Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tämän tutkimuksen tavoitteena on selvittää esiintyvyys ja kliiniset vaikutukset

HER2

tilaansa ensisijainen peräsuolen syöpä (CRC).

HER2

tila tutkittiin kahdessa retrospektiivinen kohorttia 365 peräkkäisen CRC potilasta (kohortti 1) ja 174 kehittyneet CRC potilaalla on synkronoitu tai metachronous kaukaisia ​​etäpesäkkeitä (kohortti 2).

HER2

tila määritettiin suorittamalla dual-väri hopea in situ -hybridisaatio (SISH), mRNA in situ -hybridisaatio (ISH), ja immunohistokemia (IHC). Ilmaantuvuus HER2-proteiinin yli-ilmentymisen (IHC 2 + /3 +) oli noin 6% (22 365 kohortin 1, 10 174 kohortin 2).

HER2

geenin monistaminen havaittiin 5,8%: lla potilaista peräisin kohortin 1 ja 6,3%: lla potilaista peräisin kohortin 2.

HER2

geenin monistaminen useammin havaittiin CRC sijaitsee peräsuolessa kuin oikeaan ja vasemmalle paksusuolen (

P

= 0,013 in kohortissa 1;

P

= 0,009 in kohortissa 2).

HER2

asema, määräytyy IHC, ISH, ja dual-väri SISH, ei merkittävästi liittynyt aggressiivinen CRC käyttäytyminen tai potilaiden ennusteeseen sekä ikäryhmät. Yhdistetyn kohortti, joissa on yhteensä 539 tapausta, viskositeettiluku oli 95,5% välillä dual-väri SISH ja IHC analyysimenetelmiä. On ilman equivocally immunovärjättiin tapauksissa (IHC 2 +), viskositeettiluku oli 97,7%.

HER2

mRNA overtranscription, havaitaan ISH korreloi merkittävästi proteiinin yli-ilmentymisen ja geenin monistaminen (

P

0,001).

HER2

geenin monistaminen tunnistettiin pienellä osalla CRC potilaita suurilla vastaavuutta hinnat välillä kaksivärinen SISH ja IHC analyysimenetelmiä. Vaikka

HER2

tila ei ennustanut potilaiden ennusteeseen, meidän havainnot voivat toimia perustana tuleville tutkimuksiin potilaan valinta

HER2

täsmähoitoihin.

Citation: Seo , Kwak Y, Kim DW, Kang SB, Choe G, Kim WH, et al. (2014)

HER2

Status kolorektaalisyövässä: Sen kliininen merkitys ja suhde

HER2

Geeniamplifikaation ja Expression. PLoS ONE 9 (5): e98528. doi: 10,1371 /journal.pone.0098528

Editor: Tšad Creighton, Baylor College of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 06 maaliskuu 2014; Hyväksytty: 02 toukokuu 2014; Julkaistu: toukokuu 30, 2014

Copyright: © 2014 Seo et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki tiedot sisältyvät käsikirjoituksen ja tukeminen tiedot tiedostoja.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat lupanumeroon 02-2013-041 päässä Seoul National University Bundang Hospital Research Fund. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet mitään eturistiriitoja.

Johdanto

edistysaskelista huolimatta kirurgisten tekniikoiden ja adjuvantti solunsalpaajahoitojen, peräsuolen syöpä (CRC) on edelleen yksi tärkeimmistä johtavista syistä syöpään liittyvien kuolemien maailmassa [1], [2]. Lisäparannuksia ymmärtämisessä tuumoribiologiassa ja tunnistaa onkogeenisten kuljettajat ovat johtaneet uusien terapeuttisten kohteiden [2], [3]. Siksi tunnistamaan biologisia merkkiaineita täsmähoitoihin edelleen etusijalla ihmisen syövän hoidossa [4]. Anti-kasvutekijän reseptorin (EGFR) monoklonaalinen vasta-aine käsittely, mukaan lukien Setuksimabihoitoa ja panitumumabi, on raportoitu parantaa ilman taudin etenemistä pitkälle CRC potilailla, joilla on villin tyypin

KRAS

[5] – [7 ]. Huolimatta kiistatta terapeuttinen edistys, huomattava osa syöpäpotilaiden vastaavan huonosti hoidon ja hoitovaste ei voida tarkalleen ennustaa. Siksi on erittäin kiinnostavaa tunnistaa molekyylitason biomarkkereita ennustamiseksi lopputulokseen, hoitovasteen ja mahdollisten terapeuttisia kohteita CRC potilailla.

ihmisen orvaskeden kasvutekijän reseptori 2 (HER2) on transmembraaninen reseptori tyrosiinikinaasin, joka on jäsen EGRF [8], [9]. Aktivointi

HER2

on keskeinen rooli solujen proliferaatiota ja erilaistumista, apoptoosin, ja syövän etenemistä [8] – [10]. Trastutsumabi, humanisoitu monoklonaalinen vasta-aine, kohdistuu solunulkoisen domeenin

HER2

reseptoriin. Sen terapeuttinen hyöty on osoitettu

HER2

positiivisten rintasyöpäpotilaiden [11], [12]. Lisäksi yksi maamerkki tutkimus vuonna 2010 raportoitu, että Trastutsumabin tavanomaisen kemoterapian paransi potilaiden eloonjäämisen potilailla, joiden

HER2

-positiivisen edenneen mahasyövän tai maha- ruokatorven risteyksessä syöpä [13].

