Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tarkoitus

epiteelikasvaimet munasarjasyöpä on korkein kuolleisuus kaikista naistentautien syöpäsairauksia. Olemme osoittaneet, että korkeat RAN ilmaisu vahvasti korreloi korkealaatuisesta ja huono potilaan eloonjäämisen epiteelin munasarjasyöpä. Koska RAN on pieni GTPaasina osallisena kaksi biologisia toimintoja, nucleo-sytoplasman kuljetuksen ja mitoosia, se ei vielä tiedetä, mitä näistä toiminnoista osakkuusyrityksen huonon ennusteen.

Methods

tarkastella biomarkkerin arvo RAN verkon komponenttien serous epiteelin munasarjasyöpä, proteiinin ilmentymistä kuusi erityistä RAN kumppanit analysoitiin immunohistokemiallisesti käyttämällä kudosta mikrosirulla edustaa 143 potilasta, jotka liittyvät kliinisiin parametreihin. RAN BKT /GTP sykli arvioitiin ilmaus RANBP1 ja RCC1 Mitoosi toiminto TPX2 ja IMPβ sekä nucleo-sytoplasman ihmiskaupan toiminto XPO7, XPOT ja IMPβ.

Tulokset

Perustuu Kaplan-Meier analyysit, RAN, soluliman XPO7 ja TPX2 liittyi merkittävästi ottaen heikkoa elossaololuku, ja RAN ja TPX2 liittyi pienempi taudista elinaika potilailla, joilla on korkea-asteen vakavasta karsinooma. Coxin regressioanalyysi osoitti, että RAN ja TPX2 ilmaisun olivat riippumattomia ennustavat tekijät sekä yleisen ja taudista vapaan eloonjäämisen, ja että sytoplasminen XPO7 ilmentyminen oli ennustetekijä yleisen elossaololuku.

Johtopäätökset

Tässä järjestelmällistä tutkimusta, osoitamme, että RAN ja kaksi proteiinia osallistuvat kumppanit sen nucleo-soluliman ja mitoottista toiminnot (XPO7 ja TPX2, vastaavasti) voidaan käyttää biomarkkereina ositusta potilaille perustuu ennusteeseen. Erityisesti olemme raportoitu ensimmäistä kertaa kliinistä merkitystä exportin XPO7 ja osoitti, että TPX2 ilmaisu oli vahvin ennusteen arvioinnissa. Nämä havainnot viittaavat siihen, että proteiini kumppanit kussakin RAN toiminnot voidaan syrjiä tulosten korkealaatuisesta serous epiteelin munasarjasyöpä potilaille. Lisäksi nämä proteiinit osoittavat solun prosesseja, jotka voidaan viime kädessä pyritään parantamaan selviytymisen serous epiteelin munasarjasyöpä.

Citation: Cáceres-Gorriti KY, Carmona E, Barres V, Rahimi K, Létourneau IJ, Tonin PN , et ai. (2014) RAN Nucleo-Sytoplastiset liikenne- ja sukkularihmaston Assembly Partners XPO7 ja TPX2 Uusille Prognostiset Biomarkers in seroosit epiteelikasvaimet munasarjasyöpä. PLoS ONE 9 (3): e91000. doi: 10,1371 /journal.pone.0091000

Editor: Eric Asselin, University of Quebec Trois-Rivieres, Kanada

vastaanotettu: 26 heinäkuu 2013; Hyväksytty: 06 helmikuu 2014; Julkaistu: 13 maaliskuu 2014

Copyright: © 2014 Cáceres-Gorriti et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat tukea (MOP # 36056) Kanadan Institutes of Health Research (CIHR) A-MM-M, PNT ja DP. Kasvaimen pankki tukivat Banque de tissus et données on Réseau de Recherche sur le syöpä Fond de Recherche Québec – Santé (FRQS), joka liittyy Kanadan kasvain Repository Network (CTRNet). KYC-G tukivat osittain studentships päässä Carole Epstein säätiön ja Canderel rahasto Institut du syöpä de Montréal. Ijl tukivat FRQS postdoctoral koulutus palkinnon. A-MM-M ja DMP ovat tutkijat Centre de Recherche du Centre hospitalier de l’Université de Montréal (CRCHUM) ja PNT on tutkija tutkimuslaitos McGill University Health Centre (MUHC), jotka molemmat saavat tukea alkaen FRQS. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

