Krooninen sairaus

tiivistelmä

MicroRNA-135a (miR-135a) alas moduloi parametrit syövän etenemiseen ja sen ilmentyminen on vähentynyt metastasoituneen rintasyövistä (verrattuna ei-etäpesäkkeitä) sekä eturauhaskasvaimissa suhteellisen normaalin kudoksen. Nämä ilme ja toiminta kuviot ovat päinvastainen kuin estrogeenin-reseptori α (ERRα), orpo jäsen ytimen reseptorin perhe. Todellakin korkea ilmentyminen ERRα korreloi huonon ennusteen rinta- ja eturauhasen syöpiä, ja reseptori edistää eri piirteitä syöpä aggressiivisuus myös solujen invaasiota. Tässä osoitamme, että miR-135a alas-säätelee ilmentymistä ERRα erityisillä sekvenssit sen 3’UTR. Tämän seurauksena miR-135a vähentää myös ilmentymisen alavirtaan tavoitteet ERRα. miR-135a vähentää myös solujen invasiivisia liittyvää potentiaalia ERRα riippuvaisella tavalla. Tuloksemme viittaavat siihen, että vähentynyt ilmentyminen miR-135a in etäpesäkkeitä johtaa kohonnut ERRα ilmentymistä, mikä lisää solujen invaasiota kapasiteettia.

Citation: Tribollet V, Barenton B, Kroiss A, Vincent S, Zhang L, Forcet C, et ai. (2016) miR-135a Estää Invasion syöpäsolujen kautta vastustamisesta ERRα. PLoS ONE 11 (5): e0156445. doi: 10,1371 /journal.pone.0156445

Editor: Franky L. Chan, Kiinan University of Hong Kong, HONGKONG

vastaanotettu: 28 tammikuu 2016; Hyväksytty: 13 toukokuu 2016; Julkaistu: toukokuu 26, 2016

Copyright: © 2016 Tribollet et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Tietopaketti.

Rahoitus: Tämä työ rahoittivat Ligue contre le Cancer (comités Puy-de-Dôme https://www.ligue-cancer.net/cd63/journal ja Drôme https://www.ligue-cancer.net/cd26/journal) ja JS ja JMV. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Jean-Marc Vanacker on PLoS One toimitusneuvoston jäsen. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen PLoS One Pääkirjoitus politiikan ja kriteerit.

Johdanto

MikroRNA (Mirs) ovat pieniä ei-koodaavat RNA: t, jotka kautta niin sanottu ”siemen box” sitoutuvat tiettyihin komplementtijaksoja 3’UTR kohde- mRNA: iden ja aiheuttaa niiden hajoamisen tai estää käännös koodatun proteiinin [1]. Koska lyhyt koko mRNA sitovan alueen Mirs ja koska epätäydellinen miR sitoutuminen on joissain tapauksissa riittävät indusoimaan mRNA asetuksen yksittäisen miR voi toimia useita mRNA: t. Tämä nostaa esiin mahdollisuuden, että koko polku /prosessi voidaan ohjata useilla eri tasoilla läpi yhden miR. Mirs voi edistää tai tukahduttaa syövän aloittamista tai etenemisen, ja sääntelyn purkaminen niiden ilme on yhteinen piirre näissä prosesseissa [2-5]. Ihmisen miR-135a koodaa kaksi geeniä lokalisoitu eri kromosomeissa (3 ja 12 miR-135a1 ja miR-135a2, vastaavasti), tuottavat identtisen, aktiivinen järjestyksessä. Ristiriitaisia ​​tuloksia on julkaistu vaikutuksia koskevat miR-135a syövän etenemiseen. Raportit todellakin osoittavat, että tämä microRNA voisi edistää tai tukahduttaa erilaisia ​​liittyvien piirteiden kasvaimen aggressiivisuus kuten proliferaatiota muuttoliikettä ja invaasiota paksusuolen, melanooma, rinta- tai eturauhassyövän solulinjoissa [6-12]. Kuitenkin on osoitettu, että miR-135a ilmentyminen on voimakkaasti vähentynyt metastaattisen rintasyövän kasvaimia (verrattuna ei-metastaattinen syöpä, [10]), samoin kuin eturauhasen kasvaimissa verrattuna normaalissa kudoksessa [11], mikä viittaa siihen, että ainakin näihin kasvaimen tyyppejä, miR-135a ehkäisee syövän etenemistä. Tässä suhteessa uudelleen ilmentyminen miR-135a ei-ilmentävien solujen vähentää niiden hyökkäyksen mahdollisuudet. Ainakin kolme molekyylitason mekanismeja on ehdotettu selittämään tämän vähennyksen. Riippuen tutkimuksen ja matkapuhelinverkon malli, miR-135a on todellakin osoitettu vähentävän ilmaisua FAK, Runx2 ja ROCK1 /2, kaikki asetukset, jotka alentaa solujen invaasion [9-11].

