Krooninen sairaus

tiivistelmä

Etäpesäke muodostuminen on tärkeä syy erittäin huonon ennusteen pienisoluinen keuhkosyöpä (SCLC) potilasta. Molekyylien vuorovaikutus kumppanit säätelevä etäpesäkkeiden muodostumista SCLC ovat pitkälti tunnistamaton kuitenkin muista kasvain yksiköiden tiedetään, että kasvainsolut käyttävät adheesiomolekyylien on Leukosyyttiadheesion Cascade liittää endoteelin paikalla tulevaisuuden etäpesäke. Käyttäen ihmisen OH-1 SCLC rivi mallina, huomasimme, että nämä solut ilmaisivat E- ja P-selektiinin sitoutumiskohtia, mikä voi olla osittain johtuvan selektiini sitova hiilihydraatti motiivi sialyyli Lewis A. Lisäksi proteiini runkoverkkoihin tiedossa kuljettaa nämä glycotopes muissa solulinjoissa kuten PSGL-1, CD44 ja CEA voitiin havaita

in vitro

ja

in vivo

kasvanut OH1 SCLC-soluja. By Elintensisäistä mikroskopia hiiren suoliliepeen verisuoniston voisimme kaapata SCLC-solujen kun liikkuva pitkin aluksen seiniä, jotka osoittavat SCLC solut matkivat leukosyyttien liikkuvan käyttäytymistä kannalta selektiinin ja selektiiniligandin vuorovaikutus in vivo osoittaa, että tämä mekanismi voisi todellakin olla tärkeitä SCLC-solujen siemeniä etäispesäkkeitä . Näin ollen, muodostuminen spontaani etäispesäkkeitä väheni 50%, kun OH-1-soluja ksenosiirrettyjä osaksi E- /P-selektiini-hiirissä verrattuna villityypin hiiriin (p = 0,0181). Koska etäpesäkkeiden muodostumista ei täysin kumottiin selektiinin hiirillä, päättelimme, että tämä tartunta Cascade on tarpeeton ja että muiden molekyylien tämän Cascade välittäjänä etäpesäke muodostumista samoin. Käyttämällä useita näistä adheesiomolekyylien vuorovaikutusta kumppanien oletettavasti tehdä SCLC-solujen niin hyvin metastaattinen.

Citation: Heidemann F, Schildt A, Schmid K, Bruns OT, Riecken K, Jung C, et al. (2014) Selektiinit Mediate pienisoluinen keuhkosyöpä systeeminen etäpesäke. PLoS ONE 9 (4): e92327. doi: 10,1371 /journal.pone.0092327

Editor: Andreas-Claudius Hoffmann, Länsi-Saksan Cancer Center, Saksa

vastaanotettu: 22 marraskuu 2013; Hyväksytty: 21 helmikuu 2014; Julkaistu: 03 huhtikuu 2014

Copyright: © 2014 Heidemann et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Bundesministerium für Bildung und Forschung (TOMCAT myöntää määrä 01EZ0824, https://www.bmbf.de/) ja Landesexzellenzinitiative Hampuri (Nanoteknologia in Medicine – NAME). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Pieni keuhkosyöpä (SCLC) hetkellä edustaa 13% kaikista keuhkosyöpää tyyppejä ja on kaikkein aggressiivinen kaikista keuhkojen kasvain yksiköt [1]. Nopean kasvain kaksinkertaistaa aikaa ja varhaisen haematogenous levisi, 5 vuoden pysyvyys jää alle 5% mediaani eloonjäämisaste vain muutaman kuukauden [2], [3]. SCLC tyypillisesti metastasizes aivoihin, maksaan, luuytimeen tai lisämunuaisten. Koska muodostumista etäpesäkkeiden on yleensä johtava syy syövän kuoleman ja perustuu siihen, että terapeuttinen edistysaskeleet SCLC ei silmiinpistävän kasvattaa pitkällä aikavälillä säilyttämään potilaista, tarkempi käsitys Metastasoituneessa kaskadi SCLC on kiireellisesti.

etäpesäke – kuten tunnusmerkki syöpä – on monivaiheinen prosessi alkaa hallitsematon kasvu ensisijaisen kasvainsolun joka voittaa tyvikalvon ja lähettää angiogeenisten signaaleja niin, että uusia verisuonia kasvaa primaarikasvaimen solumassan [4], [5]. Osajoukko kasvainsolujen irtoaa primaarikasvaimen ja siirtyy verenkiertoon. Kiertävä kasvainsolujen täytyy paeta verenkiertoon hyökätä sidekudoksen kaukaisen elimen. Siksi verenkierrossa kasvainsolut ovat vuorovaikutuksessa normaalin endoteelin paikalla kohde-elimeen on valkosoluja tavoin. Kun he ovat transmigrated endoteelin ja ovat asettuneet sidekudosstroomasta, kasvainsolut on jaettava uudelleen, jotta muodostuu kliinisesti havaittavan etäpesäke [6], [7].

