Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Viisikymmentä prosenttia potilaista lihasten invasiivisia virtsarakon syöpä (MI-BC) kuolee heidän sairautensa ja nykyistä kemoterapiaa vain marginaalisesti lisää selviytymisen. Uusien hoitomuotojen kohdistaminen reseptorityrosiinikinaaseilla tai aktivoitu onkogeenien saattaa parantaa lopputulosta. Siksi on tarpeen osittaa potilaille perustuvat mutaatiot asiaan onkogeenien. Potilaat, joilla on ei-lihas-invasiivisia virtsarakon syöpä (NMI-BC) on erinomainen säilymiseen, mutta kaksi kolmasosaa kehittyä toistuminen. Kasvain spesifisiä mutaatioita voidaan käyttää havaitsemaan toistuminen virtsaan määrityksissä, esittelee enemmän potilaan sopiva diagnostinen menettely kuin kystoskopiaa.

Menetelmät /Principal Havainnot

Näiden ongelmien kehitimme mutaatiokokeessa samanaikaiseen havaitsemiseksi 19 mahdollisia mutaatioita

HRAS

,

KRAS

, ja

sääntelyviranomaisten

geenejä. Tämän määrityksen ja mutaation määritykset

FGFR3

ja

PIK3CA

onkogeenien, me seulotaan ensisijaisesti rakkokasvaimista 257 potilasta ja 184 uusiutumisen 54 potilasta. Lisäksi, primaarikasvaimista p53 ilmentymistä saatiin immunohistokemiallisesti. Primaarikasvainten 64% oli mutantti

FGFR3

, 11%

RAS

, 24%

PIK3CA

, ja 26% p53.

FGFR3

mutaatiot olivat toisensa poissulkevia kanssa

RAS

mutaatioita (p = 0,001) ja yhteistyö tapahtui

PIK3CA

mutaatioita (p

=

0,016). P53 yli-ilmentyminen oli sulkevat toisensa pois

PIK3CA

ja

FGFR3

mutaatioita (p≤0.029). Mutaatiot

RAS

ja

PIK3CA

geenit eivät ennustavat toistumisen-vapaa, etenemisestä vapaan ja tautikohtaista selviytymistä. Potilailla, joilla oli NMI-BC asteen 3 ja MI-BC, 33 ja 36%: n ensisijaisen kasvaimia mutantti. Potilailla, joilla on matala-asteinen NMI-BC 88% primäärikasvaimissa kuljettaa mutaatio ja 88% uusiutumista oli mutantti.

Johtopäätökset /merkitys

Mutaatio määritykset esittää kumppani diagnostinen määrittelemään potilaille kohdennettuja hoitoja. Lisäksi analyysit ovat mahdollisia biomerkkiaine havaita uusiutumista seurannan aikana. Osoitimme, että 88% potilaista, joilla oli matala-asteinen NMI-BC ovat oikeutettuja tällaiseen seurantaan. Tämä voi auttaa vähentämään määrän cystoscopical tutkimuksia.

Citation: Kompier LC, Lurkin I van der Aa MNM, van Rhijn BWG, van der Kwast TH, Zwarthoff EY (2010)

FGFR3

,

HRAS

,

KRAS

,

sääntelyviranomaisten

ja

PIK3CA

Mutaatiot Virtsarakon syövän ja niiden mahdollisuuksia biomarkkereita Surveillance and Therapy. PLoS ONE 5 (11): e13821. doi: 10,1371 /journal.pone.0013821

Editor: Venugopalan Cheriyath, Cleveland Clinic, Yhdysvallat

vastaanotettu: 18 heinäkuu 2010; Hyväksytty: 13 lokakuu 2010; Julkaistu: 03 marraskuu 2010

Copyright: © 2010 Kompier et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Erasmus MC Breedtestrategie Grant (2002-2006) ja Alankomaat Organization for Health tutkimus ja kehitys (ZON-MW, 945-02-046). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Virtsarakon syöpä on viides yleisin syöpä länsimaissa [1]. Virtsarakon kasvaimia 15-20% esittelee lihas-invasiivisen sairauden (MI-BC), loput ryhmä ei-lihas-invasiivisen kasvaimet (NMI-BC). MI-BC on tuhoisa sairaus, sillä yli 50% potilaista kuolee etäpesäkkeitä. Äskettäin uusi kehitys kohdennettuja hoitoja käyttäen reseptori tyrosiinikinaasin estäjät muissa syöpätyyppeihin ovat inspiroineet mahdollinen hoitoon potilailla MI-BC samankaltaisia ​​adjuvanttiaineita [2]. Lihaksen-invasiivisia rakkokasvaimista FGFR3 täsmähoitoihin harkitaan [3], [4], [5], [6] ja viime aikoina vaiheen II tutkimus on alkanut tutkia tehoa TKI258, joka on FGFR3 estäjä, potilailla, joilla on edennyt uroteelisyöpä (www.ClinicalTrials.gov NCT00790426). Samoin epidermaalisen kasvutekijän reseptori (EGFR) on usein yli-ilmennetään virtsarakon syöpä ja saattaa siksi olla tärkeä terapeuttinen kohde MI-BC [7], [8], [9]. Nykyisin EGFR kohdennettu hoito tutkitaan virtsarakon syövän useissa kliinisissä tutkimuksissa (CALBG-90102, NCT00088946, NCT00380029). Kuitenkin viime aikoina on käynyt selväksi, että hoidot kohdistuvat reseptorityrosiinikinaasien ei ehkä ole tehokas, kun kasvaimet satama mutaatiot RAS-MAPK tai PIK3CA-AKT reittejä alavirtaan reseptorien [10], [11], [12], [13] , [14]. Kuitenkin aineet estämällä tavoitteet loppupään näissä reitit ovat kliinisissä kokeissa. Tämä viittaa siihen, että seulonta rakkokasvaimista mutaatioita geeneissä, kuten

