Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Anti-EGFR-vasta-pohjainen hoito on tärkeä terapeuttinen edistyneeseen peräsuolen syöpä (CRC); tästä huolimatta, useita mutaatioita, mukaan lukien

KRAS

,

BRAF

, ja

PIK3CA

mutaatioita, ja

HER2

vahvistus-jotka liittyvät mekanismeista resistenssin kehittyminen anti-EGFR hoitoa. Tutkimuksen tarkoituksena oli selvittää taajuudet ja kliininen merkitys näiden geneettisten muutosten kehittynyt CRC.

Methods

KRAS

,

BRAF

, ja

PIK3CA

mutaatioita määritettiin Cobas reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (PCR) in 191 kehittyneitä CRC potilaalla on kaukainen etäpesäke. Mikrosatelliitti epävakaus (MSI) asema määritettiin hajanaisuus määrityksen ja

HER2

vahvistusta arvioitiin hopea in situ -hybridisaatio. Lisäksi

KRAS

mutaatioita tutkittiin Sangerin sekvensoinnin menetelmä 97 191 CRC tapauksista.

Tulokset

Mutaatiot

KRAS

,

BRAF

, ja

PIK3CA

havaittiin 104 (54,5%), 6 (3,1%), ja 25 (13,1%) tapauksessa kehittyneen CRC, vastaavasti. MSI-korkea asema ja

HER2

vahvistus havaittiin 3 (1,6%) ja 16 (8,4%) tapauksista, vastaavasti.

PIK3CA

mutaatioita useammin löytyy

KRAS

mutantin tyyppi (18,3%) kuin

KRAS

villityypin (6,9%) (

P

= 0,020 ). Sen sijaan

HER2

monistukset ja

BRAF

mutaatioita liittyivät

KRAS

villityypin rajatilaisesta merkitystä (

P

= 0,052 ja 0,094, tässä järjestyksessä) . Yhdistetyssä analyysit

KRAS

,

BRAF

ja

HER2

tila,

BRAF

mutaatioita tai

HER2

tiomonistukset liittyvä pahin ennusteen villityyppisen

KRAS

ryhmä (

P

= 0,004). Verrattaessa tehoa havaitsemismenetelmät, tulokset reaaliajassa PCR-analyysi paljasti 56 97 (57,7%), CRC tapauksissa

KRAS

mutaatioita, kun taas Sanger sekvensointi paljasti 49 tapauksessa (50,5%).

Johtopäätökset

KRAS

mutaatioita löydettiin 54,5% kehittyneiden CRC potilaista. Tuloksemme tuki subgrouping käyttämällä

PIK3CA

ja

BRAF

mutaation tai

HER2

vahvistus tila, lisäksi

KRAS

mutaatiostatus, on hyödyllistä hallintaan kehittynyt CRC potilaista.

Citation: Nam SK, Yun S, Koh J, Kwak Y, Seo AN, Park KU, et al. (2016)

BRAF

,

PIK3CA

, ja

HER2

onkogeeninen muutostyöt mukaan

KRAS

mutaatiostatusta Advanced kolorektaalisyövissä kanssa etäpesäkkeiden. PLoS ONE 11 (3): e0151865. doi: 10,1371 /journal.pone.0151865

Editor: Wayne A. Phillips, Peter MacCallum Cancer Centre, AUSTRALIASSA

vastaanotettu: 3. joulukuuta 2015 Hyväksytty: 04 maaliskuu 2016; Julkaistu 18 maaliskuuta 2016

Copyright: © 2016 Nam et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Kaikki asiaankuuluvat tietoa sisällä olevat tiedot tiedostoja.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat myöntämisestä Korea Health Technology R Welfare, Korean tasavalta (lupanumeroon: HI14C1813, https://www.khidi.or.kr/eps). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on kolmanneksi yleisin syöpä ja esiintyvyys CRC kasvaa edelleen maailmanlaajuisesti vuosittain. Huolimatta varhaisen havaitsemisen ja terapeuttinen kehittyessä alueellisia tai kaukaisia ​​etäpesäkkeitä osuus on lähes 50% vasta diagnosoitu CRC potilaille ja yleinen eloonjäämislukuja kehittyneiden CRC potilaista edelleen epätyydyttävä. Viimeaikainen tunnistaminen molekyyligenetiikan on mahdollistanut huomattavia edistysaskeleita potilaiden hoitoon kehittyneitä CRC. Kehittäminen kohdennettujen hoitomuotojen suunnattu spesifisiä mutaatioita, kuten

kasvutekijän reseptorin (EGFR) B tyrosiinikinaasigeeniä on parantunut hoidon tehokkuutta ja kliinistä tulosta kehittyneiden CRC potilailla [1-4]. Kuitenkin CRC ovat molekyylirakennetta heterogeenisiä kasvaimia että satama eri geenin muutoksia mukaan lukien mutaatiot

