Krooninen sairaus

tiivistelmä

Lysyl oksidaasi (LOX) on osoitettu sekä edistää ja tukahduttaa syövän etenemiseen, mutta sen rooli eturauhassyövän ei juuri tunneta. LOX immunoreaktiivisuus pisteytettiin eturauhasen kasvain epiteelin, kasvain strooman ja kasvaimen läheisellä hyvänlaatuisen eturauhasen epiteelin ja strooman. LOX tulokset kasvaimen ja ei-pahanlaatuiset eturauhaskudoksiin tutkittiin sitten mahdollista yhdistykset kliinisiä piirteitä ja eloonjäämisen historiallinen kohortin miehet, jotka oli diagnosoitu eturauhasen syöpä höyläysleikkaus ja seuraa valpas odottaa. Miehet, joilla on alhainen LOX pistemäärä ei-pahanlaatuinen eturauhas- epiteelin oli merkitsevästi pidempi syöpä erityinen selviytymisen miehiä, joilla on korkeat pisteet. Lisäksi LOX pisteet hyvänlaatuisen eturauhasen epiteelin pysyi ennustetekijöiden vuonna monimuuttuja analyysiin myös Gleason pisteet. LOX pisteet eturauhasen kasvain epiteelin korreloi positiivisesti Gleason pisteet ja etäpesäkkeitä, mutta ei liittynyt syövän selviytymisen. LOX pisteet kasvain ja ei-pahanlaatuiset eturauhasen strooman näytti liity näiden kasvainten ominaisuuksiin. Vuonna eturauhasen yksilöitä, LOX immuuni-värjäys vastasi LOX in situ hybridisaatio- ja LOX-mRNA-tasot todettiin olevan samanlainen kasvaimen ja viereisen ei-pahanlaatuinen alueilla, mutta merkittävästi lisääntynyt luun etäpesäkkeitä näytteissä. LOX tasot sekä kasvaimia ja ympäröivän kasvain, elimen ilmeisesti liittyvät eturauhasen syöpään aggressiivisuutta.

Citation: Nilsson M, Hägglöf C, Hammarsten P, Thysell E, Stattin P, Egevad L, et ai. (2015) Korkea Lysyl Oksidaasipositiivinen (LOX) Non-maligni Eturauhasen epiteelin ennustaa Huono tulos Eturauhassyöpä Patient Ylläpito valpas odottaa. PLoS ONE 10 (10): e0140985. doi: 10,1371 /journal.pone.0140985

Editor: Natasha Kyprianou, University of Kentucky College of Medicine, Yhdysvallat |

vastaanotettu: 06 elokuu 2015; Hyväksytty: 02 lokakuu 2015; Julkaistu: 26 lokakuu 2015

Copyright: © 2015 Nilsson et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi.

Rahoitus: Tätä työtä tukivat avustuksin Ruotsin Research Council (65X-05935-32-3, https://www.vr.se/inenglish.4.12fff4451215cbd83e4800015152.html) , Ruotsin Cancer Foundation (CAN 2013/327, https://www.cancerfonden.se/sv/Information-in-English/), Lions Cancer Research Foundation. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

eturauhasen kasvaimia ovat yleensä multifokaalinen ja heterogeenisiä ja niiden luonnollinen historia vaihtelee vaarattomia tappavia. Nykyiset kuvantamismenetelmät ei voida riittävän havaita eturauhasen kasvaimia, vaan useita neulabiopsiat, näytteenotto alle 1% eturauhasen tilavuuden, otetaan eturauhasen tunnistaa pahanlaatuinen kasvain kudos. Kasvain sisältäviä koepaloja, toivottavasti edustaa kaikkein pahanlaatuinen kasvain läsnä, ovat histologisesti sijoitettiin (Gleason, GS) ja yhdessä seerumin prostataspesifisen antigeenin (PSA) käytetään ennustaa kasvaimen käyttäytymisen. Useimmissa eturauhassyöpäpotilaalla nämä menetelmät on rajallinen kyky ennustaa taudin aggressiivisuuteen, parempi prognostisia markkereita vuoksi tarvitaan kiireellisesti [1].

Ei-pahanlaatuista eturauhasen kudosta on aina näytteet koepaloja, ja viimeaikaisissa tutkimuksissa meille ja toiset ovat ehdottaneet, että kasvain elin on eri vaikuttavat /sävytetty veltto vs. aggressiivinen kasvaimissa [2]. Muutokset tavanomaisissa osat kasvain eturauhassyövän voi lisäksi adaptiivisen muutoksia myös olla seurausta kentän cancerization [3, 4]. Muutokset ei-pahanlaatuinen osat kasvain eturauhasen (syystä riippumatta) ovat tärkeää tunnistaa ja vahvistaa, sillä ne saattavat olla uusia merkkiaineita diagnosoida ja ennustaa eturauhassyövän [2-4]. Olemme nimenneet kasvaimeen vieressä on sovitettu ei-malignien eturauhasen kudosta Kasvaimen Ohjattu (ja siten osoittaa) Normaali Tissue (TINT) [2]. TINT sisältää morfologisesti normaaleilta vaikuttavien epiteelin ja strooman että kasvain elin ja ei ole suorassa kosketuksessa kasvain epiteelin ja siten erillään kasvain strooman /kasvaimen mikroympäristön.