FGFR3

,

RAS

ja

PIK3CA

voi olla merkitystä tulevaisuuden hoitoa päätöksiä. Helppo testi, joka voidaan toteuttaa klinikalla on siten toivottavaa.

Ei-lihas-invasiivisia virtsarakon syöpä (NMI-BC), suurin ongelma on, että kun alkuperäisen höyläysleikkaus virtsarakon (TURB) , 50-70% potilaista kehittyy useita toistuminen, ja saattaa nousta 10-20%, että nämä edetä MI-BC [15], [16], [17]. Toistumisen riski ja etenemisen riskiä edellyttävät elinikäisen seurannan kystoskopian. Nykyinen standardi on suorittaa kystoskopian yhdessä virtsan sytologian 3-4 kuukauden välein 2 ensimmäisen vuoden aikana ja kahdesti vuodessa sen jälkeen [18]. Olemme viime aikoina osoittaneet, että Alankomaissa potilaalla on NMI-BC tehdään keskimäärin 20 cystoscopies aikana ensimmäiset 9 vuotta seurannassa [17], jossa on toistuminen havaittiin vain yksi seitsemästä näistä seurannan hetkiä. Sillä Yhdysvalloissa ja Euroopassa asukkaan 300 ja 450 miljoonaa, tämä merkitsisi 1 ja 1,5 miljoonaa cystoscopies vuosittain. Vähentäminen määrän cystoscopies mukaan esimerkiksi virtsa-pohjainen testi on tärkeä tavoite, jotta laadun parantamiseksi-of-life [19], [20], [21]. Lisäksi se voisi johtaa kustannusten vähentämiseen. Tällä hetkellä, virtsarakon syöpä on kallein syövän tyyppi hoitoon potilasta kohden [22], [23]. Kuitenkin sytologia ja monet tällä hetkellä kehitetty virtsa biomarkkerit ovat rajalliset havaitsemisherkkyyden alhaisen vaiheessa ja laatu kasvaimia, jotka muodostavat pääryhmän toistuvat (tarkistetaan [24], [25], [26], [27], [28 ]). Siksi tarvitaan herkempiä virtsan biomarkkereita, jotka voidaan toteuttaa osaksi molekyylidiagnoositekniikoiden laboratorioissa.

NMI-BC ja MI-BC ovat geneettisesti erilaisia ​​[29], [30]. NMI-BC kasvaimet on tunnusomaista tiheä mutaatioita

FGFR3

onkogeeni [31], [32] mikä konstitutiivisen aktivaation RAS-MAPK-reitin [33], [34], [35] , [36], [37]. In MI-BC, mutaatioita

TP53

geenin vallitsevat. Mutaatiot

FGFR3

ja

TP53

ovat pitkälti toisensa poissulkevia viittaa siihen, että NMI-BC ja MI-BC kehittää pitkin eri oncogenesis reittejä [38], [39]. Kuitenkin vaiheessa pT1 kasvaimia, jotka hyökkäävät sidekudoksen kerroksen taustalla uroteelin, ne tapahtuvat usein yhdessä [32], [38], [39]. Äskettäin somaattiset mutaatiot

PIK3CA

onkogeeni, joka koodaa katalyyttistä alayksikköä p110α luokan-IA PI3-kinaasin, kuvattiin 13-27% rakkokasvaimista [40], [41]. Nämä mutaatiot usein samaan aikaan

FGFR3

mutaatioita. Mutaatiot

RAS

onkogeenien (

HRAS

,

KRAS

,

sääntelyviranomaisten

) on löytynyt 13%: rakkokasvaimista ja esiintyi kaikissa vaiheita ja asteet [41], [42]. He olivat toisensa poissulkevia kanssa

FGFR3

mutaatioita. Kuitenkin ei ole tietoa siitä, ennusteen arvioinnissa, mitä toistumisen-vapaa, etenemisestä vapaan ja tautikohtaista säilymiseen, on