Estrogeeni-reseptori α (

ESRRA

, jäljempänä ERRα) on jäsen tumareseptorisuperperheen. Sellaisena se näyttää konservoitunut keskeisellä paikalla DNA: ta sitovan domeenin sekä C-terminaalisesti sijaitseva otaksutun ligandia sitovan domeenin, joka koskettaa co-aktivaattoreita, ja on tarpeen transkription aktivaation [13]. Ei kuitenkaan luonnollinen ligandi ERRα on tunnistettu tähän mennessä. ERRα siis kutsutaan ”orpo” reseptori ja aktivoi transkriptiota sen kohdegeenien näennäinen ligandista riippumattomalla tavalla. ERRα säätelee useita fysiopatologisten prosessit

in vivo

kuten osteoblastien erilaistuminen ja luun muodostus (tarkistetaan [14]), luontaisen immuniteetin [15-16] ja energia-aineenvaihdunnan (tarkistetaan [17-18]). Lisäksi korkea ERRα ilmentyminen syövissä korreloi huonon ennusteen eri syöpätyyppejä ([19-25], tarkistetaan [26-28]). Johdonmukaisesti, ERRα on osoitettu edistävän useiden ominaisuuksia syövän etenemisen, jotka vaihtelevat leviämisen [29-30], epithelio-mesenkymaalitransitioon [31], kestävyys hypoksia [32], angiogeneesin [33], metabolinen kytkin aerobinen Glykolyysivaiheen [34 -35], solujen vaeltamiseen ja invaasiota [36-37]. ERRα lisää soluinvaasiota läpi ainakin kaksi molekyylitason mekanismeja. Toisaalta reseptori todellakin aktivoi Wnt11 kaskadi, toisessa kädessä, ERRα epäsuorasti hienosäätää RhoA vakautta tasolle, joka on sopiva Orientated solujen vaeltamiseen ja invaasiota.

Tässä osoitamme, että uudelleen käyttöönotto Mir-135a ei-ilmentävien solujen tuloksia alas-säätely ERRα ilmentymisen mRNA ja proteiini tasoilla. Tämä tapahtuu kautta 3’UTR sekvenssit, jotka ovat komplementaarisia miR-135a siemen box. Johdonmukaisesti, ilmentyminen ERRα kohdistuu geenien moduloidaan miR-135 käytettäessä ERRα-riippuvaisella tavalla. Lisäksi miR-135a yli-ilmentyminen vähentää hyökkäystä valmiuksia MDA-MB231 ja PC3-solujen (ihmisen rintarauhasen ja eturauhasen karsinoomasoluja, vastaavasti). Sen tilavuus voidaan pelastaa uudelleen ilmaisuksi ERRα rakenteen, joka ei ole kohdistettu miR-135a. Kaikkiaan tämä viittaa ERRα vaihtoehtona miR-135a tavoite osallisena säätelyssä soluinvaasiota.

Materiaalit ja menetelmät

Solut ja reagenssit

MDA-MB231 (ihmisen nisäepiteelisoluissa) ja PC3 (ihmisen eturauhasen soluja) kasvatettiin Dulbeccon modifioidussa Eaglen väliaineessa (Invitrogen), jota oli täydennetty 10% vasikan sikiön seerumia, 10 U /ml penisilliiniä, 10 ug /ml streptomysiiniä. LNCaP (ihmisen eturauhasen solu-) kasvatettiin RPMI (Invitrogen), johon samalla tavalla. Soluja pidettiin kosteutetussa 5% CO 2-ilmakehässä 37 ° C: ssa. siRNA: t ja miRNA vietiin soluihin käyttäen Interferine (Ozyme) tai Lipofectamine 2000 (Thermo Fisher), vastaavasti, sen jälkeen, kun valmistajan ohjeiden mukaisesti. ERRα siRNA (sekvenssit S1 Table) olivat Invitrogen (siERRα # 1) ja Dharmacon (siERRα # 2). Pre-miRNA (PM11126 Mir-135a; miR negatiivinen kontrolli n ° 2) olivat Ambion.