Olemme aiemmin osoittaneet, että muutokset eturauhasen TINT epiteelin ja strooman liittyvät ennusteen tärkeitä kasvainten ominaisuuksiin, kuten GS ja kasvaimen vaiheesta, ja niitä voidaan käyttää arvioimaan riski kuolla eturauhassyöpään on valpas odottaa kohortin [2, 5-13]. Jotta tutkia TINT käsitettä tarkemmin olemme käyttäneet eläinmallissa, jossa rotan eturauhassyövän solut istutetaan eturauhanen immunokompetenttien rotilla. Tämä johtaa adaptiivisen kasvaimen edistää muutoksia kasvain eturauhasen lohko, esimerkiksi lisääntynyt tiheys makrofagien ja syöttösolut, ja lisääntynyt hyaluronaani [8, 9, 14-16]. Luonne ja laajuus nämä muutokset liittyvät paitsi kasvaimen koon vaan myös kasvainsolujen aggressiivisuus (Adamo et al., Julkaisematon). Gene-ilmentyminen tutkimukset osoittivat, että yksi tekijä selvästi säädellään ylöspäin rotan TINT oli Lysyl oksidaasi (LOX) [17].

LOX on erittyvä kupari riippuvan amiinioksidaasi, jossa ensisijainen tehtävä rajat link kollageenin ja elastiinin (molemmat säädellään ylöspäin rotan TINT [17]), on soluväliaineen (ECM). Lisääntynyt solunulkoinen LOX aktiivisuus johtaa siten jäykempi mikroympäristön joka edistää syövän etenemiseen, etäpesäkkeitä, ja invaasio [18-20]. LOX on myös osoitettu vaaditaan ennalta metastasoitunut kapealla muodostumisen [21]. Äskettäin, LOX, erittämä kasvain epiteelisolujen on myös osoitettu aiheuttavan ennalta metastaattinen luu- leesiot, joka edeltää ja helpottaa muodostumista rintasyövän etäpesäkkeiden [22]. Lisääntynyt LOX ilme on liittynyt huonompi tulos, jos potilaalla on astrosytoomissa, ei-pieni keuhkosyöpä ja mahasyöpä [23-25]. Kuitenkin, LOX on myös osoitettu olevan anti-kasvain aktiivisuutta useissa syöpätyypeissä, mukaan lukien keuhko-, haima-, maha- syöpä ja nenänielun karsinooman [26-28]. LOX estää HRAS aiheuttaman kasvaimen muodostumisen ja reverse HRAS-transformaatio fibroblastien [29, 30]. Sivutuote on tuotettu, kun lohkaisu LOX proentsyymi on myös osoitettu olevan kasvaimen suppressiivinen ominaisuuksia [31, 32]. Vähentynyt LOX ilme on havaittu useita syöpiä ja on sekaantunut LOX kuin tuumorisuppressorigeeniä [33].

rooli LOX eturauhassyövässä ei ole osoitettu ja sekä estävä ja stimuloivia vaikutuksia raportoidaan. Korkea LOX mRNA: n ekspressio liittyy korkealaatuisesta eturauhasen kasvaimia ja kasvaimen uusiutumisen [34] ja sen on osoitettu korreloivan GS [35]. Kääntäen, LOX mRNA ilmentyminen väheni metastaattisessa verrattuna ensisijainen eturauhasen kasvaimia [36] ja alhainen LOX ilmaisun on raportoitu myös korkea-asteen kasvaimet [37, 38], mikä viittaa menetys LOX ilmaisun aikana eturauhasen syövän etenemiseen.

tämän tutkimuksen tarkoituksena oli siis selvittää LOX proteiinin ilmentymistä eturauhasen kasvain epiteelisolujen, kasvain strooman kasvaimen vieressä hyvänlaatuisen eturauhasen epiteelin (TINT epiteelin) ja kasvaimen vieressä ei-pahanlaatuinen kasvain stroman (TINT strooman ) ja liittyvät LOX ilmaisun eri osastojen histopatologisesti ja kliinisiä parametrejä sekä lopputuloksen historiallisessa kohortissa eturauhassyövän hallinnoi valpas odottaa (ks [12] lisätietoja). Yhteenvetona toteamme, että LOX värjäytyminen pisteet eturauhasen TINT epiteelin ennustaa eturauhassyövän erityinen selviytymisen ja antoi lisäaine prognostiset tietoja GS.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat

LOX värjäys pisteet (katso jäljempänä) analysoitiin kudosnäytteiden kerätty miehiä, jotka tehtiin höyläysleikkaus eturauhasen (TURP) vuosina 1975 ja 1991 ja missä histologinen analyysi osoitti läsnä eturauhassyövän (lisätietoja [7]). Tutkimus sisältää 351 miestä, joista 304 (mukaan lukien 265 laukauksellaan LOX) miehille ei ollut saanut mitään syöpähoidon ennen TURP ja seurattiin valpas odottaa. Keskimääräinen ikä diagnoosin oli 74 vuotta (51-95 vuotta) ja mediaani yleinen seuranta-ajan oli 5,2 vuotta (0-25,5 vuotta). Paikallinen kasvain vaihe määritettiin aikaan leikkauksen eturauhasen ja läsnäolo etäpesäkkeiden arvioitiin radio-nukleotidin luukuvaus. Ei imusolmuke lavastus suoritettiin ja seerumin PSA ei ollut käytettävissä aineisto kerättiin ennen PSA aikakauden. Kudoksesta kerätyt näytteet rakensimme kudossiruina (TMA), joka sisälsi 5-8 näytteet kasvainkudoksen (jokainen näyte, joka sisältää sekä kasvain epiteelin ja kasvaimen strooman) ja 4 näytettä ei-pahanlaatuinen kudos (jokainen näyte, joka sisältää sekä TINT epiteelin ja TINT strooman ) kustakin potilaan [7]. GS on arvioitava uudelleen, kun TMA on rakennettu ja materiaali on aiemmin analysoitu tekijöiden mahdollisten prognostisten merkitystä, kuten kasvaimen tilavuus, fosforyloidun AKT (Pakt) [6], hyaluronaani [9], fosforyloitu epidermaalisen kasvutekijän reseptori (pEGFR) [7], verisuonten tiheys, kasvainsolujen proliferaatiota [10] ja kertymistä eri tulehdussolujen [8, 12], ja nämä tiedot olivat nyt liittyvät nykyiseen LOX havainnot. Aineisto kerättiin Ruotsin määräysten mukaisesti samaan aikaan, kun tietoon perustuvan suostumuksen ei tarvittu. Tutkimuksen eettinen komitea Uumajan yliopistollisessa sairaalassa (Regional Ethical Review Board Uumajassa) hyväksyi tutkimuksen ja luopua tarvetta suostumusta. Potilaan tiedot nimettömiksi ja tunnistamattomiksi ennen analyysiä.

Lisäksi kudososat 10 eturauhassyövän potilailla, joille tehtiin eturauhasen vuonna 2012 tutkittiin LOX proteiinin ja mRNA: n ilmentymisen avulla immunohistokemia ja

in situ

hybridisaatio (katso seuraava kohta). Tutkimus hyväksyttiin alueellinen eettinen Review Board Uumajassa, ja kaikki potilaat kunhan kirjallinen lupa.

LOX Immunohistokemian ja

in situ

hybridisaatio, ja mRNA: n ilmentymisen

TMA ja eturauhasen näytteet värjättiin LOX automaattiset värjäyssysteemillä Ventana Benchmark Ultra (Ventana Medical Systems Inc.). Lyhyesti, neljä um parafiinileikkeillä esikäsiteltiin CC1 (Tris /boraatti /EDTA Buffer (pH 8,0), 64min, 95 ° C) antigeenin hakua ja värjättiin ensisijainen kanin polyklonaalinen vasta-aine LOX (Novus Biologicals, Littleton CO, USA , NB100-2530, laimennettu 1: 400). Näytteet visualisoitiin käyttämällä Ultraview Universal DAB tunnistus Kit (Ventana, Tucson AZ, USA). Ihmisen istukka käytettiin positiivisena kontrollina LOX, joka osoittaa positiivista värjäytymistä desiduassa ja trofoblastisolut. Osiot olivat digitoidaan ja analysoitiin Pannoramic katsoja 1.15.2 (3DHistech, Budapest, Unkari).

in situ

-hybridisaatio LOX mRNA havaitsemiseksi suoritettiin manuaalisesti RNAscope 2,0 FFPE Reagent Kit (Advanced Cell Diagnostics Inc., Hayward, CA, USA). Lyhyesti, neljä um FFPE kudosleikkeiden poistettiin parafiini ja esikäsiteltiin lämmöllä ja proteaasi seurasi inkubointi koetin kohdistaminen Hs-LOX 2 tunnin ajan 40 ° C: ssa. Esivahvistin, vahvistin, ja HRP-leimattuja oligonukleotideja hybridisoidaan sitten peräkkäin, jota seurasi kromogeenisen saostus kehityksen DAB. Lopuksi näytteet vastavärjättiin Meyers hematoksyliinillä ja analysoitiin Kirkas mikroskoopilla. Kukin näyte oli laatua valvotaan RNA eheyden kanssa RNAscope koettimella syklofiliinistä B (PPIB) RNA: n (positiivinen kontrolli) ja epäspesifinen tausta anturilla bakteeri dapB RNA (negatiivinen kontrolli). RNA värjäys signaali todettiin ruskea, välimerkkien pisteitä.