Leukosyyttiarvon käyttää lukuisiin soluadheesion molekyylejä liittää ja transmigrate endoteelisolujen jotta jättää huomioon sidekudosstroomasta paikalla tulehdusta. Tämä tartunta Cascade koostuu sarjasta toisiinsa liittyviä vaiheita alkaen jaon, jonka jälkeen liikkuvan, tarttuvuus, intraluminaaliset indeksointi ja viimeistellään parasellulaarista tai transsellulaarinen kulkeutumista endoteelisolujen [8]. Ensimmäinen leukosyyttien liikkuvan luminaalipinnalla endoteelisolujen välittää endoteelisolujen puolella luokan hiilihydraattia sitovan proteiineja, joita kutsutaan E- ja P- selektiinit. Nämä kaksi selektiineiksi sitoutuvat niiden hiilihydraatti ligandien leukosyyttien Ca

2 + – riippuvaisella tavalla. Hiilihydraatti determinantti koostuu sialyyli Lewis

X tai sialyyli Lewis

tetrasakkarideja [9]. Tunnetut selektiiniligandin kuljettaa proteiinin runkoverkot ovat PSGL-1, ESL-1 ja CD44 [10]. Lisäksi leukosyyttien [11], verenkierrossa olevia kasvainsoluja on osoitettu näihin tunnettuihin selektiiniligandeille [6], [7], [12]. Esimerkiksi proteiini runkoverkot PCLP-1 ja CEA (CEACAM5) paksusuolen ja eturauhasen syövän solut voidaan glykosyloitu hiilihydraatti- rakenteita, jotka sitoutuvat E-selektiini [13], [14], [15].

hypoteesi, että metastaasit muodostuminen välittyy selektiineiksi tukevat useat spontaani etäpesäkkeiden malleja ihmisen kasvainsolujen ksenosiirrettyjä osaksi immuunivajaisiin hiiriin. HT29 koolonkarsinoomasoluja [16] sekä DU4475 rintasyöpäsoluissa [17] istutetaan E- /P- selektiinin hiirillä, oli huomattavasti vähentynyt spontaanien etäpesäkkeiden keuhkoissa verrattuna selektiini-ilmentävien villityypin hiirissä. Se voisi myös osoitettava, että vatsakalvon etäpesäke haiman adenokarsinooma pienennettiin E- /P- selektiinin hiirissä [18].

Viimeaikaiset tutkimukset OH-1 solulinja edustaa klassista SCLC fenotyyppi [19] paljasti luja liitos OH-1-solujen E-selektiinin fuusioproteiinin fysiologisissa virtauksen olosuhteissa. OH-1-soluissa näkyy selektiinin sitoutumiskohdat sekä sialyyli Lewis x- ja PSGL-1 [20]. Siksi meidän tutkimuksessa keskityttiin vaikutuksesta selektiineiksi kehittämisessä etäpesäkkeitä SCLC ja niiden mahdolliset selektiiniligandeille päälle SCLC soluissa.

Materiaalit ja menetelmät

Solun viiva

ihmisen pienisoluisen keuhkosyövän solulinjaa OH-1 saatiin keuhkopussieffuusio ja ystävällisesti Uwe Zangemeister-Wittke (University of Bern, farmakologian laitos).

OH-1-soluja viljeltiin

in vitro

käyttäen RPMI 1640-alustassa (Gibco /Life Technologies, Paisley, Skotlanti), täydennetty 10% lämmöllä inaktivoitua naudan sikiön seerumia (FBS, Gibco), 2 mM L-glutamiinia (Gibco), 100 U /ml penisilliiniä ja 100 ug /ml streptomysiiniä (Gibco) tavanomaisissa soluviljelmissä ehto (37 ° C, suhteellinen kosteus 100%, 5% CO

2).