Expression Analysis

Yhteensä-RNA: t uutettiin guanidiniumtiosyanaattiuutolla /fenoli /kloroformilla ja muunnetaan ensin juosteen cDNA käyttäen IScript cDNA synteesi kit (Biorad). Reaaliaikainen PCR suoritettiin 96-kuoppaisen levyn käyttämällä IQ SYBR Green Supermixiä (Biorad). Aineisto suuruutta kuvataan ΔΔ-Ct menetelmä ja normalisoidaan RPLP0 (36b4) mRNA. Alukkeiden sekvenssit, joita käytetään tässä tutkimuksessa on esitetty S1 taulukossa.

western blot-analyysi, solut lyysattiin RIPA-puskuriin. Proteiineja (50 ug) erotettiin 10% SDS-PAGE, blotattiin PVDF (Millipore), testattiin spesifisten vasta-aineiden kyllästyksen jälkeen ja kävi ilmi, käytetään parannettua kemiluminesenssidetektiojärjestelmää (ECL kit, Amersham Biosciences) ja asianmukaisia ​​spesifisiä peroksidaasilla konjugoitua Abs. Vasta-aineet olivat Gentex (ERRα, GTX108166), Enzo (hsp90, ADI-SPA-830) ja Sigma (Flag, F-3165).

Plasmidit ja Lusiferaasimäärityksiä

pSG5Flag-AA /B-ERRα on kuvattu muualla [38]. Jaksot ESRRA (koodaa ERRα) 3’UTR jotka täydentävät miR-135a siemen box ennustettiin käyttämällä TargetScan (https://www.targetscan.org), PicTar (https://pictar.mdc-berlin.de) ja Miranda MiRBase (https://microrna.sanger.ac.uk) on-line saatavilla olevista ohjelmista. 400 emäsparin fragmentti, ihmisen ESRRA 3’UTR sisältää sekä ennustettu komplementaariset sekvenssit kloonattiin PCR: llä käyttämällä MDA-MB231-peräisin retro- transskriboidun mRNA ja alukkeita reunustaa Xhol ja Sali-restriktiokohdat. Täydentävät sekvenssit mutatoitiin yhdistelmä PCR. Tarkastuksen jälkeen sekvensointi, villin tyypin ja mutatoidut fragmentit kloonattiin pmiRGLO dual ekspressiovektoriin (Promega), kuten Xhol-Sall lisää myötävirtaan tulikärpäsen lusiferaasi reportteri-sekvenssin. Oligonukleotidien sekvenssit, joita käytetään mutageneesi ovat saatavilla S1 Taulukko.

lyhytaikaisissa transfektioissa, 10

5 MDA-MB231-solut ympättiin 24-kuoppalevyille ja transfektoitiin käyttämällä Lipofectamine 2000, 50 ng pmiRGLO plasmidi ja osoitettu määrä valmiiksi miR. Solut hajotettiin 48 tuntia transfektion jälkeen ja toimittaja toimintaa (renilla ja Firefly lusiferaaseista) määritettiin käyttäen standardimenetelmiä.

Invasion Analyysit

invaasio määrityksiä, soluja (5. 10

4) suspendoitiin 200 ul DMEM /2% FCS ja ympätään päälle Matrigel invaasion kammioiden (Corning). Solujen annettiin kulkeutua kohti alempaa kammioon, joka sisältää DMEM /10% FCS: ää 48 tunnin ajan. Matrigel poistettiin käyttäen vanupuikkoja ja solut kiinnitettiin 1 h 4% formaldehydiä, värjätty 0,1% kristalliviolettia ja microphotographed. Tunkeutuvat solut laskettiin koko hyvin Image J.

Tilastollinen analyysi

Tilastollinen merkittävyys määritettiin käyttämällä Studentin t-testejä ryhmien välillä.

