Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Cancer kakeksia (CC) liittyy huonoon ennusteeseen. Vaikka mekanismit edistävät tämä ehto ei tunneta, useat kiertävä proteiineja on ehdotettu osallistumaan. Analysoimme plasma proteomiin syövän aiheita, jotta voidaan tunnistaa liittyvät tekijät kakeksia.

Suunnittelu /aiheet

Plasma saatiin seulonta kohortin 59 potilasta, vasta diagnosoitu epäillään ruoansulatuskanavan syöpä, kanssa (n = 32) tai ilman (n = 27) kuihtuminen. Näytteet altistettiin proteomic profilointiin käyttäen 760-vasta-aineita (kohdistaminen 698 yksittäiset proteiinit) päässä Human Protein Atlas projekti. Tärkeimmät havainnot validoitu kohortin 93 potilailla, joilla on todennettu ja kehittyneet haimasyöpä.

Tulokset

Vain kuusi proteiinit näkyvät ero plasman seulontaan kohortissa. Näistä Carnosine dipeptidaasi 1 (cndp1) varmistettiin sandwich immunoassay olla pienempi CC (p = 0,008). Molemmissa ikäluokat, alhainen cndp1 tasot liittyivät merkkiaineiden huonoon ennusteeseen kuten laihtuminen, aliravitsemus, rasva-erittely, alhainen verenkierrossa albumiini /IGF1 tasot ja huono elämänlaatu. Yksitoista aiheita löytö kohortin lopulta diagnosoitiin ei-pahanlaatuinen sairaus, mutta ilman näitä aiheita analyyseistä ei ollut merkittävää vaikutusta tuloksiin.

Johtopäätökset

ruoansulatuskanavan syöpään, pitoisuudet plasmassa cndp1 yhdistyä merkkejä kataboliaa ja huonon tuloksen. Nämä tulokset yhdessä hiljattain julkaissut tiedot, jotka osoittavat alempi kiertävä cndp1 henkilöillä, joilla glioblastooma ja metastaattinen eturauhassyöpä, viittaavat siihen, että cndp1 voi muodostaa merkki aggressiivisen syövän ja CC.

Citation: Arner P, Henjes F, Schwenk JM , Darmanis S, Dahlman I, Iresjö BM, et ai. (2015) Circulating Carnosine dipeptidaasi 1 Associatesin Painonpudotus ja huonon ennusteen mahasyövän. PLoS ONE 10 (4): e0123566. doi: 10,1371 /journal.pone.0123566

Academic Editor: Juergen Eckel, GDC, SAKSA

vastaanotettu: 04 joulukuu 2014; Hyväksytty: 19 helmikuu 2015; Julkaistu: 21 huhtikuu 2015

Copyright: © 2015 Arner et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tätä työtä tukivat avustuksin Ruotsin Sydän ja Lung Foundation, Ruotsin Diabetes Association, Novo Nordisk Foundation, Ruotsin Cancer Foundation, DiabetesWellness, The Swedish Medical Association, Ruotsin Research Council, Strategic Research Programme in Diabetes Karolinska Institute, Knut ja Alice Wallenbergin säätiön ja SciLifeLab Tukholmassa. Mikään rahoituslähteiden ovat osallistuneet suunnitteluun, suorittamista, analysoidaan tietoja tai käsikirjoitusta.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Kuihtuminen ehtona on tahaton laihtuminen havaittu kroonisten sairauksien, kuten syövän, tulehdussairaudet, sydämen vajaatoiminta ja loppuvaiheen munuaissairaus [1]. Peräti viisikymmentä prosenttia kaikista syöpäpotilaita kokemus syöpäkakeksialle (CC), joka liittyy vahvasti alentunut selviytymisen ja huono vaste kasvaimia torjuvaan hoitoon [2]. Alennettu ruoan saanti voi edistää CC [3], mutta se ei pelkästään selitä sen kehitystä, ja ravintona ei kääntää prosessi [4]. Huolimatta huomattavista ponnisteluista, taustalla syy mekanismit ovat edelleen epäselviä, ja ei ole olemassa tehokasta hoitoa, vaikka useat lievittävä strategioita on ehdotettu [5,6,7,8].