HER2

geenin monistuminen ja /tai proteiinin yli-ilmentymisen havaittiin 15-20% rintasyövistä ja korreloivat aggressiivinen fenotyyppiin, etäpesäkkeitä, ja kliinisiä tulos [14], [15]. Toisaalta,

HER2

geenin monistuminen ja /tai proteiinin yli-ilmentymisen havaittiin -22% mahalaukun syöpäpotilaita, mutta ennustetekijöitä merkitys oli kiistanalainen [16]. Koska trastutsumabi on merkittävästi parantunut eloonjäämiseen rinta- ja syöpien, se on kliinisesti hyvin kiinnostavia onko HER2 estäminen voi olla käyttökelpoinen kliinisen strategiana muissa ihmisen syövissä [17]. Vaikka muutamat tutkimukset ovat ilmaantuvuus ja kliininen seuraus

HER2

tilaansa CRC potilailla [18] – [22], sen kliinistä merkitystä ei ole vielä täysin selvitetty.

Me, siis , suoritettiin tämän tutkimuksen määrittää esiintyvyys ja kliininen merkitys

HER2

positiivisten tilaansa peräkkäisen ensisijainen CRC potilaille. Koska kohdennetut kemoterapia sovellettiin kehittyneitä CRC potilaille päivittäisessä käytännössä ja kehittynyt tapauksia ole riittävän sisälly peräkkäisen kohortissa 1, me lisäksi osallistui kehittyneitä CRC potilaalla on synkronoitu tai metachronous kaukaisia ​​etäpesäkkeitä (kohortti 2). Arvioimme

HER2

geenimonistuksen, lähetti-RNA (mRNA) transkription, ja proteiini ilmentymistilanne primäärikasvaimissa kahden retrospektiivinen kohortteja, ja analysoitiin myös viskositeettiluku hinnat ja analyysimenetelmiä.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat ja näytteet

yhteensä 539 CRC käsittelemistä tapauksista radikaaleja ilman leikkausta edeltävän hoidon, otettiin tutkimuksessa patologian osaston, Seoul National University Bundang Hospital. Kohortti 1 koostui 365 peräkkäisestä CRC hoidetuilla potilailla tammi 2005 ja joulukuun 2006 kohortti 2 koostuu 174 kehittyneitä CRC potilaalla on synkronoitu tai metachronous kaukaisia ​​etäpesäkkeitä, joille oli tehty kirurginen asemointia varten ensisijaisen CRC toukokuun 2003 ja joulukuussa 2009 kuitenkin kohortissa 1. Kaikki potilaat saivat hoitoa tavanomaisen käytännön mukaisesti ohjeet leikkauksen jälkeen, ellei lääketieteellisesti aiheinen. Kaikki tapaukset olivat tarkastelleet 2 patologit (A.N.S ja H.S.L) ja ne järjestetään mukaan 7

painos American sekakomitean

Cancer Staging Manual

[23]. Kliinis ominaisuudet saatiin potilasasiakirjamerkinnöistä ja patologian raportteja. Seuranta tiedot, kuten potilaiden hoitotuloksiin ja välinen aika, jona kirurgisen resektion ja kuoleman kerättiin. Tapaukset menetti seurata ja kuolemantapauksia muista syistä kuin CRC katsottiin sensuroitiin tiedot eloonjäämisen analysointia.

Eettinen

Kaikki ihmisen näytteet saatiin tiedostoja kirurgisesti resekoitu tutkituista tapauksista laitoksella patologian, Seoul National University Bundang sairaala patologisen diagnoosin. Retrospektiivinen tutkimus tehtiin käyttämällä tallennettuja näytteitä jälkeen patologisen diagnoosin, ja kaikki näytteet anonymisoidaan ennen tutkimusta. Tutkimuksen hyväksyi Institutional Review Board of Seoul National University Bundang Hospital (viite: B-1210 /174-301). Osallistujat eivät antaneet kirjallisen tietoisen suostumuksen tässä tutkimuksessa. Institutionaalinen Review Board luopua tarvetta kirjallinen suostumus olosuhteessa nimettömäksi ja ilman ylimääräisiä intervention osallistujille.