RAS

ja

PIK3CA

mutaatiot virtsarakon syöpä joko yksin tai yhdistettynä muihin muutoksiin. Joissakin syöpätyyppien

PIK3CA

mutaatioita on liittynyt invasiivisuus ja huonompi ennuste [11], [43], [44], [45], [46]. Toisaalta, on olemassa esimerkkejä somaattisten mutaatioiden hyvänlaatuisia ihovaurioita, jotka eivät etene [47], [48]. Mitä muutoksia RAS ja ennuste, aiemmin ole tehty sen ennusteen arvioinnissa ilmentymisen RAS p21-proteiinin, mutta tulokset eivät olleet yhtäpitäviä [49], [50], [51]. Tuoreessa tutkimuksessa on ilmaus

HRAS

48 pTa rakkokasvaimista osoitti käänteinen korrelaatio ilmaisun arvon uusiutumisesta ja kehityksestä [52]. Kuitenkin, ei ole tietoa ennusteen arvioinnissa mutaatioiden kolmessa

RAS

geenien virtsarakon syöpään.

Olemme äskettäin osoittaneet, että

FGFR3

mutaation analyysi virtsan näytteet virtsarakon syövän potilaiden oli mahdollista havaita toistuvien kasvainten [53], [54]. Tekninen suorituskyky

FGFR3

mutaatiokokeessa Näissä tutkimuksissa oli erinomainen. Kuusikymmentä-kolme prosenttia potilaista, joilla NMI-BC ovat mutantti

FGFR3

. Lisäksi tavoitteena Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli tutkia, lisäämällä

RAS

ja

PIK3CA

mutaation analyysi

FGFR3

mutaation havaitseminen saattaa lisätä potilaiden osuus, jotka voivat olla tarkkailtiin käyttäen virtsa-perustuvia määrityksiä varten nämä mutaatiot. Lisäksi nämä määritykset voivat olla käyttökelpoisia klinikan määritellä potilaille, jotka voivat hyötyä kohdennettuja hoitoja. Siksi olemme kehittäneet multiplex mutaatio koe havaitsemiseksi useimmin esiintyvien

HRAS

,

KRAS

, ja

sääntelyviranomaisten

mutaatioita virtsarakon syöpään. Tämä määritys perustuu määrityksiä, jotka olemme aikaisemmin kehittäneet [53], [55], [56]. Kokemuksemme mukaan nämä määritykset ovat herkkiä, on helppo tehdä ja tulkita, ja vaativat vain muutaman nanogrammaa DNA: ta. Analyysit ovat myös onnistunut DNA formaliinikiinnitetyt parafiiniin upotetut (FFPE) kudoksen tai virtsan [53], [54], [56].

jälkeen tutkittiin mutaatio kirjo

FGFR3

,

HRAS

,

KRAS

,

sääntelyviranomaisten

ja

PIK3CA

suuressa sarjassa primaarikasvainten 257 potilaalla on NMI-BC ja MI- BC. Mutaatiostatus verrattiin myös p53 ilme. Jakautuminen muutokset näissä kuusi geeniä yhdessä ei ole tutkittu rakkokasvaimista ennen. Olemme edelleen seulotaan 184 toistuminen 54 potilasta, onko mutaatio asema on johdonmukaisesti uusiutumista, jonka tarkoituksena on tutkia, jos se on hyödyllistä aloittaa pitkittäistutkimuksen valvontatiedot näillä mutaatio assay toistuvien virtsarakon syövän mitätöity virtsanäytteitä potilailta . Taajuus mutaatioiden

RAS

ja

PIK3CA

pituussuunnassa ympäristössä, joka sisältää useita toistuminen saman potilaan ei myöskään ole vielä tutkittu ennen.

Olemme päätellä, että mutaatio määrityksissä esittää kumppani diagnostinen ositusta potilaalla on MI-BC kohdennettuja hoitoja. Lisäksi, koska 88%: n ensisijainen kasvain potilailla, joilla on matala-asteinen NMI-BC kuljettaa mutaatio

FGFR3

,

RAS

, ja /tai

PIK3CA

geenejä ja 88% uusiutumisista olivat mutantti, analyysit ovat potentiaalinen keino havaita toistuminen DNA saatu virtsanäytteistä seurannan aikana, mikä voi auttaa vähentämään määrän cystoscopical tarkastukset ja kannattaa tutkia.