Sekä rasvan massa ja vähärasvaisen painoindeksi on tyhjentynyt kehittynyttä CC [5,9]. Kuitenkin pitkittäinen tutkimukset ovat osoittaneet, että menetys valkoinen rasvakudos (WAT) massa edeltää että lihas tuhlaa [10,11]. Tulokset ovat viime vuosina osoittaneet, että WAT massan väheneminen CC ensisijaisesti liittyy lisääntynyt hydrolyysi (lipolyysiä) [12] ja hapetus [13] adiposyyttien triglyseridejä. Mekanismeja vaikuttavat rasva-aineenvaihduntaan CC ei tunneta, mutta on mahdollista, että tekijät vapautuu verenkiertoon, joko suoraan kasvaimeen tai välillisesti muista kudoksista, voivat aiheuttaa muutoksia rasvasolujen lipolyysiä /lipidien hapettumista [12]. Useita ehdokkaita on ehdotettu vuosien varrella, kuten sinkki-alfa2-glykoproteiinin ja tuumorinekroositekijä-alfan [14], vaikka myöhemmät tutkimukset ovat osoittaneet, että mikään niistä ei voi

sinänsä

selittää lisätä rasvan tappio CC [10 , 15].

tunnistaminen uusia kiertävän liittyvien proteiinien CC on haitannut useista syistä, eikä vähiten siitä, että plasma /seerumi on monimutkainen matriisi, jossa 20 runsain proteiinien osuus ~ 98% valkuaispitoisuus [16]. Näin ollen havaitsemiseen proteiinien alemmilla tasoilla vaatii affiniteetti proteomic lähestymistapoja, joissa suuri este on ollut saatavilla erityinen affiniteetti reagensseja. Viime aikoina useat yhteenliittymät ovat aloittaneet pyrkinyt ratkaisemaan tämän esteen ja tuottaa spesifistä affiniteettia sidonta [17]. Human Protein Atlas (HPA) hanke [18] pyritään kehittämään vähintään yhtä vasta-ainetta vastaan ​​jokaisen ihmisen proteiini ja tällä hetkellä ~ 22.000 vasta, kohdistaminen ~ 16.000 proteiineja, ovat edustettuina proteiinin lokalisointi ja ilmaisun tietoja julkisesti saatavilla olevassa tietokannassa (www.proteinatlas .org).

selvitettävä, plasma syöpäpotilaista kakeksiaan, verrattuna paino-vakaa syöpäpotilailla (WS), näyttämään tiettyjä muutoksia proteiinien tasot, jotka liittävät kehon paino /rasvamäärän menetys ja /tai muut kliiniset piirteet CC. Tätä varten 760-vasta-aineita (kohdistaminen 698 proteiineja) päässä HPA Project käytettiin keskeyttämistä helmi paneelit (SBA). Tämä lähestymistapa tunnistaa pieni joukko eri tavoin ilmaistuna proteiinien joista karnosiini dipeptidaasi 1 (cndp1), proteiini äskettäin osoitettu vähennettävä metastaattisen eturauhassyövän ja glioblastooma [19,20], vahvistivat sandwich immunoassay vähennettävä CC. Verenkierrossa cndp1 olivat siis verrattiin kliinisen toimenpiteet taudin tilan.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat

kliininen ominaisuudet kohortti 1 ja 2 on esitetty yksityiskohtaisesti taulukossa 1. kohortti 1 koostui 59 koehenkilöillä, joilla epäillään ruoansulatuskanavan syöpään, 43 urosta ja 16 naarasta, joista 26 on suurelta osin kuvattu muualla [21]. Kolmekymmentäkaksi potilasta täyttivät kakeksian, ts tahaton laihtuminen yli viisi prosenttia tavanomainen painon kolmen edellisen kuukauden tai kymmenen prosenttia kuuden edeltävän kuukauden aikana [21]. Kaksikymmentäseitsemän ilmoiteta mitään merkittävää painon ja määriteltiin paino-vakaa (WS). CC potilailla diagnosoitiin adenokarsinooma mahalaukun alueella eli cardia /kammion (n = 3), paksusuoli (n = 2, joista toisessa on maksametastaaseista), haima (n = 11), ruokatorven (n = 9, ulos jossa 4 okasolusyöpä) ja kolangiokarsinooma (n = 1). WS potilailla on diagnosoitu adenokarsinooma ruokatorven (n = 4), mahan alueen (n = 2), paksusuolen (n = 7, joissa kaikissa on metastaaseja), haima (n = 8) tai kolangiokarsinooma (n = 1). Yksitoista koehenkilöä (kuusi CC ja viisi WS ryhmässä), ennen leikkausta määritetty olevan pahanlaatuinen sairaus, oli leikkauksen jälkeen osoitettu olevan ei-kasvain liittyvät diagnoosin. CC ryhmän lopullinen diagnoosi oli hyvänlaatuinen haiman kystia (n = 1), sappirakkotulehdus (n = 2), dysplasia ruokatorvi (n = 1) ja krooninen haimatulehdus (n = 2). WS ryhmässä lopullisista diagnooseista oli sappirakkotulehdus (n = 1) ja krooninen haimatulehdus (n = 4). Kuten on kuvattu tulokset, vaikka nämä aiheet sisällytettiin yleisen analyysin, poisjättäminen näistä henkilöistä ei ollut suurta vaikutusta assosiaatiot cndp1 ja erilaiset kliiniset parametrit. Kohortti 2 koostui 93 potilaalla diagnosoitiin leikkaushoitoon ductal haimakarsinooma-. Nämä näytteet valitaan Biopankin aikana kerätyistä aiemmin kuvattu [22] palliatiivinen hoito-ohjelma on avohoidon klinikka Department of Surgery, Sahlgrenskan yliopistollisessa sairaalassa vuosina 1993 ja 2005. Vain potilaat, jotka arvosteli kohtuullisen hyvässä fyysisessä kunnossa sisällytettiin Tämä tutkimus. Kukaan potilaista oli merkkejä selvää diabetesta tai muita ylimääräisiä syöpädiagnoosin tai vakava sairaus.