Tulokset

miR-135a Vähennykset ERRα Expression

aikana aikaisemmassa tutkimuksessa, seuraukset ennalta miR-135a yli-ilmentyminen LNCaP ihmisen eturauhasen syöpäsolujen analysoitiin kannalta solun geenin ilmentymisen käyttäen mikro-array lähestymistapa [11]. Havaittiin, että ekspressio ERRα orpo tumareseptori on vähentynyt, kun tällainen hoito. Validoida Näiden tulosten me transfektoitu tilapäisesti ennalta miR-135a LNCaP-soluissa ja analysoitiin ilmentymistä ERRα proteiinin (kuvio 1a). Olemme havainneet, että taso tämän reseptorin on vähennettävä mahdollisimman nopeasti 24 h transfektion jälkeen, vaikutus, joka säilyi (vaikkakin vähäisemmässä määrin) 48 tuntia. Samanlaisia ​​tuloksia saatiin myös MDA-MB231 ihmisen rintakarsinooma soluja. ERRα-vastaava mRNA pienensi myös 24h ja 48h transfektion sekä LNCaP ja MDA-MB231-soluissa, kuten on päätelty reaaliaikainen PCR-kokeet (kuvio 1 b), mikä viittaa siihen suora vaikutus mRNA.

ilmoitetaan solut transfektoitiin pre-miR-135a tai pre-miR ohjaus (-) ja ilmoitetun ajan. a. Expression of ilmoitettu proteiinien määritetään Western blot. Hsp90 käytettiin latauskontrollina. Kvantifiointi ERRα proteiinin ilmentymisen (alla näkyy blotit) on ilmaistu suhteessa että hsp90, käytetään latauskontrollina. b. Expression of ERRα vastaavan mRNA analysoitiin reaaliaikaisella PCR: llä. Tiedot esitetään suhteessa ennalta miR vertailunäytteet sekä ilmaistu suhteessa ilmentymisen RPLP0. Kuviossa esitetään keskiarvo kokeista suoritettiin kolme kertaa. Virheet pylväät osoittavat SEM. ***:

p

0,005.

Analysoimme ihmisen ERRα mRNA microRNA tunnustamista motiivit käyttäen kolme itsenäistä ennustusohjelmia (TargetScan, PicTar ja Miranda), joka saatiin identtiset tuloksia. Kaksi mahdollista täydentävää sekvenssit miR-135a tunnistettiin 3’UTR korkein (8-meeri) sitovia todennäköisyys (kuvio 2a). Huomionarvoista sekvenssi sekä asema näiden kahden sivustot ovat erittäin konservoituneita nisäkkäillä, mutta ei lintuja ja sammakkoeläimet, jos tällaista vastaavaa sekvenssi voitiin tunnistaa. Sen määrittämiseksi, ovatko nämä täydentävät sekvenssit ovat toimintakykyisiä miR-135a tunnustamista, 400 emäsparin fragmentti 3’UTR (mukaan lukien sekä mahdollisten sekvenssit) kloonattiin alavirtaan lusiferaasireportterigeenillä osaksi pmiRGLO plasmidiin. Jokainen komplementaarinen sekvenssi Sitten mutatoitunut yksin tai yhdessä. Tuloksena syntyneiden rakenteiden transfektoitiin MDA-MB231-solujen kanssa esi-miR-135 (kuvio 2b). Villityypin ERRα-peräinen fragmentti siirrettävä miR-135a herkkyyttä, mikä johtaa 50%: n lasku reportteri toimintaa. Tämä vaikutus poistetaan heti mutaatio komplementaarisen sekvenssin 2, mutta ei komplementaarinen sekvenssi 1. Tämä viittaa vahvasti suora vaikutus miR-135a on 3’UTR ERRα, erityisesti komplementaarisen sekvenssin 2, mikä laski tasolle vastaavan mRNA ja proteiini.

a. Täydentävät sekvenssit 1 ja 2 (isoilla kirjaimilla) on ERRα 3’UTR näytetään osoitettujen lajien (

