Krooninen sairaus

tiivistelmä

maksasolusyövän (HCC) on toiseksi yleisin syy syövän kuolleisuus kaikkialla maailmassa. Useimmat HCC liittyy maksakirroosi liittyvät krooninen hepatiitti B-virus tai hepatiitti C-virus-infektiot. Hypermetylaatiota promoottori alueiden on tärkein epigeneettiset mekanismi geenien ja on ollut mukana HCC kehittämiseen. Tutkimuksen tavoitteena oli selvittää, onko poikkeava metylaatio

RASSF1A

ja

DOK1

geenipromoottorit liittyy etenemisen maksasairaus Brasilian potilailla. Metylaatiotasoilla mitattiin pyrosekvensointi 41 (20 HCC, 9 kirroosipotilailla ja 12 ei-kirroottinen) maksakudosta näytteitä. Mean hinnat metylaation

RASSF1A

ja

DOK1

olivat 16,2% ja 12,0% ei-kirroosipotilailla 26,1% ja 19,6% maksakirroosia, ja 59,1% ja 56,0% vuonna HCC kudoksissa, vastaavasti , osoittaa asteittainen lisääminen mukaan sairauden etenemistä, huomattavasti korkeampi kasvainkudoksissa. Lisäksi, hypermetylaatiota

RASSF1A

ja

DOK1

havaittiin valtaosa (88%) HCC tapauksissa. Mielenkiintoista,

DOK1

metylaatiotasoilla HCC näytteet olivat huomattavasti korkeammat ryhmässä nuorempien (alle 40 vuotta) potilailla, ja suurempi kohtalaisen eriytetty kuin huonosti eriytetty kasvaimet (

p

0,05). Tuloksemme vahvistavat oletusta, että hypermetylaatiota

RASSF1A

ja

DOK1

edistää hepatokarsinogeneesin ja liittyy sen kliinis ominaisuuksia.

RASSF1A

ja

DOK1

promoottori hypermetylaation voi olla arvokas biomarkkeri varhainen diagnosointi HCC ja mahdollisen molekyylikohteena epigeneettisellä-pohjainen terapia.

Citation: Araújo OC, Rosa AS, Fernandes A, Niel C, Villela-Nogueira CA, Pannain V, et ai. (2016)

RASSF1A

ja

DOK1

Promoottori metylaatiotasoilla maksasolukarsinoomassa, kirroosipotilailla ja Non-Kirroottiset Maksa ja Korrelaatio maksasyöpää Brasilian Potilaat. PLoS ONE 11 (4): e0153796. doi: 10,1371 /journal.pone.0153796

Editor: Isabelle A. Chemin, CrCl-INSERM, FRANCE

vastaanotettu: 11 helmikuu 2016; Hyväksytty: 04 huhtikuu 2016; Julkaistu: 14 huhtikuu 2016

Copyright: © 2016 Araújo et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperin.

Rahoitus: Tämä työ rahoittivat Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (https://cnpq.br/) myöntää numero 444071 /2014-8, että NMA ja Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (https://www.faperj.br/), myöntää useita E-26 /111,528 /2013 NMA. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Maksasyövän on toiseksi suurin syy syöpään liittyvää kuolleisuutta, arviolta 700000 kuolemantapausta vuosittain maailmanlaajuisesti [1]. Maksasolusyövän (HCC) on ylivoimaisesti yleisin ensisijainen maksasyövän ja yksi harvoista syöpiä hyvin määritelty tärkeimmät riskitekijät. Noin 80% kaikista HCC tapauksissa liittyy krooninen hepatiitti B -viruksen (HBV) tai hepatiitti-C-virus (HCV) infektiot [2], vaikka kroonisen alkoholismin ja alkoholiton rasvamaksatulehdus (NASH) ovat myös merkittäviä syitä [3, 4]. Nämä riskit aiheuttaa kroonisen maksavaurion johtaa usein maksakirroosi, joka on läsnä 80-90%: lla potilaista, joilla HCC [4, 5]. Koska HCC ennuste riippuu kasvaimen vaiheessa diagnoosi, alempi eloonjäämisluvut on havaittu potilailla, joilla oli pitkälle edennyt [6], jossa korostetaan tunnistamisen biomarkkereita varhaisen maksasyövän havaitsemiseen ja hoitotoimenpiteiden.