Lentivirusvektorikonstruktit transduktio

bioluminenssina kuvantaminen ja Elintensisäistä mikroskopia OH -1-LUC /mCherry solut, jotka ilmentävät lusiferaasia alkaen

Photinus pyralis

ja fluoresoivan proteiinin mCherry syntyi. Tätä tarkoitusta varten Luc2 cDNA (Addgene Plasmidi # 24337) kloonattiin 3

kolmannen sukupolven HIV-1 johdettujen SIN vektori LEGO-IC2-Puro

+ [21]. Lisäksi mCherry kuten markkerigeeni, tämä lentivirusvektori ilmaisee puromysiini-N-asetyyli-transferaasi, joka antaa resistenssin puromysiini. Lentivirus- partikkeleita tuotettiin, kuten on kuvattu [22]. Lyhyesti, 293T-solut ko-transfektoitiin vektorilla plasmidi LEGO-IC2-Puro

+ – Luc2 ja pakkaus plasmidit phCMV-VSV-G, pMDLg /pRRE ja pRSV-Rev kalsiumfosfaattisaostuksella. Supernatantit, jotka sisältävät lenti- Partikkelit otettiin talteen 24 h transfektion jälkeen. Toiminnallinen tiitterit mitattiin FACS-analyysillä 3 päivää transduktion jälkeen 293T-solut. Lentivirus transduktion OH-1-soluja 1 x 10

5 solua /ml maljattiin 24-kuoppaisille levyille. Seuraavana päivänä sisältäviä supernatantteja viruspartikkelit ja 8 ug /ml polybreeniä (Sigma) lisättiin 24 tuntia. Valintaa varten transdusoitujen OH-1-solut, tavanomaisessa viljelyväliaineessa oli täydennetty 2,5 ug /ml puromysiiniä.

virtaussytometria

Jotta voitaisiin arvioida sitoutumiskohtien ja niiden proteiinipitoisuus runkoverkot soluja solun pinnan OH-1-solut, viljellyt OH-1-LUC /mCherry solut irrotetaan soluhajotusprosessin Buffer (Gibco, Carlsbad, USA) ja värjättiin sialyyli Lewis A (Abcam, laimennus 1:1000), CEA (Cell Signalling, laimennus 1:200), CD44 (ABD Serotec, laimennus 1:1000), PSGL-1 (Santa Cruz, laimennus 1:200), E- ja P-selektiini sitoutumiskohdat itse käyttämällä E- ja P-selektiini-fuusioproteiinit (R D Systems, laimennus E-selektiinin 1:1000, P-selektiinin 1:100), EpCAM (Dako, laimennus 1:59), Muc18 (GeneTex, 1:1800) ja NCAM (R 50% kasvainsoluista oli kohtalaisesti tai voimakkaasti värjätään.

Tilastollinen

Survival konstruoitiin käyttäen Kaplan-Meier menetelmällä ja verrattiin log-rank testata. Kahden pyrstö P 0,05 pidettiin tilastollisesti merkittävänä. Tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen ohjelmistoa GraphPad Prism (Graphpad Software, Inc., CA, USA.) B

Ethics lausunto

menetelmät suorittamiseksi eläinkokeet oli sopusoinnussa UKCCCR suuntaviivojen eläinten hyvinvoinnin syöpätutkimukseen. Kokeilu valvoo institutionaalisten eläinten hyvinvoinnista ja hyväksymä paikallinen lupaviranomainen (Behörde für Soziales, Familie, Gesundheit und Verbraucherschutz; Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz, Hampuri, Saksa, projekti ei. 92/09).

tulokset

adheesiomolekyylien ilmentymistä OH-1 SCLC-soluja kasvatettiin

in vitro

ensin tutkittiin läsnä E- ja P-selektiini sitoutumiskohtia, jotka olivat molemmat läsnä OH-1-soluja kasvatettiin

in vitro

(Fig. 1). Analysoida tarkemmin niiden luonne sitoutumiskohtien, tutkimme esiintymisen E- ja P-selektiiniligandin sialyyli Lewis A, joka oli myös läsnä. Seuraavaksi analysoitiin proteiini selkäranka tunnettujen sialyyli Lewis A ja sialyyli Lewis X kantajia eli CEA, PSGL-1 ja CD44, jotka olivat myös läsnä. Lisäksi tutkimme OH-1 edelleen solunpintamolekyylien tiedetään olevan osallisena etäpesäke muu syöpä yksiköiden kuin SCLC. EpCAM, Muc18 sekä hermosolujen adheesiomolekyyli NCAM voitiin havaita myös korkealla ekspressiotaso.