Methods

Potilaan ominaisuuksista ja etiikka selvitys

Formaliinifiksoidusta parafiiniin (FFPE) näytteet ensisijainen kasvainten valitsematon ryhmän 257 potilasta saatiin Erasmus MC ja St Franciscus Gasthuis, Rotterdam, Alankomaat. Kasvain näytteet edustavat alaryhmä 286 näytteet, jotka olemme aikaisemmin on kuvattu [32]. Ei kudos oli enää saatavana varten 29 puuttuvat näytteet. Keski-ikä tämän ryhmän potilaiden diagnoosi oli 65,7 vuotta ja mies /nainen suhde oli 3/1. Kasvaimet lavastettu mukaan Kasvaimen etäpesäke luokittelu 1997 [57] ja laadut luokiteltiin mukaan Maailman terveysjärjestön kriteerien 1973 [58]. Niistä primäärikasvaimissa oli 166 PTA 57 pT1, ja 34 pT2-4 kasvaimia. Luokka jakelu oli 84 astetta 1, 117 asteen 2 ja 56 asteen 3 kasvaimia. 54 potilaalla, jotka käsiteltiin Erasmus MC ja oli kehittynyt yhden tai useamman toistuminen, formaliinilla kiinnitetyt parafiiniin kudosta kerättiin 184 peräkkäisen toistuminen. Kliiniset tiedot kasvainten saatiin potilaan sairauskertomuksen. Tiedot analysoitiin anonyymisti. FFPE näytteitä käytettiin standardien mukaan esitetty ”Code for Oikea Toissijainen käyttö Ihmiskudokset Alankomaissa” (https://www.federa.org/). Tietoon perustuva suostumus ei siis ollut tarpeen saada. Tämä hyväksyttiin meidän Institutional Review Board. Toistuminen määriteltiin kasvain poistettiin höyläysleikkaus, joka myöhemmin vahvistettiin tuumorin kudoksen patologi. Kasvaimet poistettiin kolmen kuukauden kuluttua höyläysleikkaus ei pidetty toistumisen. Progression määriteltiin etenemisen vaiheessa ja /tai luokan 3 tautikohtaisia ​​eloonjääminen määritettiin diagnoosista kuolemaan virtsarakon syöpään. Seurantajakson aikana laskettiin alkaen diagnoosin. Sensurointi potilaista ilmeni heidän viimeisen kliinisen käynnin tai kun potilas kuoli. Yleensä potilaita seurattiin ja käsiteltiin ohjeiden mukaisesti European Association of Urology [18]. Lääketieteellinen-eettinen komitea Erasmus yliopiston ja yliopistollisen sairaalan Rotterdamin hyväksyi tutkimuksen (METC 168,922 /1998/55).

DNA eristys ja mutaatio analyysi

Hematoksyliini-eosiini värjätään dioja käytettiin histologista diagnoosia ja toimi malleja käsin mikro leikkelyn vastaavasta kudoksesta lohkoja. Dissekoiduissa kasvain näytteet sisälsivät vähintään 70% kasvainsoluja. Kasvaimen näytteet uutetaan Formaliinifiksoidusta parafiiniin kasvain kudosta de-vahaus ksyleenillä ja etanolilla. DNA eristettiin käyttäen DNeasy Tissue Kit (Qiagen, Hilden, Saksa), protokollan mukaisesti. P53, MIB-1 ja p27

Kip1 immunovärjäyksellä saatiin van Rhijn

et al.

[32].

Alukkeet multiplex RAS-BC määritys suunniteltiin siten että yksittäinen säikeitä PCR-tuotteiden sisältämän niin vähän mahdollinen sekundaarinen rakenne kuin mahdollista, jotta voidaan edistää tehokasta hehkutus mutaation detektiokoettimia. Alukesuunnittelu edelleen pyritään saavuttamaan sama hehkutuslämpötiloja mahdollistaa samanaikaisen monistamisen asiaa eksonien kolmen

RAS

geenit yhdessä PCR-reaktiossa. Lisäksi alueet voidaan monistaa tarkastettiin läsnäolo polymorfismien tietokantaan National Center for Biotechnology Information. Ei polymorfismit näillä alueilla havaittu. Mutaatio detektiokoettimia varten multiplex havaitsemiseksi

HRAS

,

KRAS

ja

sääntelyviranomaiset

mutaatioiden tarkoituksena oli pariutua joko eteenpäin tai käänteinen lohkon suoraan vieressä mahdollisen mutaation . Määritystä, 19 mahdollista mutaatiot 10 kodonit 3

RAS

geenejä voidaan havaita. Yhdessä ne muodostavat 96% kaikista somaattisten

HRAS

,

KRAS

ja

sääntelyviranomaisten

mutaatioita löydettiin urothelial solukarsinoomat Sangerin Institute (www.sanger.ac.uk /genetiikka /CGP /kosmista). Jotta erottaa koettimet koon, poly (dT) hännät eripituisia lisättiin. Kaikki alukkeet suunniteltiin olevan samankaltaiset hehkutuslämpötiloja ja valittiin puuttuminen sekundaarirakenteita ja emäspariutumisen kanssa muista antureista. Primer ja koetin sekvenssit ja pitoisuudet kolmen multiplex mutaatio määritykset