epiteelikasvaimet munasarjasyöpä (EOC) on kaikkein vaarallisin kaikista gynecologic pahanlaatuisia kasvaimia Pohjois-Amerikassa [1] ja maailmanlaajuisesti. Tämä johtuu oireeton taudin luonteen mikä myöhään diagnoosi on viiden vuoden elossaolo 30% [2], [3]. Viimeisten 30 vuoden aikana edistysaskeleet kirurgian ja kemoterapia on ollut vähäinen vaikutus yleiseen elossaololuku [4], [5] ja Nykyinen hoito johtaa relapsiin suurin osa potilaista. Noin 80% EOC potilaista esittelee serous histotype [6], [7], joka on luokiteltu mukaan kasvaimen ja kliiniseen vaiheeseen, joka edustaa aste solujen erilaistumisen ja taudin leviämistä [8] vastaavasti. Molecular todisteet tukevat luokitus, joka erottaa tällaisia ​​potilaita vakavien karsinoomat kahdenlaisia: potilailla, joilla on matala-asteinen kasvaimet (LG, hyvin eriytetty) ja korkea-asteen kasvaimet (HG, huonosti eriytetty) [9], [10]. Potilaat, joilla LG vakavien kasvaimia tyypillisesti on hyvä ennuste, mutta osuus on 5% kaikista vakavasta EOCs. Potilaat, joilla HG vakavien syöpä on huono ennuste, jossa selviytymisen viiden vuoden alle 40% [11]. Tutkimus näihin kahteen erilliseen sairauksia, LG ja HG vakavien EOC, olisi näin tarjota parempaa ymmärtämistä munasarjasyövän biologian ja parantaa kliinisiä tuloksia. Lisäksi biomarkkereiden löytö erotteleva HG serous EOC potilailla, joilla on hyvä tai huono ennuste saattavat edistää potilaan terapeuttiseen kerrostuminen ja saattaa lisätä yleistä eloonjäämistä.

Aiemmissa tutkimuksissa olemme osoittaneet, että RAN (RA liittyvä Nuclear proteiini), vuonna EOC, on yli ilmaistaan ​​kasvaimen kasvaa ja on vahvasti yhteydessä huonoon elossaololuku [12], [13]. Siksi RAN toiminnot voidaan vapautettiin munasarjakarsinoomissa ja RAN ekspressiokuvioiden voidaan käyttää ennustetyövälineenä potilailla, joilla on edennyt EOC.

In vitro

käyttö lyhyt hiusneula-RNA (shRNA) kohdistaminen RAN ilmentyminen estää EOC-soluproliferaatiota, mikä viittaa RAN mahdollisena alistaa terapeuttinen kohde hoidettaessa tämän taudin [14]. Lisäksi laskussa RAN ilmaisun

in vivo

hiiren vierassiirrekokeissa johti pidätykseen EOC kasvaimen kasvua [14]. Nämä havainnot osoittavat, että RAN on mukana munasarjasyövän etenemistä ja ehkä tuumorigeneesiin ja /tai solujen selviytymistä. Nämä havainnot korreloivat hyvin samanlaiset tutkimukset eri syöpätyyppien [15] – [19].

Tällä solutasolla, RAN suorittaa kaksi suurta ja erillistä tehtävää. Tällä interphase, RAN säätelee nucleo-sytoplasmista kuljetus molekyylien kautta tumahuokonen monimutkainen [20], [21]. Tällä mitoosia, RAN suorittaa toinen toiminto ja ohjaa solusyklin etenemisen kautta sääntelyn sukkularihmaston muodostumisen [22].

RAN-GTP sykli säätelee kolme proteiinia; RCC1, RAN-GAP1, ja RANBP1 [23], [24]. RCC1 vaihto BKT GTP, muuntaa RAN-bruttokansantuotteestaan ​​RAN-GTP [23]. Sen sijaan RANBP1 ja RAN-GAP1 työn lisäämiseksi GTP hydrolyysin [24] ja siten täydentää RAN-BKT allas [25], [26]. RAN käyttää samaa GTP /GDP sykli säädellä sekä sen fysiologisiin toimintoihin. Kuitenkin kaltevuus GTP /GDP saavuttaa nämä sääntelyviranomaisten on ainutlaatuinen jokaiselle tehtävä RAN. Ydinvoiman kuljetus, kaltevuus on perustettu poikki tumakalvoa asymmetrisellä jakautuminen regulaattorin proteiinien [27]. Mitoosin aikana, vaikka mitään kalvo erottaa säätimet, kaltevuus saavutetaan läheisyydessä kromosomi kanssa RCC1 on kiinnitetty kromosomeja [27].

Vaikka RAN käyttää samaa sääntelijöiden GTP /GDP vaihto, se hyödyntää ainutlaatuinen kumppani proteiineja aikana interphase ja mitoosin suorittaa erilaisia ​​elintoimintoja (liikenne vs. kehräkokoonpanon). Aikana välifaasina, rikastamista RAN-GTP tumassa on kytketty exportins kuten exportin-t (XPOT) [28], [29] ja exportin-7 (XPO7 myös kutsutaan RANBP16) [30], [31], joka toimivat adapterit liittämällä tRNA ja proteiineja, vastaavasti, jotta tumasta niiden lastien. Sen sijaan, RAN-BKT sytoplasmassa sitoutuu importins, kuten Importiini β (IMPβ) [32], [33], jotka tunnistavat tumalokalisaatiosekvenssiai- (NLS) proteiinien helpottaa niiden liikkumista läpi ydinvoiman kirjekuori. Mitoosin aikana, RAN-GTP edistää kehräkokoonpanon tavalla, joka on riippumaton ydinvoiman liikenteen [34]. IMP β sitoo ja estää karan kokoonpano tekijät, kuten TPX2 (Targeting Protein varten Xklp2). Läheisyyteen kromosomeja, TPX2 on tämän jälkeen julkaissut helpottaa sääntelyn mikroputkiorganisaatiota ja dynamiikka [35].