OH-1-soluja, kuten solulinja neuroektodermaalinen alkuperää, ovat positiivisia NCAM ja EpCAM, joka voi olla havaitaan virtaussytometriseen analyysiin ja voi siten toimia markkerina näitä soluja kasvatettiin hiirissä. Solut osoittavat sitoutuminen E- ja P-selektiinin fuusioproteiinin. Glykosylaatiomotiivin sialyyli Lewis A sitovan kumppanin tunnustettu selektiinit, voitiin havaita kanssa CA19-9 vasta-aineella. Solulinjan OH-1 esittelee useita tunnettuja proteiineja, jotka tiedetään olevan proteiinin runkoihin selektiinin sitovia hiilihydraattitähdettä kuten PSGL-1, MUC18, CD44 ja CEA. Isotyyppikontrolleja näkyvät pisteviivat.

E- ja P-selektiini sitominen SCLC soluja kasvatettiin

in vivo

käyttämällä FACS (Fig. 2), tutkimme

in vivo

kasvanut OH-1-solujen primaarisen ksenosiirrettyjä kasvaimia ovat säilyttäneet kyvyn sitoutua selektiinit fuusioproteiineja. Solut kerättiin ensisijainen OH-1-LUC /mCherry kasvaimia kaksinkertainen leimattiin anti-CEA ja ihmisen E- tai P-selektiinin chimaera. Lähes kaikki solut (78%) olivat molemmat positiivisia anti-CEA-värjäys ja E-selektiinin sitoutuminen (Fig. 2). Kaksinkertainen värjäys anti-CEA ja ihmisen P-selektiinin chimaera paljasti, että 36% soluista oli sekä positiivisia että P-selektiinin sitoutumisen ja CEA (Fig. 2C).

eristetty OH-1-LUC /mCherry solujen primaarikasvainten värjättiin samanaikaisesti vastaan ​​CEA ja E- tai P-selektiinin sitoutumisen ja FACS analysoitu. (A) OH-1-LUC /mCherry soluista ei osoittanut sitoutumista isotyyppiä ja FC-Chimaera valvontaa. (B) Lähes kaikki solut olivat CEA ja E-selektiinin sitoutumisen positiivinen, sen sijaan (C) kaksi kolmasosaa soluja P-selektiinin sitoutumisen negatiivinen. Isotyyppikontrolleja näkyvät pisteviivat.

In vivo

käyttäytymistä verenkierrossa SCLC-solujen

OH-1-LUC /mCherry soluja liikkuvan TNF-α käsitelty verisuonten seinämien kuten leukosyytit tunnistettiin käyttämällä nopeaa Elintensisäistä konfokaalimikroskopia (kuvio 3A ja Movie S1). Kuten myös todettu liikkuvan leukosyyttien, liikkuva nopeus molempien solutyyppien mitattiin. Leukosyytit osoitti keskimääräinen liikkuvan nopeus on noin 50 um /s ja OH-1-LUC /mCherry solujen 350 um /s (Fig. 3B). Näin ollen, keskimääräinen kierimisnopeutta OH-1-LUC /mCherry soluissa oli noin seitsemän kertaa nopeammin kuin leukosyyttien, mikä osoittaa, että SCLC-solujen matkivat leukosyyttien liikkuvan käyttäytymistä, mutta vähemmässä kiinni tehokkuutta.

Rolling käyttäytymistä of pistetään loisteputki OH-1-LUC /mCherry soluja (mCherry, punainen) mesenteerisissä suonissa (heijastus tila, harmaa) visualisoitiin reaaliajassa on nopea konfokaalisella Elintensisäistä kuvantaminen. (A) Liikkuvan käyttäytyminen yhden OH-1-LUC /mCherry solujen havaittiin yli 27 sekuntia. (B) keskimääräinen vierimisnopeus injektoidun OH-1-LUC /mCherry soluja ja endogeenisten leukosyyttien suoliliepeen suonet määritettiin nopea Elintensisäistä kuvantaminen (Nikon A1R -konfokaalimikroskoopilla). Mitta-asteikko: 500 um (F) ja (H), 50 um (G).