Ethics lausunto

Eettinen hyväksynnät tutkimuksista saatiin alueellisten neuvottelukuntien etiikan ( Tukholmassa ja Göteborgissa, vastaavasti) ennen tutkimuksen alkua, ja kaikki potilaat antoivat allekirjoitettu suostumus. Tutkimus suoritettiin täysin noudattaen lausuntoja Helsingin julistuksen.

Kliininen tutkimus

kohortin 1 potilaat tulivat laboratorioon yön yli paastoamisen jälkeen. Sen lisäksi mitataan pituus ja paino, kehon koostumus määritettiin bioimpedance käyttämällä QuadScan 4000 (Bodystat Ltd, Isle of Man, Brittein saaret). Epäsuora kalorimetriaa määrittää lepää energian kulutusta (REE) ja hengityselinten osamäärä (RQ) suoritettiin käyttäen Deltatrac (Datex-Engströms, Helsinki, Suomi). Ravitsemustilan arvioitiin käyttämällä standardoitua kyselylomaketta onkologian kutsutaan Potilaan luoman Subjektiivinen Global Assessment (PG-SGA) [23]. Laskimoyhteys verinäyte käytettiin määrittämiseen verenkierrossa tekijöistä. Lyhyesti, 20 ml laskimoverta otettiin kustakin luovuttajasta ja kylmä sentrifugoitiin plasman saamiseksi, joka sitten jaettiin 2 ml: n Eppendorf-putkiin ja säilytettiin -80 ° C: ssa käyttöön asti. Leptiini tasot arvioitiin ELISAlla (RD järjestelmiä, Abingdon, UK), kun taas albumiini, transferriini, insuliinin kaltainen kasvutekijä-1 (IGF1) ja C-reaktiivisen proteiinin (CRP) määritettiin akkreditoidun rutiini kemian laboratoriossa Karolinska University Hospital . Plasma glyserolia määritettiin bioluminenssina kuvatulla [24] käyttäen hepariini-plasma, näytteet ajettiin kahtena kappaleena (2×25 ui) ja keskiarvot korjattiin kokonaisrasvapitoisuus massa (kg), kuten aiemmin on kuvattu [21]. Suhde glyserolia koko kehon rasvan paino pidettiin indeksi

in vivo

lipolyysiä [21]. Aiheita kohortti 2 tutkittiin edellä kuvatulla [11,22]. Lyhyesti, seerumi ja plasma mittaukset suoritettiin aina hyväksytyn rutiini kemian laboratoriossa Sahlgrenska yliopistollisen sairaalan paitsi leptiini joka määritettiin maksulliset RIA (Linco Research Inc.). Kehon koostumus mitattiin dual-energy X-(DXA) käyttäen LUNAR DPX-L skanneri (Scanexport Medical, Helsingborg, Ruotsi). Kokovartalokartoitus saatiin nopeasti skannaustilassa. Kehon rasvan ja vähärasvaisen kudoksen massan analysoitiin käyttämällä laajennettua tutkimusta moodin LUNAR DPX-L ohjelmisto (v1.31). REE ja rasvan hapettumista mitattiin epäsuoralla DSC aamulla tunnin kautta paaston jälkeen käyttämällä Deltatrac (Datex-Engströms, Helsinki, Suomi). Lyhyt muoto terveys kyselylomake SF-36 (www.sf-36.org/tools/sf36.shtml) käytettiin mittaamaan elämänlaatua mukaan fyysistä toimintakykyä (PF), ruumiillinen kipu (BP), asema-fyysinen (HE ), yleinen terveydentila (GH), fyysinen komponentti tiivistelmän (PCS), elinvoimaa (VT), sosiaalinen toimintakyky (SF), asema-emotionaalinen (RE), mielenterveyden (MH) ja psyykkisen osion (MCS).