tavoitteena tässä tutkimuksessa oli selvittää mikä funktio RAN olisi oleellisemmin sekaantunut HG serous EOC pahanlaatuisen ja huono potilaan selviytymistä. Voit tarkistaa vaikutusta yhden toiminnon

verrattuna

toinen, ilmaisun molekyyli kumppaneita, erityiset nucleo-sytoplasman liikenne ja mitoosia, analysoitiin immunohistokemia kudoksen microarray 143 serooseista karsinoomat käsittäen 131 tapausta HG ja 12 LG kasvaimia. Arvioimme ilmaus yksittäisten proteiinien korrelaatio kliinisten parametrien ja määrittää niiden ja EOC etenemiseen ja lopputulokseen. Lupaavia tuloksia saatiin kahdessa RAN kumppaneiden XPO7 ja TPX2, jolla on mahdollisuudet olla kliinisesti merkityksellisiä kerrostamiselintä HG vakavasta EOC potilailla.

Methods

Ethics lausunto

Chum institutionaalisten eettisen komitean (Comité d’éthique de la recherche du Centre hospitalier de l’Université de Montréal) hyväksyi tutkimuksen ja kirjallinen suostumus saatiin potilailta ennen näytteenottoa.

potilaille ja kudosnäytteiden

Kasvaimen näytteet saatiin potilailta, joille tehtiin leikkaus munasarjasyövän laitoksella Gynecologic Oncology – Centre hospitalier de l’Université de Montréal (Chum). Gynekologi-onkologi määrätietoisesti tauti vaiheessa määrittelemät Federation International Naistentautien ja synnytysten (FIGO). Riippumaton patologi tarkistetaan histopatologian ja kasvaimen. Tissue valintakriteerit tätä tutkimusta perustuivat riippumatonta vahvistusta vakavien histopatologiasta näytteissä kemoterapia-hoitamattomilla potilailla. Näytteitä kerättiin vuosien 1990 ja 2006 Potilaan kokonaiselossaolo määriteltiin aika leikkauksesta kuoleman munasarjasyöpään tai Viimeisimmässä seurannassa. Potilaan sairaus elinaika laskettiin leikkauksen aikana, kunnes ensimmäinen etenemiseen. Siksi vain potilaita, jotka edennyt olivat mukana analyysimme. Kliiniset tiedot etenemisestä vapaa väli määriteltiin mukaan veren CA125 ja kasvaimen kokoa arvioidaan kuvantaminen. Potilaita, joiden tiedetään olevan vielä elossa klo analyysin sensuroitiin heti viimeisen seurannan. Vuotiaita diagnoosin potilaiden LG kasvaimia vaihteli 27-71 vuotta (keskiarvo = 48,5 vuotta) ja niitä seurasi 50,6 kuukautta keskimäärin. Vuotiaita potilaita, joilla HG kasvaimia vaihteli 34-87 vuotta (keskiarvo = 62,6 vuotta) ja keskimääräinen seuranta-aika oli 37,2 kuukautta. Kohortti on kuvattu taulukossa S1.

epiteelikasvaimet seroosit munasarjakasvain Tissue Microarray (TMA) B

Kaikki tapaukset tarkisti gynekologista patologi. Laadun ja tyypin munasarjasyövän [9], [10] tunnistettiin ja kiinnostuksen oli merkitty dioja. Kaksi ydintä 1mm kudos- näytteestä puettu päälle kaksi vastaanottaja parafiinilohkoihin. Tämä kudos joukko koostui ytimien 12 LG ja 131 HG kasvaimet (2 ydintä kohti potilaan näytettä) ja vakavien histopatologisia alatyyppi ja kuusi parafinoidut EOC solulinja pellettiä värjäytymistä valvonta (292 yhteensä ydintä). TMA Sitten leikattiin, värjättiin hematoksyliinillä-eosiinilla ja alistettiin uuden tarkastelun kudoksen patologia tarkistaa läsnäolo kasvain materiaalia kussakin ytimessä.