Homo sapiens

,

Mus musculus

,

Bos taurus

ja

Felis silvestris

) ja rinnastaa miR-135a järjestyksessä. Kanta ensimmäisen nukleotidin kunkin komplementaarisen sekvenssin (cs 1 ja 2) on merkitty suhteessa ensimmäiseen 3’UTR nukleotidin suhteessa ihmisen mRNA start (alle suluissa). Nukleotidit lihavoitu poistettiin vastaavassa mutantteja. b. Järjestelmä on luotu mutantteja pmiR-GLO on kuvattu ylhäällä. MDA-MB231-solut transfektoitiin lyhytaikaisesti vastaavan pmiR-GLO johdannaisia ​​yhdessä osoitettu pitoisuus on pre-miR-135a. Lusiferaasiaktiivisuudet määritettiin 48 h transfektion jälkeen ja tulikärpäsen lusiferaasi-aktiivisuus oli normalisoitu Renillan lusiferaasin. Tulokset on esitetty kunkin plasmidin prosentteina suhteessa transfektion ennalta miR ohjaus ja edustavat keskiarvoa kolmesta itsenäisestä kokeesta. Virheet baareja merkitty SEM. **:

p

0,01, ***:

p

0,005.

miR-135a Säätelee ERRα Molecular and Cellular aktiviteetit

arvioidaan sitä tämän asetuksen, tutkimme onko toimintoja ERRα voidaan vaikuttaa miR-135a. ERRα toimii transkriptiotekijän ja sen tavoitteet geenien MDA-MB231-soluissa on aikaisemmin tunnistettu kautta transcriptomic RNA-sekvensoinnilla lähestymistapa [37]. Me perusteltu, että miR-135a yliekspressio, joka johtaa vähentyneeseen ERRα tasolle, pitäisi myös johtaa vapauttamisen ilmentymistä näiden kohdegeenien. Tämä hypoteesi tutkittiin yhdeksän valitun geenin, jotka ovat, mukaan meidän transcriptomic lähestymistapaan, joko positiivisesti (DHX33, GDAP1, RAB39A, RAPGEF5, TMEM198 ja TNFAIP1) tai kielteisesti (PDGFRB, RRAS, CEACAM1) säätelee ERRα. Mikä tärkeintä, nämä geenit valittiin, koska niitä ei ole ennakoitavissa suoraan miR-135a tavoitteita, mukaan TargetScan on-line-ohjelma. Jossa käytetään kahta eri siRNA vastaan ​​reseptori, ensin todentaa, että näiden geenien ilmentymistä on vapautettu puuttuessa ERRα (kuvio 3a). Sitten analysoimme mRNA-tasolla näiden ERRα tavoitteiden upon miR-135a yli-ilmentymisen. Kuten esitetään kuviossa 3b näiden geenien ilmentymistä oli aikariippuvainen säädellään transfektoimalla ennalta miR-135a. Huomattavaa on, että kaikki miR-135a aiheuttama sääntelyn purkaminen olivat samansuuntaisia ​​kuin aiheuttama suoraan kohdistaminen ERRα. Tämä vahvistaa edelleen hypoteesia, että vaikutus miR-135a seuraavilla geeneistä on ERRα välittämää. Analysoimme myös ilmentymisen neljästä geenistä (ROCK1, ROCK2, PTK2 ja SMAD5) raportoidaan miR-135a kohdistu suoraa kirjallisuudessa [10-11, 39]. Kuten odotettua, näiden geenien ilmentymistä on aikariippuvainen vähentää, kun ennalta miR-135 yliekspressio (kuvio 3c). Kuitenkaan mikään näistä neljästä geenistä näkyvät vapautettiin ilman ERRα, kuten odotetaan myös RNA-sekvensoinnilla tiedot (kuvio 3c ja [37]). Sitten käytimme pelastus lähestymistapa kyseenalaistaa mahdollisuutta ERRα riippuvaisen vaikutuksen miR-135a. Tätä varten solut transfektoitiin jonka miR-135a matkivat täydennetty tai jota ERRα rakenteen, joka ei käsitä luonnollista 3’UTR (

i

.

e

. Ilman miR-135a komplementaariset sekvenssit). Tasaisen, vapautuminen ERRα tavoitteiden pelastettiin uudelleen aloittamisen reseptorin (Kuva 3d). Sitä vastoin ilmaus miR-135 kohdistu suoraa (ROCK1, ROCK2, PTK2 ja SMAD5), vähentää yli-ilmentämällä pre-miR, ei palautettu ERRα transfektiota. Yhdessä nämä tiedot osoittavat, että miR-135a vaikutuksia geenien ilmentymiseen ERRα riippuvainen ja riippumaton tavoista.