molekyylitason mekanismit hepatokarsinogeneesin jää epäselväksi. Vastaavia muita kasvaimia, kehittymistä ja etenemistä HCC johtuu monivaiheinen prosessi, mukaan lukien kertymistä geneettisten ja epigeneettisten muutoksia säätelygeenejä, jotka johtavat aktivoinnin eri onkogeenien ja inaktivoitumisen tuumorisuppressorigeeneille. Hypermetylaatiota promoottori CpG-saarekkeiden on epigeneettiset mekanismi geenien mukana monenlaisia ​​ihmisen syövissä, mukaan lukien HCC [7, 8]. Poikkeava DNA: n metylaatio on myös osoitettu premaligni olosuhteissa kuten dysplastic kyhmyjä tai kirroosipotilailla maksan [9-11], mikä viittaa siihen, että se on varhainen tapahtuma hepatokarsinogeneesin ja arvokas markkeri riskinarviointiin. Ras yhdistys domain perhe 1A (

RASSF1A

) ja loppupään tyrosiinikinaasien 1 (

DOK1

) on tuumorisuppressorigeeneille usein vaiennettu kautta epigeneettiset mekanismi erilaisissa ihmisen maligniteettien [12, 13] . Poikkeava metylaatio näistä geeneistä on ehdotettu olevan tärkeä rooli malignin transformaation hepatosyytti- [10, 14]. Erityisesti hypermetylaation näiden geenien HCC on raportoitu näyttämään maantieteelliset erot, mikä viittaa siihen, että etnisyys voi vaikuttaa DNA metylaatiotasoilla [10].

Brasilian ihmiset ovat seurausta intensiivisen sekoittumisen eurooppalaisten colonizers tai maahanmuuttajia, Afrikkalainen orjia, ja natiivi Amerindians. Brasiliassa lähes 9000 kuolemantapausta johtuvan HCC vuonna 2013 [15], ja krooninen HCV-infektio on merkittävä riskitekijä, osuus on yli 50%: ssa tapauksista [16]. Tietääksemme mitään raportti on julkaistu tähän mennessä epigeneettisenä tekijöihin liittyvät HCC Brasiliassa.

Tässä tutkimuksessa, suoritimme kvantitatiivisen DNA: n metylaatio analyysi pyrosekvensointi Brasilian potilaiden HCC, kirroosipotilailla ja non -cirrhotic vaiheissa, ja arvioi suhde metylaatiotasoilla ja kliinis ominaisuuksia, joiden tarkoituksena on tutkia merkitystä hypermetylaatiota

RASSF1A

ja

DOK1

kuin molekulaarinen merkkiaine HCC.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

tutkimusprotokolla hyväksyi tutkimuseettinen komitea Clementino Fraga Filho yliopistollisen sairaalan (hyväksynnän numero 139/10) ja mukaisesti suoritettujen Helsingin julistuksen. Johtuen taannehtivuus Tutkimuksen eettinen komitea totesi, ettei kirjallinen suostumus vaadittiin potilailta.

Potilaiden ja kudosnäytteiden

Arkistoidut formaliinilla kiinnitetyt parafinoidut kudosblokeista olivat saatu patologian osaston ja Clementino Fraga Filho University Hospital, Rio de Janeiro, Brasilia. Maksa näytteitä 20: llä HCC, neljä maksakirroosi ilman HCC, ja 12, joilla on krooninen hepatiitti (ei kirroottiset) analysoitiin (taulukko 1). Lisäksi ympäröivä kirroottiset kudosta analysoitiin viisi HCC potilailla (yhteensä = 41 näytettä). Histologinen analyysi paljasti ominaisuudet yhteensopiva krooninen hepatiitti (tulehdus tai ilman fibroosia) kaikilla ei-kirroottinen maksakudoksissa. HCC ja kirroottisissa otettiin kudosnäytteet maksasta eksplantaatteja tai kirurgisen resektion, kun taas kudoksissa potilailla, joilla on krooninen hepatiitti saatiin perkutaaninen maksabiopsia. Kaikki HCC potilaat mukana tässä tutkimuksessa oli kirroottisilla maksa.