vasta

Kaikki vasta hyödynnetään alustava seulonta ja profilointi peräisin resursseista affiniteettireagensseilla sisällä syntyvä Human Protein Atlas (www.proteinatals.org). Protokollat ​​antigeenin valinta, kloonaus, ilmentäminen, puhdistaminen ja kaniinien immunisointiin, minkä jälkeen affiniteettipuhdistuksella, jolloin saatiin mono-spesifisiä polyklonaalisia vasta-aineita, ja niiden karakterisointi kanssa Western blot ja antigeenin microarray levitettiin kuten aiemmin on kuvattu [25]. Kaikki proteiinifragmentteja immunisaatiossa käytettyyn tuotettiin kanssa His6-albumiini-sitovan proteiinin tag ja kohdeproteiinin osan 80-120 aminohappoa. Vasta-aineet koottiin sarjaa 380 käytännön kokeellista syistä ja kaksi tällaista sarjaa käytettiin. Mukaanottokriteereihin vasta laadunvarmistukseen perustuva ja tekniset parametrit, kuten positiivinen vahvistus proteiinien mikrosiruja ja laajassa paneeli kudosten immuunihistokemiallisessa sekä Antigeenin konsentraatio-puhdistettu polyklonaalisia vasta-aineita. Tämän lisäksi ei näkökohdat tehty koskien merkinnästä tai toiminnan kohteena proteiineja. Lopullinen kokoaminen johtui joiden pinnalle vasta sattumalta tuotettiin ja validoitu valintahetkellä.

Vasta jousitus helmi paneelit

Vasta kytkettiin värikoodatut magneettiset helmet (MagPlex mikropalloja, Luminex Corp .) mukaan valmistajan protokollan ja kuten aiemmin on kuvattu [20]. Kytkimen tehokkuus kullekin vasta-aineelle määritettiin kautta R-fykoerytriini-leimatun anti-kanin IgG-vasta-aineella (Jackson ImmunoResearch Laboratories). 384-Plex helmi seos luotu 380-antigeeni-puhdistettiin polyklonaalisia HPA vasta-aineita ja neljä helmi identiteettien käytettiin verrokkeina. Jälkimmäinen koostui IgG ei-immunisoiduista kanin ja vasta-puskurissa negatiivisina kontrolleina, kun taas anti-albumiini ja anti-ihmis-IgG-vasta-aineita (Dako) pidettiin positiivisina kontrolleina. Seos sisälsi yhtä suuret määrät helmiä, joissa kussakin populaatiossa selvä väri-koodin kuljettaa tietyn vasta-aineen. Plasmanäytteet leimattiin ja analysoitava aiempien tutkimusten kanssa pieniä muutoksia. Näyte levyt (ABgene) sentrifugoitiin (2 min 2000 rpm), ja 3 ui kutakin näytettä lisättiin 22 ui: aan steriiliä suodatettua PBS nesteen kanssa käsittelijän (SELMA, Cybio). N-hydroksisukkiini-esterin biotinoyyli tetraoxapentadecanoic happoa (Pierce) lisättiin sitten kymmenen-kertainen mooliylimäärä, jolloin saadaan yleisen 01:10 näytteen laimennus, jota seuraa 2-h inkubointi 4 ° C: ssa mikrotiitterilevyravistelijalla (Thermomixer, Eppendorf) . Reaktio pysäytettiin lisäämällä 250-kertainen molaarinen ylimäärä Tris-HCl, pH 8,0 yli biotiinia ja inkuboitiin vielä 20 minuuttia huoneen lämpötilassa (RT) ennen lopullista varastointia -20 ° C: ssa. Kaikki näytteet sittemmin käytetään ilman poistamiseksi rekisteröimätön biotiini ja laimennettiin 1:50 määrityksessä puskurissa, joka koostuu 0,5% (w /v) polyvinyylialkoholia ja 0,8% (w /v) polyvinyylipyrrolidonia (Sigma) 0,1% kaseiini PBS: ssä, jota oli täydennetty 0,5 mg /ml kaniinin IgG (Bethyl Laboratories). Näytteet lämpökäsiteltiin termosyklerissä 30 minuutin ajan 56 ° C: ssa ja 10 min 23 ° C: ssa. Sitten, 45 pl lisättiin 5 ui helmi seoksissa puoli-alue tasapohjaisille 96-kuoppalevylle (Greiner), ja inkubointi tapahtui yli yön orbitaalisekoittajassa 650rpm huoneenlämpötilassa. Helmet pestiin kaivot 3 x 100 ui PBST (1 PBS, pH 7,4, 0,05% Tween 20: tä) on magneetti käyttäen levypesintä (EL406, BioTek), jota seurasi 10 min kiinnitys 50 ul 0,4% paraformaldehydillä PBS: ssä. Helmet pestiin uudelleen ennen kuin lisättiin 50 ui 0,5 ug /ml R-fykoerytriini-leimatulla streptavidiinilla (Invitrogen) PBST: ssä, lisättiin ja inkuboitiin 20 min. Lopuksi helmet pestiin ja mitattiin 100 ui PBST käyttäen nimenomainen väline (FlexMap3D, Luminex Corp.).