vastaavat tiedot LOX-mRNA-tasoja on yhdistetty näytteitä ensisijainen eturauhasen tuumorin ja viereisen ei-malignien eturauhasen kudosta (n = 12), ja kastraatio kestävä eturauhasen syöpä (CRPC) luumetastaasien näytteitä (n = 30), uutettiin aiemmin julkaistu tutkimukset olivat ihmisen HT12-v3 Illumina BeadChip geenin ilmentyminen array käytettiin mukaisesti valmistajan protokollan (Illumina, San Diego, CA, USA) ja, kuten aiemmin on kuvattu [39, 40].

pisteytys LOX immunoreaktiivisuus ja

in situ

-hybridisaatio

kasvain epiteelin, kasvain strooman TINT epiteelin ja TINT strooman tunnistettiin morfologinen ulkonäkö, ja LOX värjäytymisen intensiteetti ja leviämisen pisteytettiin erikseen näitä neljää eri osastoihin negatiivisina (0), heikko (1), kohtalainen (2), tai vahva (3). Vuonna TMA, LOX tulokset ovat mediaaniarvot viidestä kahdeksaan sai näytteitä kasvainkudoksen tai neljä sai näytteitä ei-pahanlaatuinen kudos kullekin potilaalle. Immunoreaktiivisuuden (LOX IR) pisteytettiin itsenäisesti kahdessa eri tutkijat (C. H., 351 potilasta ja M. N., 50 potilasta) ilman tietoa potilaan tietoja. LOX värjäytyminen havaittiin sytoplasmassa ja usein myös ytimet, mutta nämä kaksi osastoa ei sijoitettiin erikseen.

Lisäksi, LOX IR ja LOX-mRNA: n ekspressio teki edellä kuvatulla tavalla on kokonaisia ​​10 eturauhasen näytettä, mukaan lukien sekä kasvain- ja ei-pahanlaatuiset epiteelin ja strooman.

Hypoksia käsittely

in vitro

, RNA valmistelu ja kvantitatiivinen RT-PCR-analyysi

Eturauhasen epiteelisolujen (RWPE-1 ) ja strooman myofibroblasteja (WMPY-1, (ATCC, Manassas VA, USA) on johdettu perifeerinen vyöhyke histologisesti normaalin ihmisen eturauhasen viljeltiin mukaan valmistajan protokollan (ATCC). solut kasvatettiin 6-kuoppaisilla levyillä 37 ° C: ssa 24 tuntia hypoksian (1,0% O

2, 5% CO

2, 94% N

2) tai normoksia (21,0% O

2, 5% CO

2 , 74% N

2). Kuusi rinnakkaisnäytettä käytetään kokonais-RNA valmistettiin käyttämällä TRIzol mukainen menetelmä protokollan (Invitrogen). kokonais-RNA DNaasi-käsiteltiin (DNaasi 1, Ambion) poistamiseksi kontaminoivan DNA: n, ja 0,8 ug käytettiin cDNA: n synteesi mukaisesti valmistajan ohjeiden käyttäen Superscript II (Invitrogen). Reaaliaikaisen qRT-PCR suoritettiin käyttäen Applied Biosystems 7900HT Real-Time PCR System ja Taqman Gene Expression Assay (Applied Biosystems). Kvantifiointi mRNA teloitettiin 20 ui reaktiotilavuudessa 20 ng cDNA kohti reaktiota LOX (kaupallisesti saatavissa pohjamaali ja koetin mix, LOX, Hs00942480_m1, Applied Biosystems). Negatiiviset kontrollit rinnakkain, ja arvojen suhteen kullekin geeniä normalisoitiin käyttäen h18S, (Hs99999901_s1) referenssinä geeni ja analysoidaan Taqman Analysis Software SDS2.4 (Applied Biosystems).

Tilastot

bivariate korrelaatiot laskettiin Spearmanin rank korrelaatio testi. Korrelaatiot nimellinen muuttujien ja jatkuvia muuttujia analysoitiin käyttäen Kendallin tau b korrelaatio. Tietoja kerättiin aikaan eturauhassyövän diagnosointiin ja sisältävät kaikki potilaat tutkimuksessa. Potilaita seurattiin valpas odottaa sisällytettiin Kaplan-Meier selviytymisen analyysit ja Coxin regressioanalyysi. Kesto tapahtuma-elinaika (EFS) määritellään aika TURP asti eturauhassyövän kuolema, kuolema muista syistä, tai jos kuolema tapahtui, saakka Viimeisimmässä seurannassa. Erot tulos ryhmien välillä testattiin log-rank-testi. Prognostisia merkitystä LOX IR tutkittiin Coxin regressioanalyysiä yksin ja yhdessä GS. Todennäköisyys tapahtuma vapaa elinaika (P-EFS) esitetään ± keskivirhe keskiarvon (SEM). Intraclass Korrelaatioanalyysin käytettiin vahvistamaan kahden eri LOX scorings. Mann-Whitneyn U-testiä käytettiin vertailussa hypoksinen ja ohjaus käsiteltiin eturauhasen solujen, ja vertailu CRPC näytteitä ja ei-malignien eturauhasen /ensisijainen eturauhasen kasvaimia. Wilcoxonin Signed-riveissä testiä käytettiin vertailussa pariksi hyvänlaatuisen eturauhasen kudosta ja ensisijainen eturauhasen kasvaimia näytteitä. Merkitys oli vahvistettu 0,05. Tilastollinen analyysi suoritettiin SPSS 23.0 ohjelmistolla (SPSS Inc., Chicago, USA).