Western Blot analyysi

laatu ja spesifisyys yksittäisiä vasta-aineita, joissa varmistettiin Western blot -analyysillä. Kokonaisproteiinin uutteet (30 ug) ladattiin ja ajettiin elektroforeettisesti SDS-polyakryyliamidigeelillä siirrettiin sitten nitroselluloosakalvolle. Membraanit blokattiin 5% maitoa PBS: llä (1 h) ja sen jälkeen testattiin primaarisilla vasta-aineilla (2 tuntia huoneenlämmössä) optimaalisella laimennoksia (1:500 varten RAN, XPO7, XPOT ja TPX2; 1:200 varten IMPβ; 1:300 for RCC1; 1:75 sillä RANBP1). Jokainen primaarinen vasta-aine havaittiin HRP-konjugoitua sekundaarista vasta-ainetta (Santa Cruz Biotechnology Inc.), ja visualisoitiin parannetun kemiluminesenssin (ECL) menetelmällä (GE Healthcare, UK). Beta-aktiini käytettiin latauskontrollina (1:50,000) (Abcam, Cambridge, MA).

immunohistokemia (IHC) B

manuaalinen värjäys menetelmässä TMA lohko oli leikattiin 4 pm: SuperFrost + lasi mikroskooppiobjektilaseille (Fisher Scientific Limited, Nepean, oN, Kanada). Leikkeitä kuumennettiin 60 ° C: ssa 15 minuutin ajan, poistettiin parafiini ksyleenillä, vedettömät etanoli kaltevuus, ja pestiin fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa (PBS). Paljastamaan antigeenejä, levyt sijoitettiin 20 min korkeassa lämpötilassa korkeassa paineessa sitraattipuskurissa (10 mM natriumsitraatti, 0,05% Tween 20, pH 6,0) ja värjäämällä anti-RCC1 (1/50, SC-1161, Santa Cruz Biotechnology Inc.), anti-IMPβ (1/25, SC-1863, Santa Cruz Biotechnology Inc.), ja anti-TPX2 (1/100, NBP1-01041, Novus Biologicals), tai sitraatti-EDTA-puskuriin (10 mM natrium- sitraatti, 1 mM EDTA, 0,05% Tween 20, pH 8,0) ja värjäämällä anti-RANBP1 (1/25, SC-1159, Santa Cruz Biotechnology Inc.), anti-XPOT (1/50, LS-C80366, käyttöikä Biosciences Inc.) ja anti-XPO7 (1/200, LS-C55360, Lifespan Biosciences Inc.) vasta-aineita. Dioja inkuboitiin sitten 3% vetyperoksidilla PBS: ssä (endogeenisen peroksidaasin salpaamiseksi) ja pestiin PBS: ssä. Kudosleikkeet blokattiin ei-seerumin proteiineihin salpausreagenssissa (DakoCytomation Inc., Mississauga, ON, Kanada) 15 min ajan huoneenlämpötilassa ja inkuboitiin primäärisen vasta-aineen 60 minuuttia huoneenlämpötilassa kosteassa kammiossa. Vaihdosta primaarisen vasta-aineen kanssa PBS: llä toimi negatiivisena kontrollina. Objektilasit pestiin sitten PBS: ssä, inkuboitiin toissijaisen vasta-aineita, jotka on konjugoitu piparjuuriperoksidaasiin (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA). Reaktiotuotteet kehitettiin käyttäen diaminobentsidiiniä (DAB), joka sisälsi 0,3% vetyperoksidia enintään 5 min. Solujen tumat vastavärjättiin laimennettu hematoksyliinillä 1 min.

automatisoitu värjäys menetelmä, kohdat formaliinia parafiiniin upotettuja kasvaimet (4 um) värjättiin käyttäen BenchMark XT automatisoitu värjäyslaitteesta (Ventana Medical System Inc., Tucson , AZ). Antigeeni haku varten RAN suoritettiin Cell Conditioning 1 (Ventana Medical System Inc.) 30 minuutin ajan. Laseja inkuboitiin anti-RAN-aineella (1/100, SC-1156, Santa Cruz Biotechnology Inc.) 40 min, ja kehittänyt iView DAB havaitseminen kit (Ventana Medical System Inc.). Hematoksyliinillä ja sinistämisaineita reagenssia käytettiin counterstaining (Ventana Medical System Inc.). TMA havainnoitiin brightfield mikroskoopilla ja digitaalisesti kuvattiin (Aperio ScanScope, Vista, Kalifornia, USA).

Värjäys Kvantifiointi

Proteiinin ilmentymisen IHC pisteytettiin mukaan solunosasijaintia ja värjäytymisen intensiteetti pahanlaatuisten solut. Ydin- ja sytoplasminen ilmentyminen RAN verkon proteiinien munasarjasyövän kudoksissa havaittiin käyttäen digitaalisesti kuvantaa skannaa jokaisen värjättyä TMA ja teki mukaan värjäytymisen intensiteetti. Kunkin RAN verkon proteiinin epiteelin vyöhykkeitä kasvaimen ydintä, värjäytymisen intensiteetti DAB määriteltiin 0 (ei värjäystä), 1 (heikko värjäytyminen), 2 (kohtalainen värjäytyminen) ja 3 (voimakas värjäytyminen). Kaikki TMA analysoitiin sokea tutkimuksessa kaksi riippumatonta tarkkailijaa. Inter-luokitus korrelaatio (ICC) oli yli 75% kaikkien määrityksissä. Keskimääräinen kaikki ytimet, joilla on syöpä samasta potilaasta käytettiin analyysiin. Kun vahva eroja pisteytys kahden tarkkailijaa tapahtui ydin arvioitiin uudelleen päästä yksimielisyyteen kahden tarkkailijaa.