sandwich immunoassay

Helmet-sandwich-immunomääritykset suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [26 ]. Kaksi erilaista helmi määritykset luotiin, joista toinen sisältää useita mono- ja polyklonaaliset vasta-aineet kohdistuvat cndp1 sekä ohjaus proteiinit [26], kun taas toinen sisälsi yhden vasta-aineen (HPA008933) kohdistaminen cndp1 sekä valvontaa. Molemmissa tapauksissa, BAF2489 (R 0,05. Löytö kohortin ole valtaa laskenta suoritettiin. Tilastolliset laskelmat suoritettiin käyttämällä standardeja ohjelmapaketteja.

Tulokset

Clinical ominaisuudet löytö kohortin

kohortin 1, CC ja WS aiheita olivat samanlaiset iän ja sukupuolen jakelu vaikka molemmat alaryhmiä koostui pääasiassa miehiä (taulukko 1). Kuten odotettua, CC potilasta ilmoitti selvempi painonlasku ja näkyvissä merkkejä hajoamista osoituksena alempi BMI, alempi plasman albumiiniin ja transferriini tasolla sekä köyhempi ravitsemustila osoittaa korkeamman PG-SGA tulokset. Painonlasku havaittiin kakektisissa ryhmässä johtui lähinnä rasvakudoksen massan, koska lihasmassaa (LBM) oli samanlainen molemmissa ryhmissä. Yhdenmukaiset aiemmin julkaistuihin tietoihin, kakektisen aiheet näkyviin alempien hengitysteiden osamäärä (RQ), epäsuora mitta rasvahapon hapettumisen, sekä merkkejä lisääntynyt

in vivo

lipolyysiä osoituksena merkittävästi kohonnut plasman glyseroli tasoja (korjattu kokonaisrasvapitoisuus massa). Yhdessä kakektisen ryhmä kohortissa 1 näytetään ensisijaisesti WAT massan menetys sekä kaikki klassisen ominaisuudet ja kliinisiä tunnusmerkkejä häiriintynyt rasva-aineenvaihdunnan aiemmin raportoitu CC.

Affinity proteomiikka-analyysi kiertävän tekijöiden

tunnistamiseksi kiertävän liittyvät tekijät CC, plasmanäytteistä kohortin 1 analysoitiin proteomic profiloinnin avulla jousitus helmi paneelit (SBA, yksityiskohtaiset tiedot vasta valintaprosessia kuvataan menetelmät jaksossa). Ulos ~ 700 seulotaan proteiineja, kuusi osoitti merkittäviä eroja CC ja WS ryhmiä; kolme oli alhaisempi; (CNPD1, APOA4, DACH1) ja kolme olivat suuremmat (Bcl3 NARS2, ATP13A4) CC koehenkilöillä (taulukko 2). DACH1 on transkriptiotekijä, Bcl3 on transkription koaktivaattori, cndp1, NARS2, ATP13A4 ehdotetaan entsyymien ja APOA4 on lipoproteiini. Cndp1 ja APOA4, on merkitty erittyy solunulkoiseen tekijöitä ja loput neljä ovat solunsisäisiä proteiineja. Lisäksi cndp1 ja APOA4 on osoitettu muuttaa plasmassa /seerumissa syövän aiheita. Siten vähennetään cndp1 tasoja on raportoitu eri aggressiivinen syöpä muotoihin [19,20], kun APOA4 on osoitettu nostettava lapsipotilailla muodoissa suuri riski akuutti leukemia [27], mutta alempi aikuisilla naisilla munasarjasyövän [28,29] . Meidän tutkimukset siksi keskittyneet cndp1 ja APOA4 jossa ensimmäinen askel oli validoida meidän SBA tulokset sandwich immunoassay (SIA). Vaikka vähennys APOA4 ei voitu vahvistaa SIA (S1 kuvio, p = 0,21), cndp1 väheni CC verrattavissa määrin SBA (kuvio 1A) ja SIA (kuvio 1 B). Lisäksi yksittäiset cndp1 käyttämällä saatuja arvoja SBA tai SIA korreloivat voimakkaasti (kuvio 1 C, ρ = 0,78, jonka Spearmanin rank korrelaatio, p 0,001) ja luotettavuutta jälkimmäinen määritys vahvistettiin lisäksi kaksi riippumatonta SIA käyttämällä erilaisia ​​vasta-aineita, jotka paljastivat erinomainen sisäinen ja määritysten välinen korrelaatio (valikoima ρ = 0,93-0,99, graafit ei esitetty). Cndp1 mitatut SIA eivät liittyneet joko iän tai sukupuolen (kuvio 1D ja 1E, vastaavasti).