Tulokset

LOX ilmaisun pahanlaatuiset ja ei-pahanlaatuiset ihmisen eturauhasen kudosten

arvioida merkitystä LOX eturauhassyövässä, TMA lukien kasvainkudoksen ja kasvaimen vieressä hyvänlaatuisen eturauhasen kudosta (kudos ytimet näytteitä pistokokeina etäisyyksillä kasvainkudoksen) 351 eturauhassyövän potilailla, joilla on pitkä seurantaa analysoitiin ja tekee LOX immunohistokemia neljässä eri osastoissa; hyvänlaatuisen eturauhasen epiteelin (TINT epiteelin), hyvänlaatuisen eturauhasen strooman (TINT strooman), eturauhasen kasvain epiteelin ja eturauhasen kasvain strooman. Vuonna TINT epiteelin kohtalainen LOX immuuni värjäytyminen yleisesti havaittu pohjapinta epiteelisolujen kun luminal epiteelisolujen värjäytymistä vaihtelu potilaiden välillä ja laukoi lainkaan tai heikkoa värjäytymistä kohtalainen tai vahva (mediaani tilanne oli 2, Kuva 1A). LOX ilmentyminen TINT strooman havaittiin sileän lihaksen soluissa ja fibroblasteissa ja värjäys voimakkuus vaihteli potilaiden heikosta voimakkaaseen (mediaani pisteet 2,5, kuvio 1A). Kasvain epiteelisolut olivat yleensä myönteisiä ja värjäytymisen intensiteetti sekä kasvaimen epiteelin ja kasvaimen strooman vaihteli kasvaimet (mediaani pisteet 2 molempien sivustojen, tuloksia ei ole esitetty). LOX värjäys tulokset eri osastojen olivat kaikki korreloivat keskenään (tuloksia ei ole esitetty). Vahvin yhteyttä ei havaittu välillä LOX pisteet TINT epiteelin ja vastaava TINT strooman (

R = 0

.

50

,

p 0

.

001 ) B välillä kasvain epiteelin ja kasvaimen strooman (

R = 0

.

44

,

p 0

.

001

) . Mitata johdonmukaisuutta, kaksi tutkijaa sai LOX immuuni-reaktiivisuus itsenäisesti ja sisäisen luokan korrelaatio analyysi antoi Chronbach alfa 0,81 osoittaa voimassa pisteytys.

(A) edustaja immunohistokemiallisella värjäyksellä LOX (ruskea) kohdissa ei-pahanlaatuisen eturauhasen kudosnäytteitä (TINT epiteelin ja TINT strooman) kahdesta eturauhassyöpäpotilaalla (alkuperäinen suurennoksia x 200). Asia Show heikko epiteelin värjäytymistä (pisteet 1) ja Tapaus B vahva epiteelin värjäytymisen (pisteet 3). (B) Jatkuva osastoja hyvänlaatuisen eturauhasen kudosta värjättiin

in situ

hybridisaatio- tai immunohistokemiaa LOX. Huomaa, että mRNA (ruskeat pisteet) ja proteiini (ruskea) ilmentyminen yksittäisten rauhaset liittyivät, stroomaan toisin mRNA oli yleisesti alhainen, mutta proteiini havaitaan usein (alkuperäinen suurennoksilla x200). (C) LOX mRNA: n ekspression hyvänlaatuisen eturauhasen kudoksen (TINT) (n = 12), alku- eturauhasen kasvainkudoksessa (n = 12) ja kastraatio kestävä etäpesäkkeitä luustossa (CRPC) (n = 30) käyttäen Illumina geeniä ilmaisun array.

tutkia sijainti LOX tuotannon eturauhasen käytimme

in situ

hybridisaatio. Koska TMA materiaali oli liian vanha tähän määritystä, tutkimme ja sai LOX immuuni värjäystä ja LOX mRNA ilmaisun indeksi 10 eturauhasen näytettä ( 3-vuotias materiaalia). LOX-proteiinin ilmentyminen radikaali prostatectomies oli samanlainen kuin värjäytyminen on TMA esittää muuttujan värjäytymisen intensiteetti sekä normaalissa ja kasvaimen epiteelin ja strooman soluja (kuvio 1 B). LOX-mRNA ilmentyy pääasiassa luminaalisessa eturauhasen epiteelisolut ja tuumorisoluissa, joilla on vähän positiivisia soluja ei-pahanlaatuinen ja pahanlaatuinen eturauhas- strooman, joka osoittaa, että LOX on pääasiassa peräisin eturauhasen epiteeli- ja kasvainsolujen (kuvio 1B). Lisäksi LOX mRNA ilmaisu indeksi epiteelisolujen korreloi LOX värjäys pisteet (

R

S

=

0

.