a. MDA-MB231-soluja transfektoitiin osoitetuilla siRNA (c: hallita siRNA) ja RNA uutettiin 48 tunnin jälkeen. b. Solut transfektoitiin pre-miR-135 tai ohjata ennalta miR (-). RNA: t uutetaan ilmoitettuina ajankohtina transfektion jälkeen. Expression of ERRα tavoitteiden tutkittiin (a, b). c. Sama koe analysoidaan ilmentymisen suorien miR-135a kohdegeenien. d. Solut transfektoitiin pre-miR-135a ja pSG5Flag tyhjän vektorin (miR-135) tai ERRα koodaavan plasmidin (miR-135 + ERRα). Kontrolleina soluja transfektoitiin ennalta miR ohjaus täydennetty pSG5Flag vektoriplasmidiin. RNA: t uutettiin 48 tunnin jälkeen. Expression of ilmoitettu geenien määritettiin reaaliaikaisella PCR: llä. Tiedot esitetään vertailuryhmään nähden ja ilmaistu suhteessa ilmaus RPLP0. Näkyy on keskiarvo kolmen erillisen kokeen kolmesti virhepalkkien osoittavat SEM. *:

p

0,05, **:

p

0,01, ***:

p

0,005, ns: merkityksetön.

seuraava kyseenalaiseksi funktionaalisia vaikutuksia miR-135a voisi riippua ERRα. Tämä reseptori on osoitettu vaaditaan useiden liittyvien piirteiden syövän etenemisessä kuten solun muuttoliike ja invaasiota [36-37]. On toinen käsi miR-135a on osoitettu vähentävän solujen invaasiota [9, 11]. Käyttämällä Boyden chamber invaasio määritykset, me siis tutkittava, onko osa näistä jälkimmäisen toimintaa voidaan välittämä ERRα eston. Yli-ilmentävät miR-135a matkivat MDA-MB231-soluissa johti vähenemiseen ERRα ilmentymisen sekä inhibition soluinvaasion, verrattuna kontrolleihin (kuvio 4a). Sen sijaan uudelleen ilmentävät ei-kohdistettavaksi ERRα rakentaa täysin palautettu soluinvaasiota potentiaalia. Identtiset kokeet suoritettiin PC3 ihmisen eturauhasen solulinja tulokset olivat samanlaiset (kuvio 4b). Voimme päätellä, että miR-135a voi estää solujen invaasiota, ainakin osittain, inhibition kautta ERRα ilmentymisen.

MDA-MB231 (a) tai PC3 (b) -solut transfektoitiin kontrolli miR (miR-c ) tai miR-135a matkivat (molemmat täydennetty tyhjä pSGFlag plasmidilla) tai miR-135a matkivat täydennetty pSGFlag-AA /B-ERRα (poistetaan sen 3’UTR). Ilmentymisen osoitti proteiinien on esitetty ylemmässä paneelit. Solujen annettiin hyökätä matrigeelin päälle Boyden kammion määrityksissä. Tunkeutuvat solut kiinnitettiin ja värjättiin. Tyypillisiä mikrovalokuvia näkyvät vasemmalla. Kvantifiointi suoritettiin kokonaisuudessaan hyvin Image J. Tulokset ilmaistaan ​​suhteessa kontrolliin miR olosuhteissa virhejanat osoittavat sem. **:

p

0,01, *:

p

0,05, ns: merkityksetön.