Havaitut proteiinin tasot on esitetty A. näyttöä käyttämällä Sandwich Helmi Array (SBA) ja B. validointi sandwich Immunoanalyysit (SIA) ja ilmaistaan ​​keskiarvona intensiteetti fluoresenssi (MIF). C. Oli erinomainen korrelaatio saatujen tulosten SBA ja SIA. CNPD1 mitatut SIA ei vaikuttanut D. iän tai E. sukupuoli. F. jakelu kiertävien cndp1 pitoisuudet määritettiin SIA kohortti 2. WS = Weight vakaa, CC = Cancer kuihtuminen. P- ja rho-arvot on annettu.

cndp1 tasot korreloivat negatiivisesti liittyvät tekijät CC

Kiertävä cndp1 tasoja verrattiin eri kliinisten parametrien kohortin 1 (taulukko 3). Oli positiivinen suhteita BMI, rasvan massa (ilmaistuna prosentteina tai absoluuttisina arvoina) sekä verenkierrossa albumiinin, transferriini ja IGF1. Kääntäen, CNPD1 oli negatiivisesti yhteydessä prosenttia laihtuminen, PG-SGA pisteet ja

in vivo

lipolyysiä (ilmaistuna P-glyseroli /rasvamassaa kg). Liitot välinen cndp1 ja BMI, rasvan massa (kg), prosenttia laihtuminen, seerumin-IGF1 /transferriini ja

in vivo

lipolyysiä edelleen tilastollisesti merkitsevä, jolle ei yhdestätoista aiheita, jotka oli diagnosoitu ei-pahanlaatuinen sairaus post -surgery.

Alennettu cndp1 arvot liittyvät huonon ennusteen validointi kohortin

SBA ja SIA havaintoja saatiin melko pieni kohortin diagnosoitiin eri ruoansulatuskanavan syöpiin ja missä ei tulos on saatavilla. Voidakseen vahvistaa, vaan myös paremmin määritellä yhdistyksen alentamisella cndp1 tasojen ja prognoosi, kiertävä cndp1 määritettiin SIA erillisessä, homogeenisempi, validointi kohortti lukien ainoastaan ​​kohteet, joilla on edennyt haimasyöpä (kohortti 2, taulukko 1 ja kuvio 1 F) . Näillä potilailla cndp1 arvot negatiivisesti yhteydessä prosenttia laihtuminen ja toimenpiteistä rasvan hapettumista, kun oli positiivinen suhde plasman albumiiniin, IGF1 ja fyysinen terveyteen liittyvä elämänlaatu toimenpiteiden (SF-36) (taulukko 4). Puutteesta huolimatta yhdistyksen välillä cndp1 tasojen ja vahvistettu kasvainmerkkiaineet (CEA, CA 125 ja CA19-9), oli merkittävä positiivinen korrelaatio cndp1 ja eloonjäämisen (mitattuna päivän eloonjäämisen diagnoosin jälkeen). Toisin kuin havainnot kohortin 1, ei ollut yhdistyksen välillä cndp1 ja BMI yhteensä rasvamassaa tai

in vivo

lipolyysiä.