Demografiset ja kliinis tiedot saatiin potilastietoja voidakseen arvioida yhdistyksen iän, sukupuolen, histologian ja HBV ja HCV tartuntojen DNA: n metylaatio . Viruksen tila potilaiden vahvistettiin seuraavasti: HBV-infektio, HBsAg positiivinen; HCV-infektion, anti-HCV ja HCV-RNA on positiivinen; virusta ei, HBsAg, anti-HCV ja HCV-RNA negatiivisia.

keski-ikä potilailla oli 57 (vaihteluväli 19-78) vuotta ja 47% heistä iältään ≥ 60 vuotiaita. Kaksikymmentäkuusi (72%) potilaalla oli miehiä. HCV-infektion oli tärkein etiologinen tekijä maksasairaus (56% tapauksista), jonka jälkeen HBV (19%). Neljätoista (70%) HCC: lla potilaista oli kohtuullisesti erilaistunut kasvain, ja kymmenen (50%) oli tuumorin koon 5 cm: n (taulukko 1).

DNA eristäminen ja natriumbisulfiitin muuntaminen

viiden osa 10 um leikattiin kustakin lohkosta, parafiini 1 ml: ssa absoluuttista ksyleeniä, ja niihin lisätään 1 ml: aan 96% etanolia. Perimän DNA uutto suoritettiin käyttäen QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (Qiagen, Valencia, CA), mukaan valmistajan protokollaa. Noin 500 ng genomista DNA: ta altistettiin bisulfiittimodifikaatio hoitoon muuntaa kaikki metyloitumattomat sytosiinit tymiiniä. Tämä suoritettiin käyttämällä EZ DNA Metylointi-Salama Kit (Zymo Research, Irvine, CA). Modifioitu DNA säilytettiin -20 ° C: ssa lisäanalyysiä varten.

DNA: n metylaatio analyysi pyrosekvensointi

DNA: n metylaatio tasot

RASSF1A

ja

DOK1

promoottorialueille mitattiin herkkä pyrosekvensointi tekniikka (PyroMark Q96 ID, Qiagen) useassa CpG sivustoja. Ui bisulfiittikäsiteltyä DNA: ta monistettiin PCR: n tilavuudessa 50 ui reaktiossa, joka sisälsi 1 U Platinum Taq DNA-polymeraasi, High Fidelity (Invitrogen, Carlsbad, CA) ja 0,2 uM kutakin oligonukleotidialuketta [10], seuraavissa olosuhteissa: 94 ° C 30 sekuntia; 35 sykliä 94 ° C 30 sekuntia, 55 ° C 30 sekuntia, ja 68 ° C 1 min, jota seurasi lopullinen pidennysvaiheen 68 ° C: ssa 7 min. Kymmenen mikrolitraa PCR-tuote analysoitiin agaroosigeelillä elektroforeesilla. Loput 40 ui biotinyloitua PCR-tuotetta vangittiin streptavidiinilla päällystettyjä helmiä (GE Healthcare, Milwaukee, WI) ja pyrosekvensointi reaktio tehtiin käyttämällä PyroMark Gold Q96 (Qiagen), mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Joukko sekvenssointialukkeiden on aiemmin suunnitellut [10]. Prosenttiosuudet metylaation mitattiin kuusi ja viisi CpG sivustoja

RASSF1A

ja

DOK1

promoottorit, tässä järjestyksessä, ja ilmaistaan ​​keinot kaikkien CpG: t analysoitiin tietyssä geenissä. Arvioida DNA hypermetylaation taajuuksia HCC ja kirroottisilla näytteitä, cut-off-arvot

RASSF1A

ja

DOK1

saatiin kvantiili edustaa ylempi 95% metylaatiotasoilla ei-kirroottisilla näytteitä, kuten edellä on määritelty [10]. Siksi taajuudet DNA hypermetylaation edustivat prosenttiosuus HCC ja kirroottisten näytteitä metylaatiotasoilla yläpuolella raja-arvo kullekin geeniä.

Tilastollinen

Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen SPSS 20.0 ohjelmisto (IBM, Armonk, NY). Kruskal-Wallisin testiä (tai U-testi tarvittaessa) käytettiin vertaamaan metylaatiotasoilla HCC, kirroosipotilailla ja ei-kirroottinen maksa näytteitä sekä testata assosiaatioita metylaatiotasoilla ja kliinis ominaisuudet. Tyypin 1 virhe oikaistiin monimuuttujille. Erot katsottiin tilastollisesti merkitsevä

p

arvot alle 0,05.