Tissue array menetelmällä

Molemmissa kohorteissa, kirurgisesti resektoitiin ensisijainen CRC näytteet olivat formaliini -Kiinteä ja parafinoidut (FFPE). Nämä primaarikasvaimen lohkoja käytettiin rakentamiseen kudoksen array lohkoja. Lyhyesti, mistä edustavalla korjatun lohkojen kussakin tapauksessa yhden ytimen, jonka halkaisija on 2 mm, saatiin ja täsmällisesti järjestetty uusi vastaanottaja lohkoja käyttämällä trephine laitetta, kuten edellä on kuvattu tekijän ryhmä (Superbiochips Laboratories, Seoul, Etelä-Korea) [24]. Riittävä tapaus määriteltiin kasvain miehittää ≥20% ydinalueen.

immunohistokemia (IHC) B

HER2 IHC suoritettiin käyttäen PATHWAY anti-HER2 /neu (4B5, kani monoklonaalinen; pre-laimennus; Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, USA) vasta-aine ja Ultraview Universal DAB kit (Ventana Medical Systems) automaattiseen immunostainer (BenchMark XT, Ventana Medical Systems), mukaan valmistajan ohjeiden. IHC pisteytys oli itsenäisesti suorittaa kaksi patologit (A.N.S ja H.S.L) ilman aiempaa kokemusta kliinis tiedon tai molekyylin saatujen tulosten kautta muita menetelmiä. Pisteytys suoritettiin sen DAKO HercepTest ™ ohjeet (DAKO) mahasyövän seuraavasti [25]: 0, ei reaktiivisuutta tai kalvon värjäytymistä 10% tuumorisolujen; 1+, heikko /tuskin havaittava osittainen kalvon värjäytymistä ≥10% tuumorisolujen; 2+, heikko tai keskivaikea täydellistä tai basolateraalisessa kalvon värjäytymistä ≥10% tuumorisolujen; 3+, kohtalainen-vahva täydellinen kalvon värjäytyminen on ≥10% syöpäsolujen. Kaksi patologia täysin sopivat kaikkiin IHC 3+ tapauksissa taas lopullinen yksimielisyys määritettiin keskustelun kautta monen pään mikroskooppi muutamassa discrepant tapauksissa IHC 1+ tai 2+. IHC 2+ ja 3+ katsottiin osoittavan proteiinin yli-ilmentymisen.

HER2

mRNA in situ -hybridisaatio (ISH) B

havaitsemiseksi

HER2

mRNA overtranscription , RNAscope 2-plex (Advanced Cell Diagnostics, Hayward, CA, USA) suoritettiin valmistajan standardin suosituksia. Tulkinta suoritettiin ohjeita RNA laajuus FFPE Assay Kit kuten aiemmin on kuvattu [26]: mitään värjäytymistä (pisteet 0); värjäystä 10% syöpäsolujen, joka oli vaikea tunnistaa at x40 objektiivilinssin (pistemäärä 1); värjäystä ≥10% syöpäsolujen, joka oli vaikea tunnistaa at x20 objektiivilinssi mutta helppo at x40 objektiivilinssin (pistemäärä 2); värjäystä ≥10% syöpäsolujen, joka oli vaikea tunnistaa at x10 objektiivilinssi mutta helppo at x20 objektiivilinssin (pistemäärä 3); värjäämällä ≥10% syöpäsolujen, jotka oli helppo tunnistaa at x10 objektiivilinssin (pistemäärä 4). Pistemäärä 4 osoittaa

HER2

overtranscription. ISH on itsenäisesti tulkinnut kaksi patologit (ANS ja HSL) ilman aiempaa kokemusta kliinis tietoja tai HER2 tila saadaan muiden menetelmien.

Dual-väri hopea

in-situ

hybridisaatio (SISH)

bright-kentän dual-väri SISH analyysi suoritettiin automaattiset SISH värjäytymistä laite (BenchMark XT, Ventana Medical Systems), mukaan valmistajan protokollia INFORM

HER2

DNA ja INFORM kromosomi 17 ( CEP17) koettimia (Ventana Medical Systems).

HER2 Twitter /CEP17 SISH signaalit laskettiin mukaan tulkitseva ohjeena Ventana INFORM

HER2

DNA koetin värjäys mahalaukun syöpäsolujen (Ventana Medical Systems). Kasvainsoluja skannataan kriisipesäkkeisiin käyttämällä 20 × tai 40 × tavoitteita, ja alue on korkein signaaleja valittiin. Signaalit laskettiin 20 ei-päällekkäisiä tuumorisolun ytimiä kussakin tapauksessa käyttäen 60 × tai 100 × tavoitteita kahdella patologit (A.N.S ja H.S.L) jotka sokaisi HER2: ta muilla havaitsemismenetelmiä ja kliiniset tiedot. Pieni tai suuri klustereita pidettiin 6 signaaleja ja 12 signaalit, vastaavasti.