70

,

p 0

.

05

).

Olemme aiemmin tutkineet transcriptome eturauhasen kasvain kudoksen radikaali prostatectomies, ei-pahanlaatuinen eturauhasessa samalla potilaiden (otokseen 0,5-3 cm lähimmästä kasvainkeskusten, mediaani etäisyys 1 cm) ja kastraatio kestävä (CRPC) luuetäpesäkkeistä erillisten potilaista [39, 40]. Näiden näytteiden transkriptio taso LOX mRNA oli samankaltainen kuin pahanlaatuinen ja pahanlaatuinen ensisijainen kasvainkudoksen (kuvio 1 C). Kuitenkin LOX mRNA-tasot olivat merkitsevästi korkeammat CRPC luuetäpesäkkeistä pitoisuuksiin verrattuna ensisijainen eturauhasen kasvaimia (kuvio 1 C). LOX mRNA tasot hyvänlaatuisen eturauhasen kudosta näytti liity etäisyys kasvain (tuloksia ei esitetä) mukaisia ​​tuloksia alla osoittavat, että LOX värjäytymistä TINT epiteelin valvovan-odottamassa kohortti vain marginaalisesti liittyvät kasvaimen vaiheesta (ja siis läheisesti liittyvät kasvaimen koon ja keskimääräinen etäisyys lähimpään kasvain).

LOX immunoreaktiivisuus liittyy merkkiaineiden kasvaimen aggressiivisuus

Analyysit suoritettiin selvittämään mahdollisia assosiaatioita LOX ilmaisun neljästä eri eturauhasessa osastoja kliinisten parametrien ja histologisia ominaisuuksia kasvain. LOX pisteet kasvaimen epiteelin positiivisessa yhteydessä GS, kasvain vaiheessa läsnäolo etäpesäkkeitä diagnoosin, kasvaimen mikroverisuonitiheys ja kasvaimen leviämisen (taulukko 1). LOX pisteet TINT epiteelissä korreloi kasvaimen vaiheen ja kasvaimen ja ei-pahanlaatuiset mikroverisuonitiheys (taulukko 1). Kuitenkin LOX pisteet kasvaimen strooman ja TINT strooman näytti liity näiden kasvainten ominaisuuksiin (tuloksia ei ole esitetty).

Lisäksi selvitimme jos LOX pisteet liittyi muiden tekijöiden havaittu kasvain ja TINT kudos, joka liittyvät potilaan eloonjäämisen [6-9]. Kasvain epiteelin LOX pisteet korreloi positiivisesti pEGFR IR sekä kasvaimen ja TINT epiteelin sekä Hyaluronaani kasvaimen ja TINT strooman. Kasvain epiteelin LOX pisteet positiivisesti myös korreloi Pakt vuonna TINT epiteelin (taulukko 1). LOX IR TINT epiteelissä korreloi positiivisesti ja pEGFR ja Pakt sekä kasvaimen ja TINT epiteelin (taulukko 1). Tämä viittaa romaanin suhteita LOX ilmentymistä kasvain ja eturauhasen TINT epiteelin ja nämä tekijät. Syöttösoluja ja S100A9 positiivisia makrofageja ei osoittanut korrelaatiota LOX IR (tuloksia ei ole esitetty).

LOX immunoreaktiivisuus eturauhasen TINT epiteelin ennustaa syövän erityinen selviytymisen

Potilaat, joilla on korkea LOX ilme (≥ mediaaniarvon 2.0) in TINT epiteelissä oli merkittävästi vähentynyt syövän erityinen selviytymisen verrattuna muuhun (15 vuoden todennäköisyys tapahtuman elinaika (P-EFS) oli 58 ± 5% ja 81 ± 8% molemmissa ryhmissä; kuvio 2). Lisäksi suuri sävy epiteelin LOX tilanne oli liittyy suurentunut suhteellinen riski eturauhassyövän erityinen kuoliaaksi univariate Coxin regressioanalyysiä (taulukko 2). Lisäksi LOX IR TINT epiteelin antoi lisäaine ennustetekijöiden tietoja GS monimuuttuja Coxin regressioanalyysiä (taulukko 2). Ei ollut merkittäviä suhteita elossaololuku ja LOX IR kasvaimen epiteelin, kasvaimen strooman tai TINT stroman (tuloksia ei ole esitetty).

Potilaat jaettiin kahteen ryhmään sen mukaan, LOX immunoreaktiivisuus (IR) ei-pahanlaatuinen luminal epiteelin eturauhasen kudoksen (TINT epiteelin).