Tulokset

DNA metylaatiotasoilla ei-kirroosipotilailla kirroottiset ja HCC kudosnäytteiden

pyrosekvensointi analysoitiin onnistuneesti vuonna 41 (20 HCC, 9 maksakirroosipotilailla ja 12 ei-kirroottiset) ja 31 (17 HCC, 7 maksakirroosipotilailla ja 7 ei-kirroottiset) kudosnäytteiden

RASSF1A

ja

DOK1

, vastaavasti. Tulokset kvantitatiivisen analyysin DNA: n metylaatio, ilmaistaan ​​keskiarvona osuus kaikista CpG: t analysoitiin tietyssä geeni, esitetään kuviossa 1. Kaiken metylaatiotasoilla olivat alhaisempia kuin kirroosipotilailla kohtalaista maksakirroosia, ja korkeampi HCC kudoksissa sekä geenejä. Mean hinnat metylaation

RASSF1A

ja

DOK1

olivat seuraavat: 16,2% ja 12,0% ei-kirroosipotilailla 26,1% ja 19,6% maksakirroosia, ja 59,1% ja 56,0% vuonna HCC kudoksia, vastaavasti (taulukko 2). Ei ole tilastollista eroa metylaatiotasoilla havaittiin välillä kirroottiset ja ei-kirroottiset kudoksissa (

RASSF1A

,

p

= 0,165;

DOK1

,

p

= 1.000). Olemme kuitenkin havaittu erittäin merkittävä ero metylaatiotasoilla välillä HCC ja ei-HCC kudosten sekä geenit (taulukko 2). Metylaatiotasoilla maksakirroosia kudoksissa potilailla, joilla ei HCC ja viereisten kirroottiset kudoksia potilailta, joilla HCC verrattiin myös. Erot näiden kahden ryhmän eivät olleet tilastollisesti merkitseviä (

RASSF1A

,

p

= 0,652;

DOK1

,

p

= 0,231). Korrelaatio on

DOK1

metylaatiotasoilla välillä havaittiin HCC- ja kirroosipotilaiden pariksi näytteitä, joissa HCC /kirroottiset pariksi kudosten näytetään samanaikaisesti korkein tai alhaisin metylaation. Tällainen korrelaatio ei havaittu

RASSF1A

metylaatio (tuloksia ei ole esitetty).

metylointi tasot mitattiin pyrosekvensointi eri CpG sivustoja ja ilmaistaan ​​keskiarvona osuus kaikista CpG: t analysoitiin tietyllä geenin. Tilastollinen merkitys DNA: n metylaation tasolla kuin kirroottisilla ja kirroottiset kudosten laskettiin vertaamalla HCC näytteitä.

DNA metylaatiostatuksen ja kliinis parametrit

assosiaatioita kliinis ominaisuuksien (ikä , sukupuoli, ja histologia) ja riskitekijät (HBV ja HCV-infektioiden) toisaalta ja metylaatiotasoilla HCC kudoksissa toisaalta, on esitetty taulukossa 3. Kaiken

RASSF1A

ja

DOK1

näytteillä samanlainen metylaation parametrien mukaan analysoitu. Löysimme tilastollisesti merkitsevää eroa

DOK1

metylaatiotasoilla peräisin ikäryhmässä toiseen (

p

= 0,036), korkeammat metylaatiotasoilla ryhmässä nuorempien (alle 40 vuotta) potilaiden . Lisäksi merkitsevästi korkeampi (

p

= 0,005) ja

DOK1

metylaatio havaittiin kohtalaisen differentiated- kuin huonosti eriytetty HCCs. Vaikka

RASSF1A

ja

DOK1

metylaatiotasoilla oli suurempi naisilla ja HBV kasvaimissa, tilastollista eroa voitu havaita. Myös ei assosioitunut kasvaimen koon ja metylaatiotasoilla (taulukko 3).