KRAS

,

BRAF

, ja

PIK3CA

sekä

HER2

vahvistusta; Monilla potilailla nämä mutaatiot siis kokemaan vastustuskykyä EGFR huumeiden ja on huono ennuste [2,3,5,6]. Sen vuoksi on tärkeää tutkia molekyylimekanismi taustalla vaste ja kestävyys EGFR-hoidon pitkälle CRC.

KRAS

mutaatioita, joita yleisesti havaitaan noin 40% CRC tapauksista , arvellaan liittyvän vastustuskyvyn EGFR hoidon CRC. Arviointi

KRAS

mutaatioita on siten välttämätöntä ennen käyttöä EGFR huumeiden valita potilaille, jotka saattavat hyötyä anti-EGFR hoitojen [7,8]. Lisäksi viimeaikaiset tutkimukset osoittavat, että ylimääräinen geenimutaatioita kuten

BRAF

mutaatioita,

PIK3CA

mutaatioita, ja

HER2

vahvistus on sekaantunut vastustuskykyä EGFR-kohdennettuja lääkkeitä CRC potilaille villin tyypin

KRAS

[5,9].

BRAF

, joka on jäsenenä RAF perhe, on tärkeä rooli MAP kinaasi /ERK-signalointireitistä [10]. Monet aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että mutaatiot

BRAF

ovat biomarkkeri huonon ennusteen kehittynyt CRC. Lisäksi

BRAF

mutantti kasvaimia osoittavat huono vaste anti-EGFR hoito, etenkin CRC potilailla, joilla on villin tyypin

KRAS

[5,11].

PIK3CA

on mutatoitunut eri ihmisen syövissä; CRC, se on mutatoitunut noin 20%: ssa tapauksista. Nykyisin potilaat kätkeminen

PIK3CA

mutaatiot eksonissa 20 eikä mutaatiot

KRAS

voivat näyttää vastustuskykyä EGFR hoitoa. Lisäksi

PIK3CA

mutaatiot eksonin 9 ja KRAS mutaatioita yleensä löydy yhdessä [3,12]. Lopuksi

HER2

monistukset esiintyy pieni määrä CRC, ja muutamat tutkimukset ovat raportoineet yhdistyksen välillä

HER2

vahvistusta ja huono vaste anti-EGFR lääkkeet [13].

näistä edellinen havaintojen tieto taajuuksista ja kliininen merkitys näiden geneettisten muutosten Korean potilailla on edelleen rajallista. Esillä olevassa tutkimuksessa arvioimme esiintyvyys näiden geneettisiä muutoksia potilailla, joiden CRC, ja arvioi suhde näiden geneettisten muutosten kanssa kliinis tekijät ja potilaiden tulosta. Lisäksi vertasimme tehoa käyttäen Cobas reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (PCR) testit, jotka käyttää Sangerin sekvensointia testejä havaitsemismenetelmiä varten

KRAS

mutaatioita.

Materiaalit ja menetelmät

potilaiden ja kudosnäytteiden

yhteensä 191 kehittyneitä CRC potilaalla on synkronoitu tai metachronous kaukaisia ​​etäpesäkkeitä, joille tehtiin kirurginen hoito Seoul National University Bundang Hospital vuosien 2003 ja 2009 otettiin tässä tutkimuksessa. Kaikkia potilaita hoidettiin resektioleikkaukselle ensisijaisen CRC on alustavan diagnoosin ja etäpesäkkeiden resekoituun havaittaessa. Kukaan potilaista hoidettiin ennen leikkausta kemo- tai sädehoitoa. Ennusteeseen viittaavia tietoja ja seurata tietoja saatiin potilasasiakirjamerkinnöistä ja patologian raportteja. Kokonaiselinaika (OS) laskettiin sen päivämäärän leikkauksen ja kuolinpäivä.

histopatologia ja luokittelu kasvaimia määritettiin mukaan WHO: n luokituksen. Käyttö potilaskertomuksen tietojen ja kudosnäytteiden Tutkimuksen hyväksyi Institutional Review Board of Seoul National University Bundang Hospital (viite: B-1210 /174-301). Kaikki näytteet ja potilaskertomuksen tietoja anonymisoidaan ennen käyttöä tässä tutkimuksessa ja osallistujat eivät antaneet kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen. Institutionaalinen Review Board luopua tarvetta kirjallinen suostumus olosuhteessa nimettömäksi ja ilman ylimääräisiä intervention osallistujille.