HER2

geenin monistaminen määriteltiin

HER2 Twitter /CEP17 suhde ≥2.0 20 kasvaimen ytimeksi. Kiistanalaista tapausta (suhde: 1,8-2,2) olivat kertoi ainakin 20 ei-päällekkäisiä ytimiä eri kasvainsolujen toisessa kohdealueen, ja uusi

HER2 Twitter /CEP17 suhde laskettiin uudelleen. Normaalit paksusuolen epiteelisolut ja muut viereiset hyvänlaatuinen solujen toimi sisäisen valvonnan.

mikrosatelliittien epävakaus (MSI) B

MSI tulokset saatiin aikaan vertaamalla alleelinen profiilit 5 mikrosatelliittimarkkerin (BAT 26, BAT-25, D5S346, D17S250, ja S2S123) kasvaimen ja vastaavassa normaalissa näytteitä. Polymeraasiketjureaktio tuotteista FFPE kudoksia analysoitiin käyttämällä DNA automaattisen sekvenssin (ABI 3731 geneettinen analysaattorin, Applied Biosystems, Foster City, CA) protokollan mukaisesti kuvattu aiemmin [27].

Tilastolliset analyysit

välinen yhteys kliinis ja

HER2

tila analysoitiin Chi-square tai Fisherin testiä, ja Wilcoxonin /Mann-Whitneyn testi tarvittaessa. Spearmanin tai Kendallin tau-b testiä käytettiin arvioimaan korrelaatiota analyysimenetelmiä. Yhdistyksen välillä

HER2

tila ja kokonaiselossaolo määritettiin käyttäen Kaplan-Meier menetelmällä, ja merkitystä ryhmien välisten erojen verrattiin käyttäen log-rank-testi tai Breslow testi, jos eloonjäämiskäyrien risteytettiin seurannan aikana up aikana. Monimuuttuja selviytyminen analyysit suoritettiin käyttäen Coxin suhteellisten riskien mallia, ja riskisuhde ja sen 95%: n luottamusväli laskettiin kunkin tekijän. Kaikki testit olivat kaksipuolinen, jossa

P

arvo 0,05 katsotaan osoittavan tilastollista merkittävyyttä. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen IBM SPSS tilastojen 20 (Armonk, NY, USA) ohjelmiston.

Tulokset

Potilaiden ennusteeseen viittaavia ominaisuuksia

Taulukko 1 tarjoaa demografiset ja lähtötilanteen kliinis potilaiden ominaisuuksiin sisältyvät kunkin kohortin. Kohortti 1 sisältyy 202 (55,3%) mies- ja 163 (44,7%) naisten mediaani-ikä 65 vuotta (vaihteluväli: 20-95 vuotta). Lisäksi joukossa 353 potilasta, joilla MSI analyysi käytettävissä, 321 (90,9%) oli microsatellite stabiili (MSS) tai mikrosatelliittien epävakaus-low (MSI-L), kun taas 32 (9,1%) oli mikrosatelliittien epävakaus-korkea (MSI-H). Toisaalta, kohortti 2 sisältyy 94 (54,0%) mies- ja 80 (46,0%) naisten mediaani-ikä on 60 vuotta (vaihteluväli: 28-93 vuotta). MSS /MSI-L löydettiin 159 (98,1%) ja MSI-H 3 (1,9%) ulos 162 potilaalla on MSI analyysiin saatavilla.

HER2

tilaansa CRC potilailla

HER2-proteiini oli heikosti tai heikosti ilmaistaan ​​kalvon ja /tai sytoplasmassa on normaalia koolonin epiteelin, kun taas kalvo kasvainsolujen esitetään erilaisilla värjäys- kuvioita (kuvio 1). Peräkkäisinä kohortti 1, IHC 0 todettiin 296 365 potilasta (81,1%), IHC 1+ 47 (12,9%), IHC 2+ 14 (3,8%), ja IHC 3+ 8 (2,2%). Vuonna kohortti 2 kehittyneiden tapauksissa IHC 0 havaittiin 139 174 potilasta (79,9%), IHC 1+ 25 (14,4%), IHC 2+ 5 (2,9%), ja IHC 3+ 5 (2,9% ). Yli-ilmentävät HER2 havaittiin 6,0% kohortin 1 ja 5,8% kohortin 2.

(A) IHC 0 (40 x tavoite); (B) pisteet 0 mRNA ISH (40 x tavoite); (C)

HER2

geeni disomia (60 x tavoite); (D) IHC 3+; (E) pisteet 4 mRNA ISH; (F)

HER2

geenin monistaminen (

HER2 Twitter /CEP17 suhde ≥2).

harvoilla ruskea pistemäinen pisteitä havaittiin tumassa ja /tai solulima normaalin paksusuolen epiteelin käyttämällä

HER2

mRNA ISH, kun taas eri ydin- ja /tai sytoplasmista värjäytymistä havaittiin kasvaimen soluihin (kuvio 1). Vuonna kohortti 1, ISH pisteet 0 havaittiin 12 365 potilaalla (3,3%), pisteet 1 118 (32,3%), pisteet 2 160 (43,8%), pisteet 3 66 (18,1%), ja pisteet 4 9 (2,5%). Vuonna kohortti 2, ISH pisteet 0 havaittiin 11 174 potilaalla (6,3%), pisteet 1 41 (23,6%), pisteet 2 93 (53,4%), pisteet 3 25 (14,4%), ja pisteet 4 4 (2,3%).

