä emo SKOV-3 solulinja (tuloksia ei esitetty).

Serum S100A6 Levels in Human OVCA Study Sarjaa liittyvät Disease Stage

sen määrittämiseksi, oliko yhdistyksen välillä koholla S100A6 proteiinin ja kasvaintaakka naisilla OVCA, suoritimme on kokeilu käyttämällä kontrolloituja ihmisen kliinisessä tutkimuksessa joukko 66 diagnostisia seeruminäytteistä, jotka oli käytettävissämme kautta USA-ITALIA Oncoproteomics Ohjelmoida. Sera oli saatu ennen hoidon naisilta varhaisvaihetta (I-II b) ja rajatapaus OVCA (n = 23), ja naiset, joilla on edennyt vaiheeseen (Ile-IV) sairastaville potilaille (n = 43). Immunobloteilla, jossa C1 anti-S100A6, suoritettiin käänteisfaasi- proteiini microarray (RPMA) dia. Käyttämällä tätä tekniikkaa, tasot S100A6 havaittiin tilastollisesti koholla seerumeista naisten pitkälle tauti verrattuna niihin, joilla alkuvaiheen kasvaimet (p = 0,031), mikä osoittaa yhdistyksen välillä kliinisiä piirteitä suurempi kasvaintaakkaa ja kohonneeseen S100A6 in OVCA potilailla (kuva 7).

scatterplot näyttää suhteellinen voimakkuus seerumin S100A6 arvojen naisille alkuvaiheen (avoimet ympyrät, n = 23) ja pitkälle (umpinaiset ympyrät, n = 43) OVCA. Alkuvaiheessa tauti ryhmä sisältää 2 kasvaimia diagnosoitu rajatapaus OVCA. Keinot suhteellinen intensiteetti arvot analyytin pitoisuuksien esitetty (vaakasuorat viivat) ovat merkittävästi erilaiset kumpaankin ryhmään (p = 0,031, kahden otoksen t-testi), ja esittävät suhteellisesti suurempi keskimääräinen S100A6 pitoisuus seerumeissa pitkälle potilaista.

keskustelu

S100A6 todettiin hiirten seerumeissa ihmisen OVCA käyttämällä MS /MS-pohjainen alhaalta ylös proteomiikan strategia yritetään löytää ehdokas biomarkkereita johdettu syöpäkasvain . Ihmisen kasvaimen alkuperän S100A6 perustettiin mallia, ja seerumin S100A6 korreloi määrä kokeellisen syöpä läsnä. Lisäksi kliininen merkitys osoitettiin kautta löytö mahdollisuuksia seerumin S100A6 korreloivan tuumorikuorma käytetään ihmisen kliinisessä tutkimuksessa sarjaa.

aikana tietojenkeruuvaiheessa, seerumin erotusmenetelmä eristämiseksi LMW proteomiin käytettiin rikastuttaa proteiineja /peptidit kiertävä suhteellisen alhainen runsautta, käsitellään monimutkaisuus koko seerumin proteomiin. Ihmisen SKOV-3 solujen ksenografti hiirimallissa tarjotaan mahdollisuus arvioida lajien eroja vaivaa luokitella syöpään liittyvään proteomiin joko kasvainperäinen (ihmisen) vs. isännän vaste (hiiri). Syvemmin kliinisissä validointitutkimuksissa ovat perusteltuja tutkimaan mahdollisuuksia seerumin S100A6 palvelemaan ehdokkaaksi biomarkkeri arviointia naisten OVCA, erityisesti seurantaan toistumisen. Tämä lähtökohta tukevat seuraavat todisteet: (1) läsnä ollessa ihmisen peptidin sekvenssi S100A6 seerumeissa, (2) havaitseminen S100A6 proteiinin ekspression kokeellisiin kasvaimiin, mutta ei ympäröivään ei-neoplastisten hiiren kudoksissa, (3) myönteinen ja suora korrelaatio S100A6 seerumissa eikä kasvain taakka ksenograftimallia, (4) osoitus kohonnut S100A6 ilmaisun kudoksissa ja solu- linjat OVCA potilaista, mutta harvoin normaalissa munasarjassa, tässä ja muissa tutkimuksissa [21], [22 ], ja lopuksi (5) merkitsevää nousua analyytin seerumeista naisten pitkälle OVCA vs. naisten varhaisessa vaiheessa sairaus. Rajoittaminen alustava seulonta hiirillä on SKOV-3 solulinja tässä tapauksessa siis ollut esteenä tunnistaa mahdollinen kliininen korvike biomarkkeri lisävalidointia. Muita ihmisen OVCA kudos liittyvien proteiinien raportoitiin myös seerumissa käyttäen tätä lähestymistapaa, ja nämä voidaan testata edelleen varten ehdokas biomarkkerin potentiaaliset sovelletun strategian täällä.