Hypoksia ylössäätelee LOX ei-pahanlaatuisten eturauhasen solujen

in vitro

LOX ilmaus on osoittanut säänneltävä hypoksia [18, 41] ja istutuksen syöpäsolujen indusoiman hypoksian ei-pahanlaatuinen osat kasvain eturauhasen lohko rotilla [17]. Hypoksia voisi siis olla yksi selitys suuren LOX ilmaisua nähdään kuin pahanlaatuinen eturauhasen epiteelin joidenkin eturauhassyövän potilailla hypoksia on yleinen epiteelin osastoissa hyvänlaatuisen ja pahanlaatuisen ihmisen eturauhasessa [42]. Tämän mukaisesti osoitamme, että ihmisen eturauhasen epiteelin (RWPE-1) ja strooman myofibroblastin (WPMY-1) solua inkuboidaan hypoksia 24 tuntia

in vitro

oli merkittävästi korkeammat LOX mRNA-tasot verrattuna normoxic valvontaa (kuvio 3). Suuruus LOX up-asetus oli korkein RWPE-1-soluja (11-kertainen vs. 2-kertaisesti WPMY-1). Tämä viittaa siihen, että hypoksia saattaa säätää ylös LOX ilmentymisen normaalissa eturauhasessa epiteelin ja strooman.

Suhteellinen LOX mRNA: n ekspression ihmisen eturauhasen epiteelisoluissa (RWPE-1) ja ihmisen eturauhasen strooman myofibroblasteja (WPMY-1) kasvatettiin

in vitro

in normoxic tai hypoksinen olosuhteissa 24 tuntia. Arvot ovat keskiarvoja ± SEM, **

p

0.01.

Keskustelu

Aikaisemmat tutkimukset rottamallissa ehdotti, että läsnä on eturauhassyövän lisääntynyt LOX ilmaisua paitsi kasvain, mutta myös muualla kasvainta kantavaan eturauhanen lobe [17]. Tarkoituksena oli selvittää siis tutkia, jos tämä voisi olla tilanne myös potilailla. Tämä näytti olevan asian ja korkea LOX kasvaimen läheisellä hyvänlaatuisen eturauhasen epiteelin (TINT epiteelin) liittyi lyhyempi syöpään erityisiä selviytymisen eturauhassyöpäpotilailla. Lisäksi LOX pisteet eturauhasen TINT epiteelin antoi lisäaine ennustetekijöiden tietoja GS. Meillä on eläinmalleissa aiemmin osoittaneet, että adaptiivista tapahtuu muutoksia ympäröivässä kasvain elin ja että tällaiset muutokset voidaan ennustaa eturauhassyöpien potilailla [2, 5-10, 13]. Täällä näytämme, että LOX pisteet eturauhasen TINT epiteelissä korreloi monet tekijät aiemmin tutkittu TINT epiteelin (pEGFR, Pakt) ja TINT stroman (mikroverisuonitiheys) ja osoitettu liittyvän kasvaimen aggressiivisuus ja lopputulos [6-8, 10].

Seerumin PSA-tasoihin ja Gleason pisteytys kasvaimen sisältävän koepaloja on syistä johdannossa, rajallinen kyky ennustaa kasvaimen käyttäytymisen useimmissa uusien diagnosoitujen tapausten [1]. Näin ollen ylimääräisiä diagnostisia ja ennustetekijöitä markkereita, esimerkiksi ympäröivään normaalissa eturauhasessa kudos voisi siten olla hyötyä, erityisesti hyvänlaatuisen eturauhasen on aina näytteitä eturauhasen koepaloja [2, 4]. Tutkimuksemme osoittaa, että LOX ilmaisun epiteelin ei-pahanlaatuinen osa kasvain elin voisi jos validoitu lisätutkimuksissa toimii riippumattomana prognostinen markkeri eturauhassyövän. Kuitenkin verrattuna pEGFR [7] ja Pakt [6] LOX värjäytymistä TINT on ilmeisesti vähemmän tietoa.

Lisäksi ja linjassa joidenkin aikaisempien raporttien [34, 35] osoitamme, että LOX-IR eturauhasessa kasvain epiteelin korreloi useita kliinisiä tekijöitä, jotka liittyvät kasvaimen aggressiivisuus kuten GS, kasvain vaiheessa mikroverisuonitiheys, kasvaimen leviämisen ja etäpesäkkeitä. Novel suhteita LOX ilmentymistä kasvain epiteelin ja pEGFR, Pakt ja hyaluronaaniin löydettiin myös. Hyaluronaani hiljattain ehdotettu toimia indusoi LOX ilmentymisen rintasyövän soluja, jotka voivat selittää positiivinen korrelaatio LOX IR kasvainsoluissa epiteelisolujen [43].