HER2

mRNA overtranscription havaittiin 2,5% kohortin 1 ja 2,3% kohortin 2.

HER2

signaaleja havaittiin kuten disomia normaalissa paksusuolen epiteelissä, joten se oli käytetään sisäisen valvonnan. Kuitenkin,

HER2

signaalit vaihteli koko kasvaimen solut (kuvio 1). Mediaani

HER2 Twitter /CEP17 suhde oli 1,16 (alue: 0,68-19,62) in kohortin 1 ja 1,19 (vaihteluväli: +0,57-+21,89) in kohortin 2.

HER2

geenin monistaminen havaittiin 21 365 potilasta (5,8%) vuonna kohortin 1, ja 11 174 (6,3%) vuonna kohortin 2. ei ollut merkitsevää eroa ilmaantuvuus

HER2

positiivisuuden välillä peräkkäisen kohortti 1 tapauksia ja kehittyneet kohortti 2 tapausta riippumatta havaitsemismenetelmä (IHC, ISH tai SISH). Yhteensä 32 monistettu tapauksissa tarkoita

HER2

geenikopiomäärä numerot (GCN) oli 6 tai enemmän 16 tapauksessa. Mukaan mahasyövän asettamat kriteerit TOGA tutkimus [13],

HER2

positiivisuus määritellään IHC 3+ tai IHC 2 +

HER2

geenimonistuman.

HER2

positiivisuutta havaittiin 3,6% (13 365 potilasta) ja kohortin 1 ja 4,0% (7 174 potilasta) ja kohortin 2. Tutkimme myös kromosomi 17 (CEP17) muutos- ja havaittiin homogeenisen CEP17 signaali kuvio. Mediaani CEP17 oli 2,15 (alue: 1,25-3,50) in kohortin 1 ja 1,95 (vaihteluväli: 0,83-+3,15) in kohortin 2. CEP17 polysomy, joka määriteltiin arvo ≥3 CEP17 signaaleja /tuma, havaittiin 2,7% (10 365 potilasta) ja kohortin 1 ja 2,3% (4 174 potilasta) ja kohortin 2.

konkordanssi valuuttojen välisistä tunnistusmenetelmiä

jotta voitaisiin arvioida välistä yhdenmukaisuutta eri menetelmillä, yhdistimme molemmat ikäryhmät. Niistä yhteensä 539 tapausta,

HER2

geenin monistaminen merkitsevästi liittyy proteiinien yliekspressio (ρ, 0,601;

P

0,001) ja mRNA overtranscription (ρ, 0,626;

P

0,001; taulukko 2). Kaikki IHC 3+ tapaukset ja kaikki ISH pisteet 4 tapausta osoitti

HER2

geenin monistamisen kaksivärinen SISH. Konkordanssi oli 95,5% välillä dual-väri SISH ja IHC analyysimenetelmiä. Kun ilman equivocally immunovärjättiin tapauksissa (IHC 2 +), viskositeettiluku oli 97,7%.

HER2

mRNA overtranscription korreloi merkitsevästi proteiinin yli-ilmentymisen (ρ, 0,575;

P

0,001; taulukko S1).

Näistä 539 tapauksessa 12 tapausta osoitti

HER2

-geenin monistuksen, mutta IHC 0 tai 1+, joka on kuvattu yksityiskohtaisesti taulukossa S2. Yhdessä tapauksessa, homogeeninen

HER2

-geenin monistaminen ja mRNA overtranscription havaittiin koko kasvaimen ytimessä, mutta HER2-proteiinia ei ilmaistu mitään erityistä kasvaimen alueelle ydin (kuvio 2). Muissa 11 tapauksessa, HER2-proteiinia ekspressoitiin fokaalisesti kanssa IHC 1+ pisteet, ja

HER2

geenin monistaminen havaittiin sijaittava proteiinin ilmentymisen alueella (kuva 2).

(A- C) HER2 IHC 1+ syövän painopisteenä (A), polttoväli mRNA overtranscription (B) ja

HER2

geenin monistaminen (C) mukaisesti proteiinin ilmentymisen alueella. (D-F): n ilmentyminen ei HER2-proteiinin (D), mutta hajanainen mRNA overtranscription (E) ja

HER2

geenin monistaminen (F) yhdessä tapauksessa.

korrelaatio

HER2

tila ja kliinis-

tutkimiseksi kliinistä merkitystä

HER2

tila, arvioimme yhdistyksen välillä kliinis muuttujien ja

HER2

tila. HER2-proteiinin yli-ilmentymän ei liittynyt MSI asemasta tai aggressiivinen käyttäytyminen, mukaan lukien infiltroiva kasvain raja, invaasio syvyys, imusolmuke etäpesäke, etäinen etäpesäke, ja hermoa invaasio (

P

0,05, taulukko S3), kun se liittyi kasvaimen sijainti peräsuolessa (

P

= 0,033 in kohortissa 1, taulukko 3).