KRAS

,

BRAF

, ja

PIK3CA

mutaatio analyyseistä reaaliaikainen PCR-testi

Kasvaimen kerättiin kirurginen resektio yksilöitä ensisijaisen CRC. Hematoksyliini- Eosiini (HE) värjätään liukuu tarkisti patologi (H.S.L). Kasvaimen alueet identifioitiin ja mikroskooppisesti leikeltiin enemmän kuin 1 x 1 cm: n alueelle, joka koostui yli 60% tuumorisoluja. Yksi tai kaksi 8-pm paksu formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotettuja (FFPE) kasvainkudossektioista poistettiin parafiini ksyleenillä, 5 minuuttia huoneenlämmössä (RT), kuivattu absoluuttista alkoholia 5 min RT: ssä, ja niiden annettiin kuivua ilmassa täydellisesti 10 min. DNA eristettiin käyttäen Cobas DNA Sample Preparation Kit (Roche, Branchburg, NJ, USA) ja sama valmiste protokollaa kaikille Cobas mutaation sarjat käytettiin tässä tutkimuksessa. Pitoisuus eristetty DNA mitattiin käyttäen NanoDrop UV-spektrofotometrillä (Thermo Fisher Scientific, Wilmington, DE, USA) ja DNA laimennettiin DNA-näytelaimentimella päässä Cobas 4800 Mutation Test Kit (Roche) ja optimaalinen pitoisuus kullekin geenille (

KRAS

4 ng /ul,

BRAF

5 ng /ul, ja

PIK3CA

2 ng /ul). Vahvistusta ja tunnistus suoritettiin Automated Cobas X480 analysaattorin väline. Reaaliaikaisen PCR-testi voisi havaita kodonissa 12, 13, ja 61

KRAS

mutaatio, V600E

BRAF

mutaatio, ja eksoni 1, 4, 7, 9, ja 20

PIK3CA

mutaatio.

KRAS

mutaation analyysi käyttäen Sangerin sekvensointia menetelmä

Kasvaimen kerättiin sama ensisijainen CRC yksilöitä, jotka olivat käytetään reaa- PCR testejä. Kaikki näytteet microdissected käsin ja 60% näytteestä alueen osoitettiin sisältävän kasvainsolujen arvioituna H suhde laskettiin uudelleen näiden tulosten perusteella.

mikrosatelliittien epävakaus (MSI) analyysi

Osiot valmistettiin FFPE kudosnäytteistä ja hematoksyliinillä ja eosiinilla värjättyjen objektilasit arvioitiin tunnistamaan edustava kasvaimen alueelle ja normaali alue kussakin osassa. Nämä valitut alueet microdissected. MSI-analyysi suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [16,17]. Lyhyesti, MSI tila määritettiin analysoimalla viisi microsatellite loci (BAT-26, BAT-25, D5S346, D17S250, ja S2S123) käyttämällä DNA automaattista sekvensseri (ABI 3731 geneettinen analysaattorin, Applied Biosystems, Foster City, CA). Mukaan Bethesda ohjeen MSI, kasvaimet luokiteltiin MSI-H, kun ainakin kaksi viidestä merkkiaineiden näkyvissä uusia bändejä, MSI-L, jolloin ylimääräinen alleelit havaittiin yksi viidestä markkereita, ja MSS kun kaikki mikrosatelliittimarkkerin tutkitut näkyvissä identtisiä malleja sekä kasvaimen ja normaaleissa kudoksissa.

tilastollinen

Tilastolliset analyysit tehtiin SPSS Statistics 18 ohjelmistopaketti (Chicago, IL, USA). Assosiaatio ennusteeseen viittaavia parametreja ja geneettisiä muutoksia analysoitiin käyttämällä Chi-square test tai Fisherin testiä. Chi-neliö testi suoritettiin vain, jos vähintään 80% soluista on odotettu taajuus on 5 tai suurempi, eikä solu on odotettu taajuus pienempi kuin 1,0. Jos ei, Fisherin testiä käytettiin. Ikä käsiteltiin jatkuvana muuttujana ja verrattiin käyttämällä riippumattomien T testi takia p 0,05 Shapiro-Wilk normaaliuden testi. Kaplan-Meier selviytymisen käyrät piirrettiin, ja tilastollisesti merkitseviä eroja eloonjäämiskäyrien analysoitiin käyttäen log-rank-testi. Monimuuttuja selviytyminen analyysi käyttäen Coxin suhteellisten riskien mallia toteutettiin mutaatiostatuksesta, iästä, ja vaihe alkudiagnoosin. Riskisuhde (HR) ja sen 95%: n luottamusväli (CI) arvioitiin. Kaikissa tapauksissa,

P

-arvot olivat alle 0,05 pidettiin tilastollisesti merkittävänä.