Tilastollinen analyysi

Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen SPSS ohjelmistoversio 16.0 ( SPSS Inc., Chicago, IL, USA), missä p 0,05 katsottiin merkittävästi. Proteiinin ilmentyminen kuviot RAN kumppaneiden korreloivat (Pearson korrelaatio testi, kaksisuuntainen) ja proteiinin ilmentyminen RAN ja taudin vaiheen (I-IV). Survival käyrät (eloonjäämiseen ja taudista vapaan eloonjäämisen) piirrettiin Kaplan-Meier estimaattori verrattuna käyttäen log-rank testi ja analysoitiin merkittäviä eroja. Kunkin RAN kumppanin, potilaiden määrä jokaisessa eloonjääminen käyrä tarkastellaan taulukossa S2. Yhden ja usean Coxin suhteellisen vaaran malleja käytettiin määrittämään riskisuhde kunkin merkin. Monimuuttuja analyysit tehtiin käyttäen riskin malliin, jossa on tulla menetelmällä. Enintään neljä riippumatonta muuttujaa sisällytettiin monimuuttuja Coxin regressiomallin välttää yli istuva.

Tulokset

ilmentäminen RAN ja sen Network Partner proteiinit seroosit EOC Kudokset

Sen määrittämiseksi, jos jokin kumppaneista RAN kietoutuvat biologian EOC, teimme IHC analyysi käyttäen TMA sisälsivät yhteensä 286 ydintä syövän näytteitä, jotka edustavat 143 potilasta. RAN ja kuusi RAN-kumppani proteiineja (RANBP1, RCC1, IMPβ, XPO7, XPOT ja TPX2), analysoitiin käyttämällä tätä kudosta array. Spesifisyys kullekin vasta-aine arvioitiin ensin Western blot -analyysillä käyttäen solu-uutteita neljä EOC solulinjojen (kuvio S1) ja IHC käyttämällä parafiiniin upotettuja solupellettejä samasta solulinjoissa (kuvio S2). Intensiteetti ja paikallistaminen värjäytyminen arvioitiin sitten käyttämällä digitaalisesti kuvantaa skannaa jokaisen värjättyä TMA. Ydin- ja sytoplasminen ilmentyminen RAN verkon proteiinien EOC kudoksissa havaittiin ja luokiteltu keskimääräinen värjäytymisen intensiteetti niin alhainen (tulokset 1) keskikokoinen (pisteet = 1 2) ja korkea (pisteet ≥2) (kuvio 1) lukuun ottamatta TPX2, joka luokiteltiin poissa (pisteet = 0) tai läsnä (tulokset 0), koska ainutlaatuinen värjäyskuvion tämän proteiinin (kuviot 1-2).

edustaja kuvia immunoperoxydase värjäys kuvio TMA ydin näkyvät kunkin proteiinin ja kasvaimen (suurennos 20 x). Kvantifiointi RAN (A-B), RANBP1 (C-D) ja IMPβ (G-H) oli ainoastaan ​​sytoplasman värjäytymistä. RCC1 (E-F) ja TPX2 (M-N) olivat yksinomaan tumassa. XPO7 (I-J) ja XPOT (K-L) kvantitoitiin sekä niiden ydin- ja sytoplasmisen ekspression.

Kunkin proteiinin värjäys voimakkuus määritettiin 0 (ei värjäystä), 1 ( heikko värjäytyminen), 2 (kohtalainen värjäytyminen) tai 3 (tumma värjäys) sisällä epiteelin osaston kaksi riippumatonta tarkkailijaa. Keskiarvo värjäytymisen intensiteetti kunkin proteiinia verrattiin huono laatu (valkoiset pylväät) ja korkean asteen kasvaimet (harmaat pylväät) käyttäen Student testi. * P 0,05 ** p≤0.005.

ilmentyminen RANBP1 (BKT) ja RCC1 (GTP), jotka ovat yleisiä proteiineja, jotka liittyvät RAN-GTP syklin alun perin tutkittu. IMPβ ilmentyminen analysoitiin samanaikaisesti arvioida sekä kaksi päätehtävää RAN. Sitten me nimenomaan selvitimme nucleo-sytoplasman funktio RAN arvioimalla ilmaus kaksi exportins: XPO7 ja XPOT. Lopuksi tutkimme TPX2 ilmaisu, jotta voidaan arvioida kehräkokoonpanon mitoosin aikana, toinen tärkeä tehtävä RAN. Kuvio 1 esittää edustavia kuvia värjäytymistä kunkin proteiinin HG vakavasta munasarjakarsinoomissa. Expression of RAN (kuvio 1A-C), RANBP1 (kuva 1D-F) ja IMPβ (kuvio 1J-L) on paikallistettu sekä sytoplasmaan ja tumaan, vaikka signaali kvantifiointi keskittynyt yksinomaan sytoplasmassa perustuu sen suurempi ekspressio tässä soluosastoon. Expression of RCC1 (kuva 1G-I) ja TPX2 (kuvio 1 Y-Z) olivat ydin-. Ydin- ja sytoplasminen värjäys havaittiin XPO7 (kuva 1 M-R) ja XPOT (kuvio 1 S-X) proteiinien ja molemmat kvantitoitiin.