Keskustelu

poikkeavia tuloksia on julkaistu roolia koskevia miR-135a syövän etenemiseen. Itse asiassa tämä microRNA on raportoitu edistää tai estää piirteet syövän aggressiivisuus [6-12]. Tässä osoitamme, että miR-135a vähentää ilmentymistä ERRα mRNA ja proteiini tasoilla, jolloin modulaatio reseptorin ekspression tavoite geenejä. Mielenkiintoista ERRα näyttää ekspressiota syöpiä, jotka on päinvastainen kuin miR-135a. Itse reseptorin tasoja (mRNA ja proteiini) ovat koholla tuumoreihin (suhteessa normaaliin kudokseen) ja sen korkea ilmentyminen korreloi huonon ennusteen erilaisten syöpien, kuten rinnasta tai eturauhasen (tarkistetaan [26-28 ]). Tämä korkea ilmentyminen voi johtua useita mekanismeja, kuten genomivahvistuksen [40], transkriptionaalisen itsesäätelydomeenin silmukan [41], ja vaimennussäätely MikroRNA että tavoite ERRα [25, 42]. Tässä ehdotamme, että väheneminen miR-135a ilmentyminen voi derepressoivan, että reseptorin. Yhdenmukaisia ​​sen määritelmän kertoimella huono ennuste, ERRα edistää useita piirteitä syövän etenemistä, kuten EMT, angiogeneesi, kytkin aerobinen Glykolyysivaiheen (Warburg vaikutus) sekä heikentää hypoksia [31-35]. Ei tiedetä, onko miR-135a on todella osallistuu osaksi vastustamaan syntymistä näitä prosesseja. Kuitenkin miR-135a tukahduttaa soluinvaasiota [11], parametri, joka on sitä vastoin edistää ERRα [36-37]. Nykyinen tulokset osoittavat, että inaktivointi ERRα by miR-135a on estää merkittävällä tavalla soluinvaasiota koska tätä ilmiötä voidaan palauttaa uudelleen käyttöön ei-kohdistettavaksi reseptoriin. Vähintään kaksi ei-toisiaan poissulkevia mekanismit on herättänyt selittämään pro-invasiivisia toimia reseptorin. Toisaalta, ERRα indusoi Wnt11 signalointia, joka suoraan säätelee solujen invaasiota kautta itsesäätelydomeenin silmukka johon β-kateniinin [36]. Toisaalta, reseptori säätelee positiivisesti ekspressiota TNFAIP1, mikä vähentää RhoA proteiinin stabiilisuuteen sekä toimintaa sen alavirtavaikuttajainhibiittorit ROCK1 [37]. Koska ERRα kasvu ROCK1 toiminta johtaa inhibitioon soluinvaasion. Mielenkiintoista on äskettäin osoitettu, että miR-135a suoraan indusoi ROCK1 mRNA: n hajoamisen, mikä myös johtaa inhibitioon soluinvaasion [11]. Tässä suhteessa vähentäminen miR-135a ilmentymisen syöpiä voi johtaa hallitsemattomaan ROCK1 lauseke, joka voi tulla liikaa ja siten estävät solujen invaasiota. Kuitenkin vähentäminen miR-135a todennäköisesti myös johtaa samanaikaisesti, lisääntyneeseen ERRα ilme. Puolestaan ​​reseptorin alentaa ROCK1 aktiivisuutta alas tasolle, joka on sopiva soluinvaasiota. Yhteenvetona miR-135a ja ERRα voivat muodostaa monitasoinen sääntelyverkon että hienosäätää ROCK1 aktiivisuutta.

perusing kirjallisuudessa, vaikuttaa mahdolliselta, että tämä miR-135a- ERRα sääntelyyn verkko voi olla tehokas täysin eri yhteydessä. Itse asiassa on osoitettu, että miR-135a suoraan alas-säätelee ilmentymistä master-geenin osteoblastien erilaistumista, Runx2, mikä estää osteogenesis [39].

Sinänsä

havaitut BMP2 aiheuttama lasku miR-135a ilmentyminen voi siten johtaa hallitsemattomaan Runx2 yli-ilmentyminen ja siten ennenaikainen osteoblastien erilaistumista. Toisessa kädessä, riippumatonta tietoa ovat osoittaneet, että sekä Runx2 ilmaisua ja aktiivisuuden tukahdutettu ERRα ([43-45], tarkistetaan [14]). Lasku miR-135a ilmentyminen voi siis suoraan derepressoivan ilmentymistä sekä Runx2 ja ERRα, jälkimmäinen puolestaan ​​hillitsevä aktiivisuus entisen. Tällainen verkko lopulta johtaa hienosäätöä Runx2 toimintaa, kuten edellä on kuvattu ROCK1. Lisätoimia tarvitaan osoittamaan tarkkuutta tämän hypoteesin.

tukeminen Information

S1 Taulukko. Oligonukleotidit, joita käytettiin tässä tutkimuksessa.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0156445.s001

(PDF)