Tulokset

Patient ominaisuudet

viittaavia tekijöitä potilaista on esitetty yhteenvetona S1 Taulukko. Potilaat koostui 103 miestä (53,9%) ja 88 naista (46,1%), ja iän mediaani 60 vuotta (vaihteluväli: 28-93 vuotta). Niistä 191 tapauksessa 49 (25,7%) kasvaimia sijaitsee oikealla paksusuolessa, 71 (37,2%) kasvaimia vasemmassa paksusuolessa, ja 71 (37,2%) kasvaimia peräsuolessa. Mitä histologiset erilaistumista luokalla, 165 (86,4%) kasvaimet olivat huono laatu, ja 26 (13,6%) kasvaimet olivat korkealaatuista. Mitä hoitoja, 176 (92,1%) potilasta sai 5-fluorourasiilin (5-FU) -pohjaisen adjuvanttihoitoa tai ilman anti-EGFR hoito (setuksimabista) jälkeen poistettu kirurgisella; 150 (85,2%) potilasta sai 5-FU kemoterapian vain; ja 26 (14,8%) potilasta sai 5-FU anti-EGFR huumeita.

geneettiset muutokset liittyvät EGFR signalointireitin kehittyneissä CRC

Kaikki perustiedot on esitetty S2 taulukossa. Kasvaimen tutkituissa tapauksissa, 87 (45,5%) oli villityypin

KRAS

ja 104 (54,5%) oli

KRAS

mutaatioita. Niistä kasvainten

KRAS

mutaatioita, mutaatiot kodonissa 12 tai 13 havaittiin 97 (93,3%), kun taas mutaatiot kodonissa 61 havaittiin 7 (6,7%) potilaista.

BRAF

(V600E) mutaatioita havaittiin 6 (3,1%) kasvaimissa.

PIK3CA

mutaatioita tunnistettiin 25 (13,1%) kasvaimissa. Kaksi yleisintä

PIK3CA

mutaatioita sijaitsivat eksonissa 9 (17 tapausta, 68,0%) ja eksonin 20 (5 tapausta, 20,0%). Muita harvinaisia ​​mutaatioita sijaitsivat eksonit 1 ja 4 (2 tapausta, 8,0%). Yksi tapaus kanna

PIK3CA

eksonin 4 mutaatio sekä

PIK3CA

eksoni 9 mutaatio. SISH analyysi osoitti

HER2

geenivahvistus 16 (8,4%) kasvaimia. Kolme tapausta Kohortin olivat MSI-H (1,6%), ja loput 188 (98,4%) tapauksista luokiteltiin MSS /MSI-L.

Out of 104

KRAS

mutantti tyyppi CRC tapauksissa, 23 (22,1%) oli

PIK3CA

mutaatioita,

HER2

monistuksia, tai

BRAF

mutaatiota (taulukko 1). Kahdeksantoista tapaukset osoittivat

PIK3CA

mutaatio, 4 tapausta osoitti

HER2

vahvistus, yhdessä tapauksessa oli kummankin

BRAF

ja

PIK3CA

mutaatioita, ja yhdessä tapauksessa oli kummankin

PIK3CA

mutaatio ja

HER2

vahvistusta. Out of 87

KRAS

villityypin CRC,

BRAF

mutaatioita,

PIK3CA

mutaatioita, ja

HER2

tiomonistukset löydettiin 5 (5,7%), 6 (6,9%), ja 11 (12,6%) tapauksista, vastaavasti; Kaiken 21 87

KRAS

villityypin tapauksessa (24,1%) oli

BRAF

mutaatioita,

PIK3CA

mutaatioita tai

HER2

monistuksissa.

Mielenkiintoista, läsnäolo

PIK3CA

mutaatioita oli merkitsevästi yhteydessä läsnäolo

KRAS

mutaatioita (

P

= 0,020; taulukko 2). Mutaatiot

KRAS

ja

BRAF

olivat lähes toisensa poissulkevia; kuitenkin yhdessä tapauksessa kanna samanaikaisesti

KRAS

ja

BRAF

mutaatioita.