SCLC metastaasien immuunivajaissa hiirillä

tutkimiseksi spontaani etäpesäkkeiden paikalle SCLC solut OH-1-LUC /mCherry solua ihon alle injektoitiin SCID-hiirissä kuin ksenografti. Jotta ei-invasiivisesti tarkistaa OH-1-LUC /mCherry ensisijainen

in vivo

kasvaimen kasvua, MR ja bioluminesenssi kuvantaminen tehtiin. Päivänä 18 jälkeen OH-1-LUC /mCherry rokotus olemassaolo OH-1-LUC /mCherry primaarikasvaimen, joka esiintyi hyper intensiivinen vaurio T2-painotettu aksiaalinen MR kuvia, osoitettiin inokulaatiokohdassa välissä scapulae (Fig. 4A). Vastaava bioluminesenssi kuvat näytetään luminesenssi johdettuja signaaleja OH-1-LUC /mCherry kasvaimia (Fig. 4B). Ensisijaisena kasvaimen kasvu oli liian nopeasti sijoittaa pieniä etäpesäkkeitä ei-invasiivinen, primaarikasvaimen resektoitiin päivänä 54 sen jälkeen, kun OH-1 siirrostuksen ja 63 päivää myöhemmin hiiret tutkia uudelleen ja

in vivo

luminenssi. Luminenssi signaalit voitiin havaita alalla kuono, ylempi rinnassa ja vasen takajalka (Fig. 4C). Validoida läsnäolo etäpesäkkeitä kudosten näillä paikoilla leikattiin jälkeen uhrataan eläinten ja bioluminisenssimääri- oli tutkia uudelleen

ex vivo

. Intensiivinen signaaleja voitaisiin todentaa keuhkoissa (Fig. 4D) ja polvinivelen (Fig. 4E), kun taas sydän ei osoittanut mitään signaalia (Fig. 4D). Voit tarkistaa, että bioluminesoiviin alueet olivat todellakin etäpesäkkeitä histologinen tutkimus suoritettiin. Vital kasvainsolujen OH-1-LUC /mCherry kasvain sijaitsi noin keski kuolion (Fig. 4F). Keuhkot ja luu etäpesäkkeitä voidaan vahvistaa lähellä terveen kudoksen.

OH-1-LUC /mCherry solut implantoitiin ihon alle (A) ja kasvatettiin, kuten primaarikasvain (a) 18 päivä työmaalla lapaluiden välistä (b) jossa on hyper-intensiivistä ulkonäkö kaksiulotteisessa turbo spin-kaiku (TSE) sekvenssi (MR kuvat aksiaalisuunnassa suunta) ja positiivinen bioluminenssi signaalin (b) vastaavaa OH-1-LUC /mCherry kasvain kuin paneeli A. ensisijainen kasvain poistettiin kirurgisesti 51 päivää sen jälkeen, kun OH-1-LUC /mCherry solun injektio. (F) Vastaavat parafiinileikkeitä resektoitua kasvaimen paljasti elävien kasvainsolujen (e) noin keski kuolion (f). (C) Luminenssi signaaleihin metastasizing OH-1-LUC /mCherry soluja in vivo oli havaittavissa aloilla kuono, reisiluun ja rintakehän 117 päivää injektion jälkeen. Elimet poistettiin ja bioluminescent signaalit vahvistettiin ex vivo. (D) Keuhkot osoitti useita luminesenssi täplät (c), kun taas sydän (d) ei osoittanut mitään merkkejä luminenssi. (G) H 0,0001) (Fig. 5B ja taulukko 2). Keuhkot ja jalat poistettiin ja analysoitiin erikseen bioluminesenssin intensiteettiä. Voisimme osoittanut merkittävää eroa elinten paino (n = 12) ja valitse hiiriä (n = 18), jossa vähennetään bioluminenssia signaali keuhkoissa (Fig. 5C) ja jalat (Kuva. 5D) päässä selektiini-puutoshiirissä verrattuna wT hiiret osoittaa huomattavasti vähentää metastaasilastista että selektiini hiirissä (Mann-Whitney testi, p = 0,0003).