Keskustelu

Meidän tieto, kiertävä proteomia CC ei ole selvitetty ennen. Käyttämällä aiemmin kuvattu vasta-aine suspension helmi array tekniikka [30], teimme seulonta noin 700 proteiineja. Huomasimme, että vain rajoitettu joukko tekijöitä, mikä on vähemmän kuin 1% seulottua proteiinien, näkyy merkittävä ero plasman CC-potilailla verrattuna paino-vakaa syöpäpotilailla. Tämä voisi mahdollisesti vaikuttaa se, että aiheet tämän seulonnan kohortissa koostui vasta diagnosoitu syöpäpotilaiden ja analysoitiin varhaisessa vaiheessa CC tai jopa muutaman kiertävä proteiineja liittävät CC. On myös mahdollista, että olemme ehkä jäänyt joitakin asiaan proteiineja johtuu siitä, että monet signaalit proteomiikan näyttö saattaa olla melua alueella ja /tai että näyttö mukana vastaan ​​suunnattuja vasta vain rajoitettu joukko proteiineja. Niistä ilmentyvät eri proteiineja, neljä tekijää (cndp1, APOA4, DACH1 ja Bcl3) on aiemmin tutkittu eri näkökohtia syövän, mutta vain APOA4 ja cndp1 muodostavat eritetyt proteiinit. Kaksi viimeksi mainittua ovat aiemmin tutkittu verenkierrossa syövän aiheita, vaikkakaan ei yhteydessä kuihtuminen. Sandwich immunoassay vahvisti alhaisemmat plasmatasot cndp1 CC ja matalan cndp1 tasolla liittyy useita toimenpiteitä CC. Tärkeimmät havainnot voitaisiin validoitu erillisessä kohortin osoittavat tiedot pienentää cndp1 korreloivat laihtuminen, kehittyneempiä tautitiloja, ja vähentää selviytymistä. Tosin jotkut yhdistysten erosivat kahden ikäryhmät. Näin ollen, vaikka BMI, rasvan massa ja

in vivo

lipolyysiä korreloivat kiertävä cndp1 in kohortissa 1, nämä suhteet eivät olleet merkittäviä kohortti 2. Tämä voisi riippua siitä, että aiheita kohortin 2 oli kehittyneempi taudin vaiheessa.

Yksitoista potilaista kohortin 1 oli lopulta diagnosoitiin ei-pahanlaatuinen sairaus. Emme pidä tätä olevan merkittäviä vaikutusta tuloksemme koskien cndp1, perustuu osittain siihen, että jättämällä nämä yksilöt analyyseistä ei ollut suurta vaikutusta merkitseviä eri kliinisten parametrien. Vielä tärkeämpää on kuitenkin samanlainen korrelaatiot cndp1 löytyivät kohortin 2, joka koostui vain ne henkilöt, joiden vahvistettu haimasyöpä.

cndp1

geeni koodaa 57 kDa glykoproteiini M20 metallopeptidaasi perhe. Ihmisillä se on ensi sijassa ilmaistaan ​​keskushermostossa ja (vähemmässä määrin), maksassa, josta se erittyy homodimeerinä. [31]. Vaikka identtisyys

cndp1

on erittäin konservoitunut lajien välillä, ei-ihmisen geeni on lähes yksinomaan ilmaistaan ​​munuaisessa, mutta koska se ei ole N-terminaalista signaalipeptidi ei ole havaittavissa liikkeessä [31] . Toiminta cndp1 ei ole täysin määritelty, mutta se näyttää karboksi-ja dipeptidaasi aktiivisuus ja sen tärkeimmät substraattien näyttävät olevan dipeptidit karnosiini (β-alanyyli-histidiini) ja homocarnosine (γ-aminobutyryyli-L-histidiini) [31,32,33 ]. Karnosiini on ensisijaisesti läsnä lihaksessa ja aivokudoksessa ja on liitetty useita patofysiologisia prosesseja mukaan lukien suojaava rooli atheroscleroisis [34], rasvamaksaan [35], diabeettisen munuaistaudin [36,37,38,39] ja syövässä [40] , jossa sen antiproliferatiivinen ominaisuuksia eri pahanlaatuisia soluja ovat kannustaneet erityisen kiinnostavia [41,42,43]. Alhainen cndp1 tasojen on havaittu olevan yhteydessä imusolmuke etäpesäke suuri kohortti eturauhassyöpäpotilaalla [20]. Lisäksi äskettäin proteomiikka-analyysi käyttämällä ei-immuuni-pohjainen (nestekromatografia-tandem massaspektrometria) lähestymistapaa ehdotti, että cndp1 on yksi useista proteiineista säädeltiin plasman kymmenelle potilaalle glioblastoma verrattuna terveisiin verrokkeihin [19]. On siis mahdollista, että vähennetään cndp1 tasoja voi olla yhteinen nimittäjä useissa aggressiivisempi syöpä muotoja. Tosin se saattaa tuntua counterintuitive että karnosiini on ehdotettu olevan anti-kasvain vaikutuksia samalla, kun alhainen tasoja karnosiinin hajottavan entsyymin liittävät edennyt syöpä vaiheissa. Se voi kuitenkin olla hypoteesi, että cndp1 alas sääntely, mikä lisää karnosiinin tasoilla, voi oltava kompensoiva /suojautumisjärjestelyistä aktivoida olosuhteet korkeaan solujen muodostumisesta. Olipa plasman karnosiini tasoja muutellaan syöpä ei ole tiedossa, ja meillä ei ollut riittävästi materiaalia määritellä suhde cndp1 ja karnosiini verenkierrossa. Siksi epäselvä toiminta cndp1