HER2

monistukset ja

BRAF

mutaatioita oli taipumus useammin havaittavissa

KRAS

villityypin kasvaimia kuin

KRAS

mutantti tyyppi kasvainten rajatilaisesta tilastollista merkittävyyttä (

P

= 0,052 ja

P

= 0,094, tässä järjestyksessä). MSI tila ei osoittanut mitään yhteyttä näihin geneettisiin muutoksiin tässä kohortissa.

Association geneettisiä muutoksia kanssa viittaavia tekijöitä

Taulukko 3 osoittaa suhdetta geneettiset muutokset ja ennusteeseen viittaavia ominaisuuksia.

KRAS

mutantti kasvaimet olivat todennäköisesti sijoitetaan oikeaan paksusuolessa (

P

= 0,021). Nämä kasvaimet olivat liittyy myös huonolaatuisen histologia (

P

= 0,029).

BRAF

mutantti kasvainten liittyivät merkittävästi T4 syvyys invaasio (

P

= 0,033). Vaikka se ei saavuttanut tilastollista merkittävyyttä,

BRAF

mutantti kasvaimet sijaitsivat yleensä oikeassa paksusuolessa (

P

= 0,127) ja saada imusuonten invaasiota (

P

= 0,097) verrattuna samaan ominaisuudet

BRAF

villityypin kasvaimia. Kasvaimista

HER2

tiomonistukset korreloi merkitsevästi distaalinen sijainti (

P

= 0,006).

HER2

monistuksissa osoitti myös yhdessä nuorempi, mutta tämä ero ei ollut tilastollisesti merkitsevä (

P

= 0,081). Ei ollut muita merkittäviä assosiaatioita

PIK3CA

mutaatioiden tai MSI asema ennusteeseen viittaavia tekijöitä.

Prognostic merkitystä geneettisiä muutoksia

määrittämiseksi ennustetekijöiden merkitystä näiden geneettisten muutokset, selviytyminen analyysit suoritettiin käyttäen Kaplan-Meierin menetelmän OS (kuvio 1). Seuranta dataa kaikista 191 CRC potilasta osallistui selviytymisen analyysiin. Oli 84 CRC liittyviä kuolemantapauksia, ja mediaani seuranta aika oli 37,9 kuukautta (alue, +0,8-104,6kuukausi). Potilaat, joilla on

BRAF

mutaatioita osoitti taipumusta epäsuotuisa lopputulos OS, mutta tämä tulos ei ollut tilastollisesti merkitsevä (

P

= 0,081).

KRAS

mutaatioita,

PIK3CA

mutaatioita,

HER2

monistuksia, ja MSI tila ei osoittanut mitään yhteyttä potilaiden OS (

P

= 0,993

P

= 0,538,

P

= 0,368, ja

P

= 0,538, tässä järjestyksessä). Mutaatio

KRAS

kodonin 61 oli taipumus liittyä lyhyempi kokonaiselinaika, mutta se ei ollut tilastollisesti merkitsevä (

P

= 0,554).

Kaplan-Meier selviytymisen arvio kuvaajat kokonaiselinaika (OS) in 191 kehittyneet CRC potilaat mukaan

KRAS

mutaatioita asema (a), sijainnit

KRAS

mutaatioita kehittynyt CRC potilaalla (b),

BRAF

mutaatiot (c),

PIK3CA

mutaatioita (d),

HER2

monistukset (e), ja MSI tila (f).

Mielenkiintoista on, että

KRAS

villityypin alaryhmän kanssa

BRAF

mutaatioita tai

HER2

monistuksissa osoitti pahin ennusteen yhdistettyjen analyysien avulla (

P

= 0,004; Kuva 2A). Käyttämällä Coxin suhteellisten riskien mallia, tämä alaryhmä oli huono ennustetekijä (HR, 2,055, CI, 1,093-3,861;

P

= 0,025) riippumatta ikä ja vaihe alkudiagnoosin (S3 taulukko). Niistä 191 kehittynyt CRC, 165 potilasta ei hoidettu anti-EGFR lääkkeet potilaita, joille

KRAS

villityypin alaryhmän kanssa

BRAF

tai

HER2

muutoksia myös osoitti huonoin prognoosi (

P

= 0,012; Kuva 2B). Käyttämällä Coxin suhteellisten riskien mallia, tämä alaryhmä oli huono ennustetekijä rajatilaisesta tilastollista merkittävyyttä (HR, 1,984, CI, 0,963-4,085;

P

= 0,063; tuloksia ei ole esitetty). Kuitenkin 26 hoidetuilla potilailla 5-FU anti-EGFR lääkkeet,

KRAS

villityypin alaryhmän kanssa

BRAF

tai

HER2

muutoksiin ei liittynyt huonoon ennusteeseen (

P

= 0,305, tuloksia ei ole esitetty), joka voi olla, koska pieni määrä tapauksia.