FGFR3, sääntelyviranomaisten, HRAS, KRAS

ja

PIK3CA

kuvataan kuviossa 1 ja 2

Jokainen multiplex PCR-reaktio suoritettiin kokonaistilavuudessa 15 ui, joka sisälsi 0,17 mM dNTP: itä (Roche, Basel, Sveitsi), 1,5 mM MgCl2: a, 5% glyserolia (Fluka, Buchs SG, Sveitsi), 0,3-1,2 uM sopiva alukeyhdistelmällä (Invitrogen, Carlsbad, CA), 1 x PCR-puskuria ja 0,5 yksikköä Go Taq DNA-polymeraasia (Promega, Madison, WI), käyttäen 5 ng genomista DNA: ta templaattina. Lämpökäsittelyyn koostuivat alkudenaturaatio 95 ° C: ssa 5 min, jota seurasi 35 sykliä kukin 95 ° C: ssa 45 sekuntia, 55 ° C 45 sekuntia ja 72 ° C: ssa 45 sekuntia. Lopullinen venymä vaihe oli 72 ° C: ssa 10 min. Rekisteröimätön alukkeita ja deoksinukleotiditrifosfaatteja poistettiin PCR-tuotteet lisäämällä 2 yksikköä eksonukleaasi I (Exol) ja 3 yksikköä katkaravun alkalista fosfataasia (SAP, USB, Cleveland, Ohio USA).

PCR-tuotteet analysoitiin myöhemmin mutaatiota käyttämällä koettimia kullekin mahdolliselle mutaatiokohdat ja SNaPshot® Multiplex Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA). Mutaatio havaitseminen Reaktiot suoritettiin kokonaistilavuudessa 10 ui, joka sisälsi 2,5 ui SNaPshot Multiplex Ready Reaction Mix, 2 ui BigDye sekvensointi puskuria, 1 ui koetinseosta ja 1 ui SAP /Exol käsitellyn PCR-tuotteen. Laajentaminen reaktiot, joihin kuuluvat 25 sykliä denaturointi 96 ° C: ssa 10 sekuntia ja hehkutus /pidennys 58,5 ° C: ssa 40 sekuntia, tehtiin terminen cycler. Laajentamisen jälkeen, ylimääräinen leimattu dideoksinukleotidi trifosfaattien poistettiin käsittelemällä 1 yksikön katkaravun alkalisella fosfataasilla 37 ° C: ssa 60 min ja 72 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Laajennettu alukkeet denaturoitiin 95 ° C: ssa 5 minuuttia ja erotettiin kapillaarielektroforeesilla automaattisella sekvensserillä (ABI PRISM 3130 XL Genetic Analyzer, Applied Biosystems, Foster City, CA), ja läsnäolo tai puuttuminen mutaation osoitettiin fluoresoivaa etiketti on sisällytetty nukleotidin. Tiedot värit mutantti ja villityypin huiput esitetään kuvassa 2. Tiedot analysoitiin käyttäen GeneScan Analysis Software versio 3.7 (Applied Biosystems) ja GeneMarker ohjelmiston versio 1.7 (SoftGenetics LLC, State College, USA).

tilastollinen analyysi

tilastolliset analyysit tehtiin SPSS tilastollista pakettia (versio 15.0, SPSS, Inc., Chicago, IL, 2003). Eroja pidettiin merkittävinä, jos p

0,05. Väliset suhteet mutaatiostatus ja patologinen ja kliininen muuttujat analysoitiin Studentin t-testiä, Chi-neliö testi ja kaksipuolinen Fisherin tarkka testejä. Toistuminen-vapaa, etenemisestä vapaan ja tautikohtaista eloonjäämisen mutaationaalisella tila analysoitiin Kaplan-Meier käyrät. Kaksipuolisen log-rank-testi suoritettiin vertaamaan käyrät.

Tulokset

Virtsarakon syöpä erityinen RAS-BC mutaatiokokeessa

Somaattiset mutaatiot

HRAS

,

KRAS

ja

sääntelyviranomaisten

geenien virtsarakon syöpä vaikuttaa kodonien 12, 13 ja 61. helpottaakseen havaitsemisen

RAS

mutaatiot olemme kehittäneet multiplex RAS-BC mutaatiokokeessa että näytöt 19 mutaatioiden samanaikaisesti, eli 96% kaikista mahdollisista tiedossa mutaatioita 3

RAS

geenien virtsarakon syöpä (www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic). Määritys vaatii vain muutaman nanogrammaa DNA: ta ja toimii hyvin DNA kiinnitettiin formaliinilla kudoksesta. Kuvio 3 esittää esimerkkejä RAS-BC määrityksessä kojelaudassa edustaa villikannan tilanteeseen ja erityisiä mutaatioita esitetty paneelien B-D.

Paneeli A: villin tyypin näyte, paneelit B-D: näytteet mutaatioita. Kanta kuulusteli kodonien, nukleotidit ja geenit on kuvattu alareunassa.