DNA hypermetylaation taajuuksia maksakirroosia ja HCC kudosten

analyysi DNA hypermetylaation taajuudet paljasti, että

RASSF1A

ja

DOK1

geenit hypermetyloitunut valtaosa (15/17, 88%) HCC kudoksissa (taulukko 4). Lisäksi, samanaikaisesti hypermetylaation kummankin geenin havaittiin 14/17 (82%) HCC kudoksiin. Kuitenkin matalammilla taajuuksilla hypermetylaation havaittiin keskuudessa kirroosipotilaiden kudoksissa (2/7, 29%

RASSF1A

, 3/7, 43%

DOK1

, ja 2/7, 29% molemmat geenit ). Mitä virus- tila, kaikki HBV positiivinen HCCs osoitti hypermetylaation in

DOK1

. Samanaikainen hypermetylaation Näiden geenien havaittiin useammin HBV (3/4, 75%) ja HCV (8/9, 89%) kasvaimia kuin HBV ja HCV negatiivisia (1/2, 50%). Samoin samanaikainen hypermetylaation havaittiin 2/3 (67%) HCV-positiivisia kirroosipotilaiden kudoksissa, mutta ei mitään (0/4) HCV negatiivisia (taulukko 4). Taajuudet hypermetylaation olivat samankaltaisia ​​kirroottiset kudosten potilailta, joilla HCC ja viereisten kirroottiset kudoksia potilailta, joilla HCC (tuloksia ei ole esitetty).

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa, olemme analysoineet määrällisesti metylaatio profiilia

RASSF1A

ja

DOK1

promoottori geenejä ei-kirroottinen ja kirroottiset maksa ilman HCC, sekä HCC ja kirroottisilla pariksi näytteitä. Molemmat geenit ovat tuumorisuppressoriproteiinia ominaisuuksia ja ovat mukana useita keskeisiä solujen prosesseja.

RASSF1A

on osallinen Ras-signalointireitin, joka on keskeinen rooli solusyklin kontrolli, mikrotubulusten vakauttaminen, soluadheesiota, solun liikkuvuus, ja apoptoosin [17].

DOK1

ilmentyy B- ja T-solujen sekä ydinsoluissa (makrofagit ja neutrofiilit), ja on mukana monenlaisia ​​immunoreseptorin signalointipolkujen [18]. Tässä

RASSF1A

ja

DOK1

metylaatiotasoilla osoittivat asteittaista lisäämistä mukaan sairauden etenemistä, huomattavasti korkeampi kasvainkudoksissa. Lisäksi havaitsimme erittäin korkeat

RASSF1A

(88%) ja

DOK1

(88%) hypermetylaation HCC näytteitä, joiden samanaikainen hypermetylaatiota 82%. Aiemmat tutkimukset käyttäen erilaisia ​​menetelmiä, samoin kuin erilaista CpG: t, ovat löytäneet myös korkea (76-100%) taajuudet

RASSF1A

hypermetylaation HCC [10, 19-21]. Toisaalta, vähän tietoa saatavilla metylaatio profiilia

DOK1

maksasyöpää. Yhdessä tutkimuksessa raportoitu esiintyminen hypermetylaation useimmissa (62%) HCC kudosten [10]. Tuloksemme vahvistavat näin hypoteesi yhdistyksen välillä epigenetic hiljentäminen näiden keskeisten solun geenit ja hepatokarsinogeneesin. Huomattavaa on, että löysimme samanaikainen

RASSF1A

ja

DOK1

hypermetylaation lähes 30% kirroosipotilaiden kudosten analysoitu. Poikkeava metylaatio havaittiin paitsi maksakirroosia näytteitä potilaista, joilla HCC, mutta myös niille, joilla ei HCC, mikä viittaa siihen, että kasvu metylaatiotasoilla alaryhmässä kirroottisten kudoksiin, mikä johtuu läsnä noin kasvainsolujen on epätodennäköistä. Nämä havainnot ovat sopusoinnussa sen käsityksen kanssa, että poikkeava metylaatio ei-transformoitujen hepatosyyteissä voi edeltää niiden syövän syntyyn ja edistää maksasyövän.

mahdollinen vaikutus etnisyyteen DNA: n metylaatio ei tutkittu laajasti. Kuitenkin aiemmat raportit ovat kuvanneet merkittäviä eroja globaalissa genomista DNA metylaatio mukaan etnisyys [22, 23]. On ehdotettu, että joidenkin geneettisten polymorfismien, kuten folaatin metaboloivia entsyymejä, voivat edistää etnisten erojen DNA: n metylaatio [24]. Lambert et ai. [10] ovat osoittaneet yhteyden metylaatiotasoilla vuonna useita geenejä ja maantieteellinen alue, jossa HCCs näytteille