KRAS

villityypin alaryhmä,

BRAF

tai

HER2

muutoksiin liittyi korkealaatuista histologisia erilaistuminen, pitkälle, imusuonten invaasio ja hermoa invaasio, mutta raja tilastollinen merkitys (S4 taulukko).

tulokset yhdistetään analyysin pitkälle CRC potilailla, joilla on

KRAS

villityypin alaryhmän mukaan

BRAF

mutaatio ja

HER2

vahvistus riippumatta anti-EGFR hoidon tila (n = 191) (a), johon ei ole käsitelty anti-EGFR-lääkkeet (n = 165) (b).

vertailu Cobas real- PCR ja Sanger sekvensointi menetelmiä

KRAS

mutaatioita

191 CRC näytteistä, kudoksiin 97 potilasta oli käytettävissä analyysia verrata havaitsemiseksi

KRAS

mutaatioita kanssa Sanger sekvensointi testi ja Cobas reaaliaikaisen PCR-testissä. Niistä 97 kasvainten mukana,

KRAS

mutaatioita havaittiin 49 tapauksessa (50,5%) Sangerin sekvensoinnilla testi. Mutaatiot

KRAS

kodonissa 12 tai 13 ja

KRAS

kodonissa 61 havaittiin 47 (48,5%) ja 2 (2,1%) tapauksista, vastaavasti. Toisaalta, 56 tapauksessa (57,7%) on

KRAS

mutaatioita havaittiin reaaliaikaisen PCR-testi; Testin sijaitsevat 52 (53,6%) mutaatioita kodonissa 12 tai 13 ja 4 (4,1%) mutaatioita kodonissa 61. reaaliaikainen PCR-testi osoitti suurempi herkkyys kuin Sangerin sekvensoinnin testi.

Keskustelu

KRAS

on tunnettu kuljettaja onkogeenin CRC ja läsnäolo

KRAS

mutaatio ennustaa huono vastaus EGFR täsmähoitoihin metastasoitunutta CRC potilailla. Olemme arvioineet taajuudet ja clincopathologic merkitys mutaatioiden

KRAS

,

BRAF

, ja

PIK3CA

, ja

HER2

vahvistus, sekä suhdetta näiden geneettisten muutosten kehittynyt CRC potilailla, jotka olivat ehdolla EGFR hoitoa päivittäin käytännössä. Mutaatiot

KRAS

,

BRAF

, ja

PIK3CA

havaittiin 104 (54,5%), 6 (3,1%), ja 25 (13,1%) tapauksista kehittyneiden CRC, vastaavasti. Lisäksi MSI-H fenotyyppi ja

HER2

vahvistus havaittiin 3 (1,6%) ja 16 (8,4%) tapauksista, vastaavasti.

kehitys kohdennettujen hoitomuotojen määrätyiltä molekyyli muutoksia on osaltaan hallintaan kehittyneitä CRC potilaiden, ja anti-EGFR huumeita käytetään näillä potilailla. Vaikka läsnäolo

KRAS

mutaatio on hyödyllinen jättää potilaille, jotka eivät hyödy EGFR hoitoa, monet potilaat villin tyypin

KRAS

CRC osoittavat negatiivisia vastauksia tähän hoitoon. Toistaiseksi katsotaan, että

BRAF

mutaatioita,

PIK3CA

mutaatioita, ja

HER2

monistusta liittyvät mekanismit näiden köyhien vastauksista [4,5]. Meidän kohortti, 16 87

KRAS

villityypin tapauksessa (18,4%) oli

BRAF

mutaatioita tai

HER2

monistuksissa; Lisäksi yhdistetty analyysi osoitti, että

KRAS

villityypin potilaalla on

BRAF

mutaatioita tai

HER2

monistuksissa oli pahin ennuste. Koska kohdennetut hoitomuotoja

BRAF

mutaatioita ja

HER2

monistuksissa merkittäviä eloonjäämishyötyä erilaisissa ihmisen syövissä [10,18,19], hoito anti-BRAF ja anti-HER2 aineet voivat olla hyvä terapeuttinen strategia parantaa hengissä CRC potilailla, joilla on villin tyypin

KRAS

kätkeminen

BRAF

mutaatioita tai

HER2

monistukset ja joilla on myös ensisijaisen tai toissijaisen vastustuskykyä EGFR käsittely.