Mutaatiot primaarikasvainten

RAS-BC määritys ja mutaatio määritykset

FGFR3

ja

PIK3CA

, seuloimme ensisijainen virtsarakon kasvaimia 257 potilaiden mutaatioita (kuvio 4A). Kaiken kaikkiaan 64% (164/257) kasvainten sisälsi

FGFR3

mutaatio, yhteensä 28 (11%) näytteistä oli mutantti yhdelle

RAS

geenejä ja 61 (24 %) kanna

PIK3CA

mutaatio. Taulukossa 1 esitetään tyypin tunnistettu mutaatioita. Yleisimpiä

RAS

mutaatiot olivat

KRAS

G12D ja

HRAS

Q61R.

KRAS

ja

HRAS

mutaatioita esiintyi yhtä usein, kun taas

sääntelyviranomaisten

mutaatiot eivät olleet yleisiä virtsarakon syöpään.

PIK3CA

geenin mutaatiot tapahtui lähinnä kierteisen domain kodonit E545K ja E542K. Kaiken kaikkiaan 18% (11/62) ja

PIK3CA

mutaatioita oli tapahtunut kinaasi verkkotunnusten ja 82% vuonna kierteisen verkkotunnuksia. Emme havainneet muutoksen E545A osoitus polymorfia

PIK3CA

pseudogeenistä joiden toiminta on tuntematon [59]. Kolmessa primaarikasvaimia, kaksi erilaista

FGFR3

mutaatiot olivat läsnä (S249C yhdessä A393E, G372C tai R248C). Yksi primaarikasvaimen sisälsi kaksi erilaista

PIK3CA

mutaatioita heliksidomeenit (E542K ja E545K). Ei ollut selvää yhteistyössä esiintyminen tai keskinäinen ainutlaatuisuutensa eri tyyppisten

RAS

ja

PIK3CA

mutaatioita.

Taajuudet kaikissa ensisijainen rakkokasvaimista (A) (n = 257) ja erityisissä kasvain vaiheessa: pTa /T1-G1 /G2 (B) (n = 194), pTa /T1G3 (C) (n = 29) ja lihas-invasiivisen kasvaimet (D) (n = 34).

ensisijainen kasvaimia myöhemmin ositettu kolmeen alaryhmään perustuen vaiheessa ja arvosana; matala-asteista NMI-BC kasvaimet (pTaG1-2 ja pT1G2), korkea-asteen NMI-BC (pTaG3 ja pT1G3), ja lihas-invasiivisen kasvaimet (≥pT2). Kuvassa 4B-D, jakaumat

FGFR3

,

PIK3CA

ja

RAS

mutaatiot näissä alaryhmissä on havainnollistettu. Vuonna pTa-T1G1-2 ryhmä 88% primaaristen kasvainten sisältävät mutaation ainakin yksi viidestä tutkittu onkogeenien. Seulonta

PIK3CA

ja kolme

RAS

geenien prosenttiosuus kasvoi mutantti kasvaimia 10% verrattuna

FGFR3

yksin. In luokka 3 ja lihas-invasiivisia kasvaimen ryhmät, kokonaisprosenttiosuus mutaatioita onkogeenien on paljon pienempi 33% ja 36%, vastaavasti. Vuonna asteen 3 kasvaimia, osuus

RAS

mutaatioita on suhteellisen suuri, kun taas

PIK3CA

mutaatiot ovat yhä näkyvämpi lihas-invasiivisen kasvaimet. Lisääminen

PIK3CA

ja

RAS

määrityksissä tuloksia havaitseminen 13% ylimääräistä mutantti ensisijainen kasvaimia luokka 3 ryhmässä ja 15% lihas-invasiivisen ryhmä.

Co-mutaatioiden

257 primaaristen kasvainten, 26%: lla oli yli-ilmentyminen p53, joka on osoitus missensemutaatioita. Kun yhdistämme onkogeenimutaatiot kanssa

TP53

tuumorisuppressorigeenin (taulukko 2), vaikuttaa siltä, ​​että vain 27 kasvaimia (11%) oli villityypin kaikkien tutkittiin geenejä. Oli 9 primaarikasvainten kanssa yhteistyössä esiintyminen 3 muutoksia. Oli positiivinen yhdistys mutantti

FGFR3

kanssa

PIK3CA

mutaatioita (p

=

0,016), jossa 77% on

PIK3CA

mutaatioita CO- ilmennyt

FGFR3

(kuva 5).

FGFR3

mutaatiot olivat vahvasti sulkevat toisensa pois

RAS

mutaatioita (p

=

0,001). Vain 3,5% primäärikasvaimissa sisälsi mutaatio molemmat geenit. Mielenkiintoista, keskinäinen ainutlaatuisuus on

FGFR3

ja

RAS

mutaatioita pysynyt merkittävänä alaryhmässä PTA /T1 G1 /2 ensisijainen kasvaimia, kun taas

PIK3CA

ja

FGFR3

mutaatiot ovat merkittävästi yhteistyössä ilmeneviä palkkaluokan 3 kasvaimia. Molemmat

FGFR3

ja

PIK3CA

mutaatiot olivat toisensa poissulkevia p53 yli-ilmentymisen (p

0,001 ja p

=

0,029, tässä järjestyksessä).