in vivo

sekä suunnittelun Tutkimuksessamme eivät salli meidän kausaalisuhdetta alentamisella cndp1 tasojen ja CC.

sääteleviä mekanismeja verenkierrossa tasot cndp1 eivät ole tiedossa, emmekä voi sulkea pois, että kudos /solu lähde cndp1 saattavat vaihdella terveillä koehenkilöillä ja syöpäpotilailla. Lisäksi riippumatta siitä, onko cndp1 vähentäminen tapahtuu muiden laihtuminen ei ole tiedossa. Kuten olemme aiemmin luotu maailmanlaajuinen transcriptomic tietoja WAT ​​kohorttiin 1 [44], tutkimme onko

cndp1

geenien ilmentyminen vaikutti CC. Se, että ei havaittu mitään eroja (tietoja ei esitetty) viittaa siihen, että muutokset verenkierrossa cndp1 havaittu esillä olevassa tutkimuksessa, ei voida selittää muuttunut

cndp1

ilmentymistä WAT. Laajempi kartoitusta cndp1 ilmaisunvapautta muissa olosuhteissa on tarpeen selvittämiseksi miten, ja jossa kudoksen painon laskua vaikuttaa pääasiassa geenien ilmentymisen ja proteiinin eritystä. Varauma edellä mainittiin, mikä estää mekanistinen tutkimuksia cndp1 eläinmalleissa, että hiiren ortologin ei erity verenkiertoon. Todellakin, vaikka SIA kehitetty olevan työn tulisi teoreettisesti tunnistaa hiiren cndp1 (perustuen sekvenssihomologia) emme pystyneet noudattamaan mitään havaittavia määriä seerumissa /plasma useista eri hiirikantojen (tuloksia ei ole esitetty).

cndp1 läpikäy posttranslational muutoksia myös homodimerisoitumisessa ja glykosylaatio. Se on tällä hetkellä epäselvää, miten glykosylaatio tila vaikuttaa toimintaan ja toiminnallista roolia cndp1. Vaikka se voi vaikuttaa vasta-affiniteetti, että cndp1 tasot korreloivat voimakkaasti välillä, joissa käytetään neljää eri vasta, viittaa siihen, että erot glykosylaatiota tila eivät todennäköisesti selittää ero havaitun CC ja WS ryhmiä.

johtopäätös, profilointi ~ 700 kiertävien proteiinien mahasyövän osoittaa, että cndp1 tasot vähennetään kuihtuminen ja että matalan pitoisuudet seerumissa korreloivat useiden CC parametrien yhteydessä huonoon tulokseen. Se, että vain rajoitettu joukko plasman proteiineihin muutellaan CC viittaa siihen, että harvat kiertävä tekijät ovat mahdollisia CC markkereita, ainakin alkuvaiheessa sairauden. Onko cndp1 on ennusteen arvioinnissa ei voida todeta nykyisen pilottitutkimus ja on validoitu paljon suurempi ikäryhmät. Lisäksi ensisijainen kudos /solu lähde, sääteleviä mekanismeja sen verenkierrossa sekä toiminnallista roolia cndp1 edelleen epäselviä ja tulee keskittyä tulevaisuudessa tutkimuksia.

tukeminen Information

S1 Kuva. APOA4 tasoa validointi määrityksessä.

Havaitut proteiinin tasot näkyvät APOA4 käyttämällä sandwich immunoassay ja esitetään keskiarvo intensiteetin fluoresenssin (MIF).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0123566.s001

(EPS)

Kiitokset

Olemme kiitollisia Kerstin Wahlen, Eva Sjölin, Gaby Åström, Yvonne Widlund, Katarina Hertel ja Britt-Marie Leijonhufvudin niiden ammattitaitoisen teknisen ja kliinisen apua.