RAN Network Proteiinit korreloivat kasvaimen

ottavat perustettu värjäyskuvio kunkin RAN verkon proteiinit, me sitten arvioi värjäytymisen intensiteetti mukainen kasvaimen (kuvio 2). Aikaisemmassa tutkimuksessa raportoimme havainto, että RAN värjäys positiivisesti yhteydessä lisääntyneeseen kasvaimen arvosana serous EOC [13]. Esillä olevassa tutkimuksessa käyttämällä rikastettua potilaan kohortin, olemme edelleen tukevat alkuperäistä havainto osoittaa, että tasot sytoplasmisen RAN olivat merkittävästi korkeammat HG kasvaimissa verrattuna LG kasvaimet (p 0,001) (kuvio 2A). Sytoplasmisen värjäytymisen intensiteetti RANBP1 (p 0,001), IMPβ (p = 0,048), ja ydinvoiman lokalisointi RCC1 (p = 0,004) olivat merkittävästi korkeammat HG verrattuna LG kasvaimia (kuvio 2B-D). Sillä Nucleo-sytoplasman RAN verkon proteiineja, ydin- XPO7 oli merkittävästi vähemmän ilmaistu HG kuin LG kasvaimet (p = 0,005), kun taas ei havaittu merkittäviä eroja havaittiin sytoplasmista XPO7 värjäystä tai sytoplasmista /ydin- XPOT värjäyksen (kuvio 2E-2 H). Mielenkiintoista, toisin kuin kaikkien muiden RAN verkon proteiineja tutkitaan, värjäystä mitoosi RAN kumppani TPX2 löytyi yksinomaan ytimet HG vakavien karsinoomien (p 0,001) (kuvio 2 I). Sen ilmentyminen kahtia joko positiivisia tai poissa koska ainutlaatuinen värjäyskuvion tämän proteiinin kasvaimissa potilaista. Tuloksemme viittaavat siihen, että vapauttaminen RAN verkon tyypillistä HG vakavien EOC, ja näin on linjassa viime ajatus, että HG ja LG serous EOC ovat erillisiä tauti yksiköitä [9], [10].

seuraava todentaa yhdistyksen välillä ilmaus RAN ja kukin RAN verkostokumppaneiden käyttäen Pearsonin korrelaatiota testin (kaksisuuntainen) (taulukko 1). Kuten odotettua, proteiinit, jotka osallistuvat GTP-sykli ja IMPβ, korreloivat positiivisesti RAN (RANBP1, p 0,001; RCC1, p = 0,026; IMPβ, p 0,001), mikä viittaa siihen pätevä RAN GTPaasina sykli (taulukko 1). Jotta tuma-sytoplasma-asema RAN merkittävä positiivinen korrelaatio havaittiin sytoplasmisen XPO7 (p = 0,028) sekä ydin- XPOT ilmaisu (p = 0,050) (taulukko 1). Ei kuitenkaan havaittu korreloivan värjäytymisen voimakkuudet RAN ja TPX2, mikä voi selittyä epäsuora luonne niiden vuorovaikutukseen mitoosin [35].

välinen yhteys ilmaus RAN tai RAN verkon kumppaneille tauti vaiheessa tutkittiin myös käyttämällä Pearsonin korrelaatiota testin (kaksisuuntainen) (taulukko 1). Merkittävä korrelaatio havaittiin vain RANBP1 värjäytymistä (p = 0,034), lievästi negatiivinen yhdistyksen (Pearson kerroin = -0,181) (taulukko 1).

RAN, XPO7 ja TPX2 ovat yhteydessä huonoon Patient Survival

Tutkimme suhde ilmaus RAN kumppanin proteiinien ja yleisen eloonjäämisen kohortin 143 potilasta. Kaplan-Meier selviytymisen käyrät johdettiin ja verrattiin log-rank testi HG tapauksissa vain (kuva 3, taulukot S2-S3). LG tapaukset eivät olleet mukana alhaisen määrä potilaita, mikä harvinaisuus tämän taudin, ja koska niiden erillisten tautitiedoista verrattuna HG tapauksia. Raja-arvoa ei saada ROC käyrät analyysit, ja välttää bias valinnassa cut-off jokaisen proteiinin, kaikki värjäyksen tulokset (ryhmitelty kuten kuvassa 1) otettiin huomioon määriteltäessä Kaplan-Meier -käyrät jokaisen proteiini.