Vaikka pieni määrä kasvainten

PIK3CA

mutaatioita meidän kohortin huomasimme, että

PIK3CA

mutaatioita pitkälti päällekkäin

KRAS

mutaatioita, joka oli yhdenmukainen aiempien tutkimusten Euroopan [20] ja japani [21] CRC sairastavilla potilailla etäpesäkkeitä. Tällä hetkellä useat estäjät kohdistaminen

PIK3CA

signalointireitin on kehitetty, ja nämä aineet testataan prekliinisissä ja kliinisissä kokeissa potilailla, joilla on CRC [22-24]. Ottaen huomioon tuloksemme ja aikaisemmat tutkimukset [20,21], että

KRAS

mutaatiot usein rinnakkain kanssa

PIK3CA

mutaatioita, estämällä

PIK3CA

signalointireitin saattaisi olla käyttökelpoinen terapeuttinen strategia hoitoon CRC potilaalla on

KRAS

mutaatioita.

Kaiken kaikkiaan 24 191 tapausta (12,6%) oli kaksi tai useampia onkogeenisten muutoksia tässä tutkimuksessa. Se voidaan tulkita niin, että nämä geneettiset muutokset esiintyvät samanaikaisesti samassa kasvain, mutta se voi johtua kasvaimen heterogeenisuus. Aikana syövän etenemiseen, onkogeeninen muutoksia kehittyä jatkoklooni, jotka edistävät syövän etäpesäkkeiden ja lääkeresistenssin. Käytimme herkempi havaitsemismenetelmiä, mikä mutaatioiden vähäiset tuumorisolupopulaatioon voitu havaita. Hallinnassa CRC potilailla, herkkä molekyyli diagnoosi on hyödyllistä havaita pieniä kasvaimia synnyttävän muutoksia, jotka voivat olla seuraava kohde kehittyneiden CRC potilailla, joilla on ensisijainen tai toissijainen vastustuskykyä ensilinjan kohdennettua hoitoa. Meidän kohortti, yhdessä tapauksessa kanna samanaikaisesti

KRAS

ja

BRAF

mutaatioita. On tunnettua, että

BRAF

mutaatiot ovat yleensä havaitaan

KRAS

villityypin kasvaimia, ja että ne ovat lähes sulkevat toisensa pois

KRAS

mutaatioita CRC. Useissa tutkimuksissa on raportoitu, että harvinaisissa tapauksissa Harbor yhdistetty

KRAS

ja

BRAF

mutaatioita, joita esiintyy alle 0,02% [25,26]. Vaikka tuumoribiologiassa ja ennusteen potilaita, joilla samanaikaisesti

KRAS

ja

BRAF

mutaatiot ovat olleet vielä epävarma, edellinen tutkimus viittaa siihen, että nämä samanaikainen mutaatiot liittyvät syövän etenemiseen kuten imusolmuke etäpesäke ja korkeampi T vaiheessa [25,27]. Edelleen laajoja tutkimuksia tarvitaan selvittämään ilmaantuvuutta ja biologinen toiminta samanaikaisen

KRAS

ja

BRAF

mutaatioita.

Aikaisemmat tutkimukset kehittyneitä CRC potilailla, joilla on etäpesäkkeitä raportoitu, että noin 34 ~ 45%: lla potilaista oli

KRAS

mutaatioita [20,21,28]. Tässä tutkimuksessa Korean CRC potilailla osoitti, että tiheys

KRAS

mutaatioita oli 54,5%, ja että nämä mutaatiot nähtiin lähinnä kodoneissa 12 tai 13 (93,3%). Taajuus

KRAS

mutaatiot tässä kohortissa oli hieman korkeampi kuin aiemmin julkaistu raporteissa metastaattisen CRC potilaista [20,21,28]. On olemassa useita mahdollisia selityksiä siihen. Ensin otettiin vain edistynyt CRC potilasta tässä kohortissa, mikä voi selittää korkeamman taajuuden

KRAS

mutaatioita. Toiseksi, oli joitakin eroja mutaation analyysimenetelmiä. Analysoimme mutaatio aseman käyttäen Cobas real-time PCR, jota pidetään osoittaa suuremman herkkyyden kuin muiden analyysimenetelmiä.