S100A6 on harjoitettu ensimmäinen validointi ehdokkaaksi seerumin biomarkkereiden takia sen yhdessä syövän etenemisessä [22], [23]. S100A6 on pieni kalsiumia sitova proteiini, joka kuuluu S100 proteiinin perheen. Noin 25 jäsentä S100 perhe on ominaista 2 EF-käden rakenteisiin ja todennäköisesti kalsiumin tunnistin [24]. S100 proteiineja on osallisena erilaisia ​​fysiologisia ja patologisia prosesseja, mukaan lukien solujen lisääntymisen, erilaistumisen ja solunsisäinen signalointi, mutta niiden täsmällinen toimintoja voidaan vielä tarkemmin määritelty [24] – [27]. Suhteessa S100A6, sen ilmentyminen on normaalisti fibroblasteissa ja epiteelisoluissa [28], ja kohonnut S100A6 on raportoitu useissa ihmisen syöpätyyppejä, mukaan lukien karsinoomat paksusuolen, haiman, rinta-, munasarja-, keuhko- ja kilpirauhasen [29] – [35].

on ristiriitaisia ​​raportteja siitä roolista S100A6 pelaa syöpä. Vimalachandran et. al. [29] tutkittu ekspressiokuviota S100A6 sitä koskevilta kliinistä tulosta haimasyövän ja S100A6 ilmentyminen oli negatiivinen ennustetekijä. Korkea, erityisesti ydinaseiden, ilmentymistä S100A6 liittyi huonoon ennusteeseen. Lisäksi, asteittaisen lisäämisen S100A6 aikana haiman syövän synty on raportoitu [36]. Sitä vastoin kohonneet S100A6 vähentynyt liikkuvuus luusarkoomasoluissa ja liittyi vähentynyt kliinisesti todettu etäpesäkkeitä [37]. Vastaavasti, lisääntynyt S100A6 ilmentyminen liittyi eloonjäämisen hyötyä ei-pienisoluisen keuhkosyövän [35]; S100A6 osoitettiin 2 keuhkosyöpää potilaiden seerumit, ja pleuraeffuusio yhden. Tässä tutkimuksessa olemme laajentaneet arvo S100A6 sisällyttää sen kuin OVCA seerumin biomarkkereiden osoittamalla positiivista ilmentymistä ihmisen OVCA käyttäen Immunohistokemian sekä yhdistyksen välillä S100A6 seerumin taso ja kasvaintaakkaa niin hiirillä ja ihmisen potilaille. Se, että S100A6 täydentävät useat ihmisen syövissä, viittaa siihen, että sen käyttö ainoana biomarkkereiden voi kohdata potentiaalisia vääriä positiivisia ilmaantuvuus, muistuttaa CA-125. Siksi joissa S100A6 paneeliin syövän biomarkkerit on looginen lähestymistapa on jatkettava.

esiintyvyys on alhainen OVCA tekee perustamisesta ja validointi kliinisen biomarkkerit käyttämällä ihmisen näytteitä vaikeaa. Vain 1 2500 postmenopausaalisilla naisilla arvioidaan vaikuttavan OVCA vuosittain [38], [39]. Tämän vuoksi alhainen esiintyvyys, väestön seulontaa tarvitaan suuri määrä potilaita ja siksi on hyvin kallista OVCA biomarkkereiden löytö ja validointi. Tästä syystä käytön eläinmallissa voi olla kustannustehokas keino tarjota prekliinisten perustella laajassa kliinisessä validointitutkimusta. Hyödyntämällä OVCA eläinmalleissa tätä tarkoitusta varten edellyttää uskollisuutta sekä kokeellisia tavoitteet ja pääpiirteittäin kardinaali ominaisuuksia ihmisten sairauksien biologian.