Expression RAN verkon proteiinien arvioitiin ennustetekijöiden indikaattoreita ainoastaan ​​korkealaatuisia serous karsinoomien Kaplan-Meier-analyysi. Survival määriteltiin aika leikkauksesta kuoleman munasarjasyöpään tai Viimeisimmässä seurannassa. Log-rank testiä käytettiin määrittämään tilastollista eroa ryhmien välillä. For kentät A-H, matala värjäytymistä (sininen viiva) on määritelty arvot 1, keskikokoinen värjäys (vihreä viiva) määritelty = 1 2 ja korkea värjäytymistä (vaaleanpunainen viiva) määritellään ≥2. Sillä paneeli I, näytteet pisteytetään negatiiviseksi (musta viiva) tai positiivisia (harmaa viiva) ja TPX2 värjäystä. A-I, p tarkoittaa merkitys kaikissa ryhmissä. Paneelin J-K, negatiivinen TPX2 värjäys alhainen värjäytymisintensiteettiä RAN (J -musta viiva) tai XPO7 (K – musta viiva); negatiivinen TPX2 värjäys keski + korkea värjäytymisen RAN (J – syaani line) tai XPO7 (K – violetti viiva); positiivinen TPX2 värjäys keski + korkea värjäytymisen RAN (J – harmaa viiva) tai XPO7 (K – harmaa viiva). J-K, p (oikeassa yläkulmassa) lasketaan musta vs. syaani (RAN, paneeli J) tai violetti (XPO7, paneeli K). J-K, p (vasemmassa alakulmassa) lasketaan harmaa vs. syaani (RAN, paneeli J) tai violetti (XPO7, paneeli K). A-K, p 0,05 on lihavoitu kirjaimilla.

lisääntyvää sytoplasmista RAN värjäyksen HG serous EOC oli merkitsevästi yhteydessä huonompi kokonaiselinaikaa (p = 0,016; Kuva 3A, taulukko S3 ). Nämä havainnot ovat yhdenmukaisia ​​meidän ensimmäiset havainnot [13]. RAN verkostokumppaneita, korkea sytoplasmisen ilmaus XPO7 (p = 0,02, kuvio 3E) ja ydinvoiman TPX2 lauseke (p = 0,002, Kuvio 3I) korreloivat yleisen lyhyempi selviytymisen.

Jotta voitaisiin edelleen tutkia potentiaali prognostisia merkitystä RAN ja sen kumppani proteiinien yleistä elossaololuku, yhden muuttujan Coxin regressio analyysit tehtiin (taulukko 2). Soluliman RAN ja XPO7 värjäys ja ydinvoiman TPX2 lokalisointiin HG serous EOC merkittävästi korreloivat huono kokonaiselinaikaa (p = 0,008, p = 0,027, p = 0,002, tässä järjestyksessä). Nämä proteiinit olivat merkittävä riippumaton ennustavat tekijät selviytymisen riskisuhteita (HR = 1,82 RAN, HR = 1,58 varten XPO7 ja HR = 2,66 varten TPX2), joka on verrattavissa jäljellä tauti (HR = 1,82), joka on tunnettu ennustetekijä [3] .

Yhteenvetona tulokset viittaavat siihen, että XPO7, mukana RAN: n nucleo-soluliman vienti proteiinien, ja TPX2, kumppani RAN mitoosissa sekä RAN itse, voi edistää pahanlaatuinen potentiaali vakavien EOC ja vaikuttaa potilaan eloonjäämiseen.

Association of RAN ja TPX2 kanssa uusiutumisen seroosit EOC Potilaat

tärkeys RAN verkon proteiinien uusiutumisen yhteydessä taudista vapaa eloonjääminen määritettiin Kaplan-Meier-käyrä ja Cox regressioanalyyseissä kuten edellä on kuvattu. Lisääntyvää sytoplasmista RAN värjäyksen HG serous EOCs oli merkitsevästi yhteydessä lyhyempi taudista vapaan eloonjäämisen Kaplan-Meier-analyysi (p = 0,014; Kuva 4A, taulukko S3). RAN verkon proteiinit, Kaplan-Meier käyrä analyysit löytyy vain ydinvoiman TPX2 lokalisointi niin merkittävästi liittyy uusiutumisen HG vakavien EOC (p = 0,004; Kuva 4I, taulukko S3). Univariate Cox regressioanalyyseissä validoitu nämä havainnot, jossa RAN (p = 0,006) ja TPX2 (p = 0,006), proteiinit osoittivat merkittävää korrelaatiota taudin uusiutumisen (taulukko 2). Nämä löydökset olivat myös vertailukelpoisia riskisuhteita määritetään jäljellä tauti (taulukko 2).