On raportoitu, että useimmat

KRAS

mutaatioita CRC potilailla esiintyy kodonissa 12 ja 13. Tämä tutkimus osoitti myös, että

KRAS

mutaatioita nähtiin lähinnä kodoneissa 12 tai 13 (93,3%). Meidän

KRAS

mutaatio Alaryhmäanalyysissa mutaatio

KRAS

kodonin 61 oli taipumus liittyä lyhyempi kokonaiselinaika, mutta se ei ollut tilastollisesti merkitsevä. Prognostisia vaikutus

KRAS

kodonin 61 mutaatiota on raportoitu useissa aiemmissa tutkimuksissa, joskin kiistelty tuloksia [29]. Koska esiintyvyys

KRAS

kodonissa 61 mutaatioiden on harvinainen, edelleen laajoja tutkimuksia voi auttaa selventämään suhde näiden mutaatioiden ja kliiniseen tulokseen.

mutaatiot

BRAF

ja

PIK3CA

havaittiin 3,1% ja 13,1%: ssa tapauksista, vastaavasti. Vaikka taajuuksien näiden mutaatioiden pidetään pienenä, ne olivat samanlaisia ​​kuin aiempien tutkimusten kehittyneissä CRC [20,21,28]. Suostumuksella Edellisessä tutkimuksessa [30],

BRAF

mutaatiot liittyvät aggressiivinen CRC histologia, kuten korkeampi T vaiheessa ja esiintyminen imusuonten hyökkäystä. Vaikka tulokset eivät tilastollisesti merkitsevä, potilaat kätkeminen

BRAF

mutaatioita osoitti myös lyhyempiä OS.

arvioitiin kaksi havaitsemismenetelmät

KRAS

mutaatioita CRC näytteet: Cobas real -Aika PCR ja Sanger sekvensoinnilla. Siellä oli hyvä korrelaatio

KRAS

mutaation havaitsemista reaaliaikaisella PCR ja Sanger sekvensointi, ja reaaliaikainen PCR osoitti suurempi herkkyys kuin Sangerin sekvensoinnin. Meidän kohortti, 7 tapausta

KRAS

mutaatioita havaittiin reaaliaikaisen testiä, joita ei havaittu Sangerin sekvensoinnilla testi, nimenomaan 5 tapauksissa kodonissa 12 tai 13 ja 2 tapausta varten kodonissa 61. Sanger sekvensointi menetelmä, kehitettiin vuonna 1975, pidettiin yhtenä perus- mutaation havaitsemismenetelmät; kuitenkin, tämä menetelmä näyttää olevan rajoitetusti herkkyyttä alhainen mutanttialleelin voidaan havaita tällä menetelmällä [31]. Toisaalta, reaaliaikainen PCR-testi, kuten erilaisia ​​kaupallisia pakkauksia pidetään erittäin herkkä menetelmä, joka osoittaa etuja havaitsemiseksi

KRAS

mutaatioita [32]. Tähän mennessä huomattava kasvaimeen heterogeenisyys molekyylitason muutoksia ja niiden kliinistä vaikutusta täsmähoitoihin on kuvattu erilaisissa kasvaimissa. CRC, useissa tutkimuksissa on raportoitu kliininen merkitys

KRAS

heterogeenisyys EGFR hoito [5,33,34]. Normanno et ai. ehdotti, että alhainen pitoisuus

KRAS

Mutanttialleelit oli riittävä tuottamaan resistenssin EGFR monoklonaalisia vasta-aineita, ja kynnys niiden tutkimuksessa oli 3 ~ 10% mutantin

KRAS

alleelin frekvenssi, joka oli epätodennäköistä voidaan havaita käyttämällä Sangerin sekvensointia [33]. Vaikka lisätutkimuksia tarvitaan vahvistaa nämä tulokset ja selkeyttää roolia molekyyli muutokset vastustuskykyä EGFR hoitoa, tarkka havaitseminen Näiden mutaatioiden on suuri kliininen merkitys.

Yhteenvetona huomasimme, että esiintyvyys

KRAS

mutaatioita oli 54,5% Korean kehittynyt CRC potilaita, mikä oli yleisempi kuin mitä on raportoitu muissa populaatioissa.

BRAF

mutaatioiden tai

HER2

monistukset todettiin 16,1%

KRAS

villityypin potilailla, ja lisäksi yhdistetty analyysi osoitti, että

KRAS

villityypin potilaalla on

BRAF

tai

HER2

monistuksissa oli pahin ennuste.

PIK3CA

mutaatiot useammin havaittiin

KRAS

mutantin tyyppi kuin villityypin

KRAS

CRC potilaille.