HER2

mRNA overtranscription ei liittynyt mitään kliinis muuttujat, paitsi kasvain sijainti peräsuolessa (

P

= 0,001 kohortissa 1,

P

= 0,026 in kohortissa 2; taulukko 3).

HER2

geenin monistaminen liittyi myös kasvaimen sijainti ja sen useammin löydetty peräsuolessa kuin oikealle tai vasemmalle paksusuolen (

P

= 0,013 in kohortissa 1,

P

= 0,009 in kohortissa 2, taulukko 3, taulukko S4).

määrittämiseksi ennustetekijöiden merkitystä

HER2

positiivisten asema, suoritimme selviytyminen analysoi kussakin kohortissa. Kaikki potilaat kohortin 1 ja 2 saatiin onnistuneesti seurattiin selviytymisen analyysiä. Keskimääräinen seuranta-aika oli 68 kuukautta (vaihteluväli: 1-85 kuukautta); 98 potilasta (26,8%) kuoli syöpään kohortin 1. kohortin 2, keskimääräinen seuranta-aika oli 66 kuukautta (vaihteluväli: 1-105 kuukautta); 72 potilasta (41,4%) kuoli syöpään.

HER2

geenimonistuksen, mRNA overtranscription tai proteiini yliekspressio ei liittynyt tiettyyn tautiin eloonjäämisen kohortin 1 ja kohortti 2 (

P

0,05; kuva S1). Vuonna kohortti 1, ikä, kasvaimen koko, kasvain vaiheessa histologinen, imusuonten invaasio, hermoa invaasio, laskimoiden invaasio, ja infiltroiva kasvaimen raja liittyi merkittävästi potilaiden ennusteeseen (

P

0,05) mukaan univariate eloonjääminen analyysit. Histologisia erilaistuminen, hermoa invaasio, ikä, ja kasvaimen vaiheessa tunnistettiin itsenäisinä ennustavat tekijät tautikohtaisia ​​eloonjäämisen (

P

0,05; tuloksia ei ole esitetty). Kuitenkin kohortissa 2 tapauksissa kasvaimen sijainti, kasvain vaiheessa histologisen erilaistumisen, imusuonten invaasio, ja hermoa invaasio ennusti potilaiden ennusteeseen, jonka yhden muuttujan eloonjääminen analyysi (

P

0,05), josta kasvain vaiheessa (

P

= 0,018) ja imusuonten invaasio (

P

= 0,024) olivat riippumattomia riskitekijöitä mukaan monimuuttujamenetelmin (tuloksia ei esitetty).

keskustelu

tämän tutkimuksen tarkoituksena oli tunnistaa esiintyvyys

HER2

positiivisten asema kahdessa retrospektiivinen ikäluokat, kuten peräkkäistä CRC ja kehittyneen CRC kaukaisiin etäpesäke, ja selventää niiden kliinistä merkitystä. Tässä havaitsimme, että

HER2

geenin monistuminen ja proteiinin yli-ilmentymisen todettiin noin 6% CRC molemmista ikäluokat, CRC jossa

HER2

geenin monistaminen sijaitsivat yleisemmin peräsuolessa kuin oikealle tai vasemmalle paksusuolen,

HER2

tila ei liittynyt aggressiivinen kliinis-tai huonompi prognoosi, ja vastaavuutta hinnat välillä havaitsemisen menetelmät olivat erittäin korkeat. Parhaan tietomme mukaan tämä on ensimmäinen raportti arvioida

HER2

positiivisten asema useilla tekniikoita laajamittainen tutkimus Aasian CRC potilailla.

Toistaiseksi useita tutkimuksia ovat raportoineet, että taajuus HER2-proteiinin yli-ilmentymisen vaihtelee suuresti, 0%: sta 80%: in CRC [28], [29], ja sen ennustetekijöitä merkitys on kiistanalainen [28], [30] – [32]. Tämä keskustelu saattaa johtua useista syistä, kuten ensisijainen vasta-ero, ero pisteytysjärjestelmät HER2-proteiinin ilmentymisen, ero teknisen lähestymistavan, otoskoko, rotuerojen, ja heterogeenisuus tutkimuspopulaatiosta. Kun hyväksytty värjäys ja pisteytys tekniikoita käytettiin, määrä kalvomainen ja sytoplasman yliekspressio HER2 raportoitiin noin 5% ja 30%, vastaavasti [29]. Käytimme hyväksytty värjäystä ja pisteytys menetelmiä, ja kalvo HER2 havaittiin noin 6%. Nämä havainnot viittaavat siihen, että trastutsumabi voi olla tehokas pienellä osalla CRC potilaista [33]. Vaihtoehtoisesti solunsisäinen HER2-kohdistaminen yhdisteet saattavat olla houkutteleva hoitovaihtoehto kolmasosa CRC potilaille, jos sytoplasman HER2 on todella aktiivisesti mukana karsinogeneesi CRC [29], [33].