OH-1-LUC /mCherry solut injektoidaan subkutaani- E- /P-selektiinin double hiirten (valitse) tai villityypin pentue hiiret (wt) ja tuloksena kasvaimia kasvatettiin 31-41 päivää. Kasvaimet resekoitiin ja painotettu. (A) ei tilastollista eroa koskevat kasvaimen painoa voitiin määrittää (opiskelijat t-testi, p = 0,5025). Kasvain resektoitiin hiiret elivät, kunnes ne saavuttivat päätepisteeseen kriteerit. (B) Kaplan Meier selviytymisen käyrä osoittaa merkittävästi vähentynyt mediaanielossaolosta paino (n = 20) hiirillä verrattuna valitse (n = 20) hiirillä (log-rank testi, p 0,0001). Elimet poistettiin ja merkittävää eroa verrataan wt (n = 12) ja valitse hiiret (n = 18) määritettiin kannalta bioluminenssi poistetun keuhkoissa (C) ja jalat (D) (Mann-Whitney testi, p = 0,0003 ). Rinnakkaisessa lähestymistapa OH-1-soluja injektoidaan subkutaani- tietyissä (n = 5) tai villityypin (n = 3) hiiret ja kasvaimia kasvatettiin 36-65 päivää. Elimet poistettiin ja tuumorin paino määritettiin. Ei ollut tilastollisesti merkittävää eroa paino ensisijaisen OH-1 kasvainten välillä hiirikantojen (E) (Studentin t-testi, p = 0,6489). Lukumäärät spontaani keuhkometastaaseista valikoiduilla ja villityypin hiirien määritettiin. Huomaa, että määrä etäpesäkkeiden vähensi tilastollisesti merkitsevästi 50% valikoiduilla hiirillä verrattuna villin tyypin hiiriin (F) (opiskelijat t-testi, p = 0,0181).

Jos haluat jättää vaikutus lentiviruksen transduktion on etäpesäkkeitä korko olemme analysoineet vanhempien OH-1 solulinja on rinnakkainen lähestymistapa. OH-1-soluja injektoidaan subkutaani- tietyissä (n = 5) tai villityypin (n = 3) hiiret ja kasvaimia kasvatettiin 36-65 päivää. Keuhkot ja ensisijainen tuumorit poistettiin ja tuumorin paino määritettiin. Keskimääräinen kasvaimen paino (Fig. 5E) oli 1,53 g (n = 3) villityypin ja 1,72 g (n = 5) in selectin- double-hiirillä. Ei ollut tilastollisesti merkittävää eroa paino ensisijaisen OH-1 kasvainten välillä hiirikantojen (Studentin t-testi, p = 0,6489). Lisäksi kaikki hiirille kehittyi spontaani micrometastases keuhkoihin. Kuitenkin, määrä metastaasit keuhkoihin vaihteli huomattavasti villityypin ja E /P-selektiini-puutteellisia hiiren kanta. Määrä etäpesäkkeiden vaihteli villityypin hiirissä vaihteli 47560 ja 72165 (keskiarvo: 61076) ja E /P-selektiinin double-hiirillä etäpesäkkeitä vaihteli 16790 ja 53317 (keskiarvo: 28446) (Fig. 5F). Huomaa, että puuttuminen E- ja P- selektiineiksi vähensi spontaanisti keuhkojen etäpesäkkeet 50% (opiskelijat t-testi, p = 0,0181).

immunohistokemiallinen havaitseminen selektiiniligandin proteiinin kulmakivistä SCLC-solujen

in vivo

tutkimiseksi että selektiiniligandeille ja edelleen solun pinnan molekyylejä ilmaistiin

in vivo

perusasteen kasvaimia ja etäpesäkkeitä olemme analysoineet niiden ilmentyminen immunohistokemiallinen (Fig. 6). Vakiintuneet selektiiniligandin CEA voitu havaita ensisijainen kasvaimia ja jopa havaittu kohonneen ekspression keuhkoissa ja luun etäpesäkkeitä. CD44 ja EpCAM, tiedetään olevan läsnä erilaisissa kasvaimen yksiköiden, myös ilmaistu kasvain ja keuhkojen etäpesäkkeet suuressa määrin. Lisäksi SCLC markkeriproteiinia PGP 9,5, joka tunnetaan myös nimellä MVA-L1, on runsaasti ilmentää soluissa primaarikasvaimen, keuhkot ja luu etäpesäkkeitä.

Ensisijainen OH-1 kasvaimen sekä spontaania OH-1 keuhkojen ja luuston etäpesäkkeet positiivisesti värjättiin CD44, CEA, EpCAM ja PGP9.5 (punainen = positiiviset solut).