RAS

mutaatiot eivät ole toisiaan poissulkevia kanssa

PIK3CA

ja p53 mutaatioita koko kohortin eikä eri kasvaimen vaiheessa ja luokan alaryhmiä.

korrelaatioita mutaatioiden kanssa vaiheessa arvosana

jälkeen tutkittiin suhdetta vaiheessa ja arvosana sekä erilaiset mutaatiot (kuva 6). Vuonna ensisijainen kasvaimia oli merkittävä korrelaatio

FGFR3

alhainen vaiheessa ja laatu sekä korrelaatio p53 yli-ilmentymisen korkea vaiheessa ja laatu, kuten on esitetty aiemmin [39]. Kuitenkaan mitään merkittävää yhteyttä ei havaittu

RAS

mutaatiostatus ja vaihe tai arvosana. Jakelu mukainen vaihe oli 10% pTa (16 166), 18% pT1 (10 57), ja 6% lihas-invasiivisen kasvaimet (2 34). Mitä

PIK3CA

, esiintyvyys mutaatioiden oli suurempi heikompilaatuisen kasvaimet: 30% luokka 1 (25 84), 23% luokan 2 (27 117), ja 16% luokan 3 (9 56 ), mutta tämä yhdistys ei ollut tilastollisesti merkitsevä (p = 0,061). Ei korrelaatio vaiheessa havaittiin.

korrelaatio Näiden muutosten ensisijaisena rakkokasvaimista 257 potilailla, joilla on vaiheen (A) tai luokan (B) on merkitty p-arvot (χ

2).

Prognostiset arvo

Fifty-yhdeksän prosenttia (154/257) potilaista tutkimuksessamme kehittänyt yhden tai useamman toistuminen, 10%: lla oli etenemisen vaiheessa ja /tai asteen 3, 19% kuoli tautiin. Yksikään tutkituista muutokset

FGFR3

,

RAS

,

PIK3CA

ja p53 primaarikasvaimen oli ennustaja kehittämiseen toistumisen (uusiutumista elinaika p 0,05). Mutaatio taajuus

PIK3CA

potilaalla on toistuminen oli samankaltainen verrattuna potilaisiin ilman uusiutumista 24% (37/154) verrattuna 23% (24/103). Sillä

RAS

mutaatioita, nämä taajuudet olivat 12% ja 10%. Ei ollut myöskään suhdetta mutaatio aseman

RAS

ja

PIK3CA

ja toistumisen korko. Kuten osoitimme aiemmin, potilaille

FGFR3

mutantti primaarikasvaimen on pienempi riski etenemisen ja paremman tautikohtaista säilymiseen, kun taas potilailla, joilla on p53 yli-ilmentyminen on suuri riski etenemisen ja matalan tautikohtaista selviytyminen [32 ], [39]. Kuitenkin

PIK3CA

tai

RAS

mutaatiot eivät merkitsevästi etenemiseen liittyvä (p

=

0,129, p

=

0,694) tai tautikohtaisia ​​selviytyminen (p

=

0,205, p

=

0,447) koko kohortin eikä eri kasvaimen vaiheessa ja luokan alaryhmiä. Yhdistämällä

RAS

ja

PIK3CA

mutaatiostatus tarjotaan samanlaisia ​​tuloksia. Lisäksi lisäämällä

RAS

tai

PIK3CA

mutaatio asema

FGFR3

tai p53 ei johtanut parempaan ennustaminen toistuminen-vapaa, etenemisestä vapaan tai tautikohtaisia ​​selviytyminen verrattuna

FGFR3

tai p53 yksin. Oli myös merkittävää korrelaatiota yksittäisten

RAS

isoformit ja

PIK3CA

mutaatioita kierteiset tai kinaasi verkkotunnuksia vaiheessa luokan tai recurrence-, progression-, ja tautikohtaista selviytymistä. Lisäksi mitään merkittävää korrelaatiota välillä havaittiin

RAS

tai

PIK3CA

mutaatioita ja muuttunut Ki-67 (p = 0,413, p = 0,227) tai p27

Kip1 (p = 0,126 ja p = 0,580) lauseke, markkereita osoitus huonompi ennuste virtsarakon syöpä [60], [61].