Evaluation of RAN verkon proteiinin ilmentymistä vain korkealaatuisesta serous karsinoomien Kaplan-Meier-analyysi. Ilman taudin etenemistä vastaa aikaa kuukausina laskettuna, kun ensimmäinen leikkaus, kunnes ensimmäinen etenemiseen. Log-rank testiä käytettiin määrittämään tilastollista eroa ryhmien välillä. (Katso kuva 3 legenda lisätietoja).

Siksi tulokset viittaavat siihen, että RAN: n mitoosi toiminta sanottuna kautta TPX2 kumppani, näyttää olevan yhteydessä toistumisen HG vakavasta EOC.

monimuuttuja Analyysi vahvistaa vahvan liiton TPX2 ilmentäminen Patient Survival ja tauti uusiutuu

jotta määritellä tarkemmin mahdollisen ennusteen arvioinnissa RAN proteiiniverkko, Coxin monimuuttuja regressio analyysit tehtiin RAN ja kunkin kumppanin että saavutetaan merkitys univariate analyysiin.

Hazard suhteet RAN, XPO7 ja TPX2 yleisestä elossaololuku verrattiin standardin ennustetekijöiden kuten vaiheessa ja jäljellä tauti (taulukko 2). Tuloksemme osoittavat, että vain RAN (p = 0,015, HR = 1,84), TPX2 (p = 0,033, HR = 2,15) ja jäljellä tauti (p 0,05) olivat merkittäviä itsenäisiä ennustetekijöitä merkkiaineita eloonjäämiseen HG kasvaimia. Mielenkiintoista, sekä RAN ja TPX2 oli korkeampi HRS kuin jäljellä tauti (taulukko 2).

toistuminen, ekspressiokuvion RAN ja TPX2 verrattiin myös vakio ennusteen muuttujat (vaihe ja jäljellä tauti). Vuonna HG kasvaimet, vain RAN (p = 0,013, HR = 1,69) ja TPX2 (p = 0,024, HR = 2,53) olivat riippumattomia muuttujia ennustavat suuri riski toistumista (taulukko 2).

samanaikaista Yli- ilmaus rakenteessa TPX2 /RAN tai TPX2 /XPO7 liittyy huonompi tulos seroosit EOC Potilaat

Tuloksemme osoittavat, että ilmentyminen malleja RAN ja sen mitoottista kumppani TPX2 in serous EOC toimivat riippumattomat prognostisia biomarkkereita molemmille yleinen elossaololuku ja toistumisen. Me seuraavaksi arvioidaan yhdistettyä vaikutusta näiden kahden ehdokkaan biomarkkereita yleiseen ja taudista vapaan eloonjäämisen käyttäen Kaplan-Meierin käyrä analyysi. Tuloksemme osoittivat merkittävää eroa värjäytymiskuvioissa RAN ja TPX2 sisään ilman taudin etenemistä (kuvio 4J) HG tapauksissa. Erityisesti samanaikainen esiintyminen RAN ja TPX2 liittyi lyhyempi taudista vapaa eloonjääminen verrattuna läsnäolo RAN yksinään (15 kk vs. 30 kuukautta, p = 0,001, Kuvio 4J). Sama suuntaus havaittiin myös yleistä elossaololuku rajatilaisesta merkitystä (p = 0,07, kuvio 3J). Käyttämällä samaa analyysejä, olemme myös osoittaneet, että XPO7 ja TPX2 ekspressiokuvioiden liittyi merkittävästi sekä huonompi kokonaiselinaikaa (p = 0,012) ja lyhyempi taudista vapaan eloonjäämisen (p = 0,012) verrattuna läsnäolo vain XPO7 (kuvio 3K, Kuva 4K). On huomattava, että TPX2 ilmaisua, kun se tapahtui, oli aina liittynyt joko RAN tai XPO7 koekspressoimalla.

Keskustelu

Korkea RAN ekspressiotasot on raportoitu eri kasvaimissa, kuten haima , koolon-, keuhko-, nenänielun, vatsan ja munuaisten, verrattuna normaaleissa kudoksissa [17] – [19], [36]. Mielenkiintoista, RNA-interferenssi tutkimukset ovat osoittaneet, että juoksin asetuksessa rajusti vaikuttaa syöpäsolun selviytymisen mutta ei normaalien solujen [14], [18]. Huolimatta ratkaisevaa merkitystä RAN syöpäsoluissa on ollut vaikea määrittää, mitkä tehtävä tämä proteiini liittyy kasvainten synnyssä. Aluksi tämän kysymyksen olemme tutkineet ilmaus useita RAN kumppaneita, nimenomaan sen eri toimintoja, yhdessä EOC elossaololuku ja uusiutumisen.

Käytä suurempaa kohortin olemme tukee alkuperäistä havainnot, että potilaat korkea RAN ilmaisua serous EOC liittyvät sairauden etenemisen ja huono tulos [12], [13]. β-aktiini käytettiin latauskontrollina.