On syytä huomata, että viskositeettiluku oli 95,5% välillä dual-väri SISH ja IHC havaitsemismenetelmät esillä olevassa tutkimuksessa. Kun ilman equivocally immunovärjättiin tapauksissa (IHC 2 +), viskositeettiluku oli 97,7%. Nämä vastaavuutta hinnat olivat tarpeeksi käyttää vain IHC menetelmä seulontaa varten

HER2

geenimonistuksen, ja samanlainen hinnat nähdään maha-ruokatorven syöpään edellisessä tutkimuksissa [4], [34], [35]. Niistä poikkeava tapauksissa yksi tapaus oli

HER2

geenin monistuksen homogeenisen jakautumisen, mutta HER2-proteiinia ei ilmaissut. Tämä havainto on raportoitu maha-ruokatorven syöpä osuus 2%: sta 33%: ssa tapauksista [4], [34] – [37]. Tämä ilmiö edellyttää lisätutkimuksia, mutta seuraavat hypoteesi voisi selittää sen: virheellinen jälkeinen käännösprosessit, kuten väärä kolmiulotteinen taitto, vääristyneet lokalisointi proteiinin solukalvoon, ja sopimatonta proteiini glykosylaation, mikä laski HER2-proteiinin ilmentyminen, jopa vaikka

HER2

geeni monistetaan [4]. Meidän tapauksessamme,

HER2

mRNA overtranscribed kanssa jakautuvat tasaisesti tukee oletusta edellä mainittiin. Huolimatta korkea vastaavuutta hinnat välillä havaitsemismenetelmät tässä tutkimuksessa,

HER2

mRNA ISH ei ole tällä hetkellä vakiomenetelmä arvioimiseksi

HER2

tila, ja siellä ei ole vielä vahvistettu leikkaus- off määrittelemään mRNA overtanscription. Siten lisätutkimukset ovat tarpeen vahvistaa

HER2

mRNA ISH menetelmällä.

Äskettäin Conradi et al. [21] seuloa

HER2

positiivisuus käyttäen samoja menetelmiä ja kriteerejä kuin meidän, ja ilmoitti, että

HER2

positiivisuutta havaittiin 12,4% peräsuolen biopsianäytteissä ja 26,7% peräsuolen resekoitu näytteen. Lisäksi

HER2

positiivisuuden resektoitiin näytteet itsenäisesti korreloi pitkäaikainen syöpää erityisiä selviytymisen peräsuolen syöpäpotilailla. Sclafani et ai. [22] arvioitiin myös

HER2

positiivisuus korkean riskin, paikallisesti edennyt peräsuolen syövän potilaiden asiantuntijatason C tutkimuksessa neoadjuvant kapesitabiinin ja oksaliplatiinin ja sädehoitoa (CRT) tai ilman setuksimabia. Kuitenkin tutkimuksessaan,

HER2

positiivisuus oli vain 4,3%, ja se ei ollut yhdessä ennusteeseen viittaavia parametreja ja potilaiden hoitotuloksiin. Tutkimuksemme käsitti oikealle ja vasemmalle paksusuolen syöpää ja peräsuolen syövät; Näin pystyimme analysoimaan taajuus

HER2

vahvistusta ja yli-ilmentyminen mukaan ensisijainen sijainti.

HER2

monistaminen esiintyy yleisimmin peräsuolen syöpään kuin missään muussa ensisijainen sivusto, ja

HER2

positiivisuus peräsuolen syöpä oli 8,0% kohortin 1 ja 7,5% vuonna kohortissa 2. epäjohdonmukaisuus varten taajuus

HER2

positiivisuus heijastaa todennäköisesti mahdollisia vaikutuksia useista tekijöistä, kuten etnisyys, erilaiset tutkimus väestö, ja kasvaimen heterogeenisyys. Erityisesti kahdessa edellisessä tutkimuksessa, erimielisyys on

HER2

positiivisuuden välillä koepala ja resektoitiin näytteen havaittiin [21], [22]. Vuonna Näiden havaintojen perusteella ehdotetaan, että kasvaimensisäisenä

HER2

heterogeenisyys voi esiintyä CRC, joka on myös raportoitu tutkimuksissa mahasyövän [10]. Lisätutkimuksia tarvitaan selvennystä.

Perinteisesti CEP17 muutokset ovat vaikuttaneet mittaus

HER2 Twitter /CEP17 suhde. Näin ollen joissakin tapauksissa oli luokiteltu virheellisesti vahvistamattoman. Esillä olevassa tutkimuksessa, CEP17 polysomy oli harvinainen tapahtuma on 2,6% tapauksista, joten se ei aiheuttanut harhaanjohtavia tulkinnan

HER2

geenimonistuman. CEP17 polysomy ei kliinisesti merkittävästi potilailla, joilla on CRC.