Ren et ai. osoittivat, että LOX-mRNA ekspressoituu pääasiassa normaaleissa ihmisen ja hiiren eturauhasen epiteelisolujen melko pienet ilmaistu eturauhasen strooman [36]. Tämä ja havainto meidän

in situ

hybridisaatio osoittaa, että LOX pääasiassa eturauhasen tuottama epiteelin. Muut geenin ilmentymisen tutkimukset ovat osoittaneet, että LOX on ilmaistu sekä normaalissa eturauhasessa epiteelin ja strooman [37]. Mukaisesti näissä tutkimuksissa osoitamme, että LOX proteiinia löytyy sekä ihmisen eturauhasen hyvänlaatuisen epiteelin ja strooman mutta tasot LOX vaihteli potilailla. Yksi syy korkeampiin LOX tasot eturauhasessa TINT voisi olla, että kasvain, jonka mekanismeja ei tunneta, indusoi LOX ilmentyminen hyvänlaatuisen eturauhasen soluja. Tätä tukee myös havainto, että potilaalle tehdä rotan eturauhaskasvainsoluissa istuttaa eturauhasen rottien lisännyt ilmentymistä LOX mRNA TINT verrattuna kasvaimettomina kontrollikudoksen [17].

Olemme äskettäin osoittaneet, että rotta eturauhasen TINT kudoksen geeni-ilmentymisen kuvio on tunnusomaista prosesseihin, kuten tulehdus, transformoiva kasvutekijä-β (TGF-β) signalointia ja hypoksia [17]. Implantaation syöpäsolujen rotan eturauhasen indusoi myös hypoksian, kuten on esitetty pimonidatsoli värjäys, ei-pahanlaatuinen osat kasvain eturauhasen lohko [17]. Me täällä osoittaa, että hypoksia merkittävästi sääteli LOX mRNA: n ekspression ihmisen eturauhasen epiteelisolujen ja eturauhasen myofibroblasteja

in vitro

, ja ihmisen eturauhasessa (sekä kasvain ja ympäröivä normaali) on yleensä hypoksinen [42]. Hypoksia voisi siten selittää lisääntynyt LOX tasot TINT ja että kohonneet LOX on seurausta kasvaimen muodostumisen. Tuore tutkimus Cox et al. syytöksiä että hypoksinen rintasyövistä erittää LOX, joka myöhemmin aiheuttaa ennalta metastaattinen luuleesioita [22]. Täällä LOX pisteet kasvaimen epiteelisolujen todettiin liittyvän luuetäpesäkkeistä ja LOX pisteet TINT epiteelin selviytymiseen, mikä viittaa siihen, että LOX erittyy kasvain ja tärkeämpää myös ei-pahanlaatuinen osat kasvain eturauhasen voisi osallistua pre-metastasoitunut kapealla muodostumista myös eturauhassyövässä. Lisätutkimuksia tarvitaan selvittämään tätä mahdollisuutta ja suhteellinen merkitys kasvaimen vs. TINT erittyy LOX. Jos oletetaan, että ei-pahanlaatuinen osat kasvain eturauhasen voisi olla merkittävä tekijä tukee myös havainto, että LOX mRNA-tasot ovat samanlaisia ​​ihmisen eturauhasen kasvaimissa ja viereisen ei-malignien eturauhasen kudosta [39, 40].

TGF-β on osoitettu muiden upregulate LOX eturauhasessa ja rintasyöpäsoluja [36, 44] ja aggressiivinen syöpäsolujen ilmentää enemmän TGF-β kuin veltto kasvaimia ja korkean TGF-β ilmentyminen kasvainsoluissa epiteelisolujen on liittyvä huono tulos meidän kohortissa eturauhassyöpäpotilaalla [45]. TGF-β stimulaatio normaalin eturauhasen epiteelin voisi siis johtaa lisääntyneeseen LOX ilmaisun ja saattavat selittää joitakin lisääntynyt LOX in TINT. Lisäksi positiivinen korrelaatio LOX kanssa pEGFR ja Pakt viittaavat siihen, että lisääntynyt LOX ilmentyminen on kytketty eturauhasen epiteelisolujen aktivoitumisen. Lisätutkimuksia tarvitaan selvittämään miten eturauhasen kasvaimet voivat stimuloida hyvänlaatuisen eturauhasen solujen lisäämään LOX ilmaisua.

Tämä tutkimus osoittaa, että korkea LOX synteesiä kasvain epiteelin ja epiteelin solujen kasvain elin voi stimuloida eturauhasen kasvaimen kasvua ja leviämistä. Tämä havainto on linjassa useiden muiden tutkimusten lueteltu johdannossa. Jotkut tutkimukset kuitenkin viittaavat siihen, että LOX voisi myös olla inhiboiva ja asteittainen menetys LOX nähdään eturauhassyöpäetäpesäkkeet [36], mutta ei nykyinen. Kokeellisessa tutkimuksessa käytimme LOX-estäjä (BAPN) rotilla on implantoitu eturauhasen kasvaimia, ja totesi, että LOX todennäköisesti stimuloi aikaisin kasvaimen kasvua ja päinvastoin olla inhiboiva on jo kasvainten (Nilsson et al., Julkaisematon).