Taajuuksia mutaatioiden uusiutumista

54 potilasta, jotka hoidettiin Erasmus MC ja oli kehittänyt yhden tai useamman toistuminen, kudos oli käytettävissä 184 uusiutumista (myös multifokaalinen toistuminen). Täällä, halusimme tutkia, mutaatio tila jatkuu useita toistuminen saman potilaista, jonka tarkoituksena on tutkia, jos se on arvokas aloittaa tulevaa pitkittäinen tutkimus valvontaa kanssa mutaatio määrityksissä analysoimalla virtsanäytteitä. Olemme vain tutki mutaatio asema geeneistä, jotka olemme kehittäneet SNaPshot perustuva mutaatio koe (eli

FGFR3

,

PIK3CA

ja

RAS

). P53 yli-ilmentyminen ei ollut määritelty toistuminen. Taajuus p53 yli-ilmentymisen oli myös pieni (6/54) primäärikasvaimissa tämän potilasryhmässä koostuu pääasiassa NMI-BC kasvaimia. Yksityiskohtainen katsaus vaiheessa, laatu ja mutaatio asema näistä kasvaimista on esitetty kuvassa 7. Jos potilaalla on villityypin primäärikasvaimessa uusiutumista olivat enimmäkseen villityypin (49/54 toistuminen), kun taas 5 kanna

FGFR3

mutaatio. Yksi toistuva kasvain sisälsi kaksi erilaista

PIK3CA

mutaatioita (E542K ja E545K). Mielenkiintoista on, että uusiutumista

PIK3CA

mutaatiot lisäksi,

FGFR3

mutaatio liittyi korkeampi laatu verrattuna uusiutumista kätkeminen

FGFR3

mutaatio yksin (p = 0,012). Jos me osittaa potilaalla on mutantti primäärikasvaimessa 81%: n uusiutumista olivat myös mutantti ja yksittäiset taajuudet olivat 75% (98/130) ja

FGFR3

, 23% (30/130) ja

PIK3CA

, ja 10% (13/130) ja

RAS

. Kiinnostavaa, oli 100% johdonmukaisuus tyyppi mutaatio

RAS

ja

PIK3CA

eri kasvaimia saman potilaan. Olemme aiemmin havaittu, että jotkut toistuminen oli villin tyypin kun ensisijainen kasvain oli mutantti

FGFR3

[17]. Esillä olevassa tutkimuksessa oli 20 130 uusiutumista (15%) potilaan alaryhmä, jolla on mutantti ensisijainen kasvain, joka oli edennyt asteen 3, CIS tai lihaksia invasiivisia virtsarakon syöpä (kuva 7). Näistä 90% (18/20) oli mutantti, joten voitiin havaita kanssa mutaatio koe. Villityypin toistuminen tässä potilasryhmässä eivät etene useammin kuin mutantti toistuminen; 8% (2/25) villin tyypin toistuminen oli edennyt CIS ja 3. asteen (kuvio 7), verrattuna 17% mutantti toistuminen. Yksi näistä villityypin toistuminen yhteistyössä tapahtui yhdessä kahden mutantin kasvaimia. Olemme edelleen määritelty ajankohdan, jona villityypin uusiutumista tapahtunut seurannan aikana. Useimmat villityypin toistuminen (18 25) yhteistyössä esiintyi yhdessä mutantti toistumisen tai myöhemmin seurasi mutantti toistuminen, kun taas 7 tapahtui villityypin yksin lopussa seuranta-aikana, kun mitään muita tietoja oli saatavilla.

V: mutantti ensisijainen kasvaimia ja niiden toistuminen; B: villityypin ensisijainen kasvaimia ja niiden toistuminen. Ensimmäinen sarake osoittaa primaarikasvaimen. Peräkkäiset laatikot osoittavat ajallisesti peräkkäisiä toistuminen poistetaan eri höyläys- leikkauksessa (merkitty järjestysnumerolla päälle). Multifocal kasvaimia poistetaan samaan höyläysleikkaus on sijoitettu alla toisiaan. Vaiheessa ja arvosana kasvaimet, mutaatio tila (merkitty väri) ja potilaan ID 54 potilaalla on merkitty.

Yksi Tässä oli tutkia, jos mutaatio määritykset ovat potentiaali työkalu havaitsemiseksi uusiutumista vähentämiseksi määrää cystoscopical tutkimukset ja onko hyödyllistä käynnistää laaja pitkittäistutkimus näillä mutaation määrityksissä havaitsemiseksi toistuvien rakkokasvaimista käyttämällä DNA uutetaan virtsan soluista. Potilaat, jotka ovat oikeutettuja tällaiseen seurantaan ovat ne, jotka esittävät kanssa mutantti pTaG1-2 tai pT1G2 primaarikasvaimen. Tämän alaryhmässä potilaiden taajuuden mutaatioiden

FGFR3

,

PIK3CA

ja

RAS

geenien laskettuna per toistumisen tapahtuma (eli kun kyseessä on useita kasvaimia poistetaan virtsaputken resektio, mutaatio tiedot olivat keskiarvo) on esitetty kuviossa 8. Kuvio esittää, että tässä potilasryhmässä mutaatio on läsnä 88%: n uusiutumisen tapahtumia.