RASSF1A

ja

DOK1

metylaatiotasoilla matalammat Thaimaassa kuin Ranskassa. Tutkimuksemme tukeutunut joukko CpG: t analysoidaan aikaisemmin, ja mitataan DNA metylaatiotasoilla kvantitatiivisen pyrosekvensointi metodologia [10]. Mielenkiintoista, havaitsimme korkeampi

RASSF1A

ja

DOK1

metylaatiotasoilla Brasilian HCC näytteissä verrattuna Thaimaasta (2,7 ja 3,1-kertainen) ja Ranskassa (1,9 ja 1,8-kertainen), tässä järjestyksessä. Nämä tulokset tukevat käsitystä, että geneettinen ja /tai ympäristötekijät voivat edistää etnisten /maantieteelliset erot DNA metylaatio keskuudessa HCC tapauksissa.

Useat tutkimukset ovat tutkineet mahdollisia assosiaatioita riskitekijöiden (HBV ja HCV-infektioiden) tai kliininen ominaisuudet (ikä, sukupuoli, ja histologia) ja DNA metylaatio HCC [9, 10, 19-21, 25]. Promoottori liittyvä CpG-saarekkeen metylaation on pidetty yhtenä lupaavimmista molekyylimuutokset joka voidaan havaita ikääntyminen [26]. Huomionarvoista, aiemman tutkimuksen mukaan kaikilla potilailla yli 40 vuotta oli

RASSF1A

promoottori metyloitu ei-neoplastisia soluja maksassa [27]. Olemme kuitenkin havaittu korkeampaa

RASSF1A

ja

DOK1

metylaation HCC kudoksissa nuoremmille ( 40 vuotta), jolla on tilastollisesti merkitsevää eroa

DOK1

metylaatio ja ikä (

p

= 0,036). Tässä kaikki HCC potilaat alle 40-vuotiaita oli kroonisesti tartunnan HBV, ja yksi voi olettaa, että nämä potilaat oli saanut tartunnan jo kauan sitten, luultavasti kautta äidistä lapseen. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että HBV X-proteiinin (HBx) kasvaa kokonais-DNA: metyylitransferaasin (DNMT) toiminnan säätelyä DNMTs, edistää hypermetylaatiota erityisiä tuumorisuppressorigeeneille [28]. Siksi viruksen tila nuorin potilaat ovat voineet vaikuttaa korkeamman metylaatiotasoilla havaittu tutkimuksessamme. Kuitenkin, aiemmat tutkimukset ovat löytäneet myös korkeampia

RASSF1A

ja

DOK1

metylaation HCC näytettä nuorempien ryhmissä, vaikka erot eivät olleet tilastollisesti merkitseviä [9, 10]. Lisäksi merkitsevästi korkeampi

DOK1

metylaatio maksakirroosia kudoksissa ikäryhmässä 40 vuoden aikana ovat aikaisemmin raportoitu [10]. Lopulta huomasimme, että tasot

RASSF1A

ja

DOK1

metylaatio oli suurempi kohtalaisen differentiated- kuin huonosti eriytetty HCCs, joilla on merkittävä ero

DOK1

(

p

= 0,005). Yksikään HCC potilaiden mukana tutkimuksessamme oli hyvin eriytetty kasvaimia, niin että parempi vertailu DNA: n metylaation ja kasvaimen eriyttäminen ei voitaisi saavuttaa. Aiemmassa työssä,

RASSF1A

metylaatio oli lähes sama riippumatta HCC erilaistumista [9], kun taas ei ole raportteja

DOK1

metylaatio ja HCC arvosana erilaistumisen tasalla.

Kaiken kaikkiaan tämä on ensimmäinen raportti epigeneettiset tekijöihin liittyvät HCC Brasiliassa. Tuloksemme vahvistavat, että hypermetylaatiota

RASSF1A

ja

DOK1

edistää hepatokarsinogeneesin ja on varhainen tapahtuma syövän kehittymisessä, todennäköisesti liittyy kliinisiä piirteitä sekä tärkeimmät riskitekijät. Siksi

RASSF1A

ja

DOK1

poikkeava metylaatio saattaa olla arvokas biomarkkeri varhainen diagnosointi HCC ja houkutteleva molekyylikohteena epigeneettisellä perustuvaan hoitoon. Ei-invasiiviset menetelmät, kuten mittaamalla hypermetylaatiota kiertävän soluttoman DNA seerumin /plasman, olisi edistettävä.