Vaikka kahdessa kliinisessä tutkimuksessa olivat yrittäneet tutkia eduksi anti-HER2 hoidon edennyt tai metastaattinen CRC, kokeet suljettiin ennenaikaisesti alhaisen karttuminen liittyvän esiintyvyys on alhainen yli-ilmentävät HER2 kehittyneissä CRC potilailla [38], [39]. Kuitenkin yksi tuoreessa tutkimuksessa kävi ilmi, että

HER2

tarjoillaan ennustaa vastustuskykyä EGFR monoklonaalinen vasta-aine in potilaasta johdettujen ksenografteissa päässä metastaattinen CRC, joka johtaa kirjoittajat ehdottaa mahdollisuutta yhdistetyn hoitomuotojen setuksimabia kestävä CRC potilaille [ ,,,0],40]. Lisäksi äskettäin Heracles tutkimuksessa (HER2 Amplification Colo-peräsuolen syöpä Enhanced ositus) tutkii parhaillaan käyttöön trastutsumabi plus Lapatinibin tai pertuzumab metastaattisessa CRC kanssa

HER2

vahvistus [41]. Siksi meidän havainnot olisi hyödyllistä kehittämisessä ja soveltamisessa

HER2

täsmähoitoihin CRC potilailla. Koska mutaatio tulokset

KRAS

ja

BRAF

eivät olleet mukana tässä tutkimuksessa, emme pystyneet selvittämään suhde

HER2

tila ja

KRAS

tai

BRAF

CRC. Se on huolestunut rajoitus Tutkimuksemme koska

KRAS

ja

BRAF

ovat erittäin tärkeää määritellä hoidon lähestymistapaa CRC potilailla. Lisäksi tutkimuksemme on mahdolliset heikkoudet, kuten retrospektiivinen suunniteltu tutkimus, arviointi

HER2

käyttäen kudosta array menetelmällä, heterogeenista tutkimus väestön yhden toimielimen, ja valitsemalla potilaiden kohortissa 2. Me otettiin CRC sairastavien potilaiden käytettävissä kirurgisesti resektoitiin syöpä kudoksia ensisijainen kasvaimia kohortin 2. kaikkia kehittyneitä CRC Metastasoivassa sairauksia olivat mukana ja pitkälle edenneiden ei ilmoittautunut koska niiden toimimattomuus. Siksi tunnistamaton harhat voinut vaikuttaa meidän selviytymisen tuloksia. Lisäksi pieni määrä

HER2

kasvaimia voi sulkea pois vankka tilastollinen analyysi, mikä edelleen laajoja tutkimuksia tarvitaan vahvistamaan tuloksemme.

Yhteenvetona

HER2

geenimonistus ja proteiinin yli-ilmentyminen havaittiin noin 6% CRC potilaista ja ei ole kliinistä vaikutusta paitsi kasvaimen sijainti esillä olevassa tutkimuksessa. Olemme myös osoittaneet korkeita vastaavuutta hinnat välillä IHC ja kaksivärinen SISH menetelmiä yhdistetyssä ikäryhmät. Vaikka vähemmistö CRC potilaista ilmeni

HER2

geenimonistuksen, nämä potilaat olisivat mahdollisia ehdokkaita anti-HER2-hoidon, ja IHC voisi olla ensisijainen seulontatesti potilaan valinnan.

tukeminen tiedot

Kuva S1.

Kaplan-Meierin eloonjäämiskäyrien mukaan HER2 tila kunkin havaitsemismenetelmä. (A-B) Eloonjäämiskäyrät mukaan HER2-proteiinin ilmentymisen aseman kohortin 1 (A) ja kohortti 2 (B). (C-D) Eloonjäämiskäyrät mukaan

HER2

mRNA: n ilmentymisen aseman kohortin 1 (C) ja kohortti 2 (D). (E-F) Eloonjäämiskäyrät mukaan

HER2

geenin monistaminen tilaansa kohortin 1 (E) ja kohortti 2 (F).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0098528.s001

( JPG)

Taulukko S1.

suhde immunohistokemia ja mRNA in situ -hybridisaatiota varten

HER2

in CRC yhdistetyn kohortin.

doi: 10,1371 /journal.pone.0098528.s002

(DOCX) B Taulukko S2.

yksityiskohdat tapauksissa

HER2

geenimonistuksen, mutta IHC 0 tai 1+ tuloksia.

doi: 10,1371 /journal.pone.0098528.s003

(DOCX) B Taulukko S3.

välinen yhteys HER2-proteiinin ilmentymisen ja ennusteeseen viittaavia muuttujia CRC kunkin kohortin.

doi: 10,1371 /journal.pone.0098528.s004

(DOCX) B Taulukko S4.

välinen yhteys

HER2

geenimonistus ja ennusteeseen viittaavia tekijöitä CRC kunkin kohortin.

doi: 10,1371 /journal.pone.0098528.s005

(DOCX) B

Kiitokset

Olemme kiitollisuudenvelassa Jung Ok Park Seoul National University Bundang Hospital (Seongnam-si, Korean tasavalta) antelias apua tässä tutkimuksessa.