Krooninen sairaus

tiivistelmä

validointi ehdokas biomarkkereiden usein vaikeuttaa puute luotettavaa keinoa arvioida ja vertailla suorituskykyä. Esitämme tässä referenssisarjan seerumin ja plasmanäytteiden helpottaa validointia biomarkkereita kokoisen haimasyöpä. Viittaus setti sisältää suuren kohortin vaiheen I-II haimasyövän potilaat, rekrytoidaan 5 eri toimielinten ja asianomaisten kontrolliryhmiin. Olemme tunnettu suorituskykyä nykyiset parhaat serologinen biomarkkeri haimasyöpä, CA 19-9, käyttäen plasma näytteitä viittaus asetettu tarjoaisi vertailukohdan tuleville biomarkkerina tutkimuksia ja edistää tietämystä CA 19-9 varhaisen vaiheen haimasyöpä ja kontrolliryhmiin. CA 19-9 erottaa haimasyöpä Terveistä ja krooninen haimatulehdus ryhmiä, joiden keskimääräinen herkkyys ja spesifisyys 70-74%, samanlainen kuin aiempien tutkimusten avulla kaikissa vaiheissa haimasyöpä. Krooninen haimatulehdus potilaat eivät näytä CA 19-9 kohoamista, mutta joilla on hyvänlaatuinen sappitietukos oli kohoamista lähes yhtä korkea kuin syöpäpotilailla. Saimme lisätietoja biomarkkereiden vertaamalla kahta erillistä määrityksiä. Kaksi CA 9-9 määrityksissä sovittu hyvin yleistä suorituskykyä mutta poikkesivat mittauksissa yksittäiset näytteet, mahdollisesti johtuen hienoisia eroja vasta-spesifisyys, joka käy ilmi glykaania erilaisia ​​analyysi. Siten referenssisarjassa lupauksia olla arvokas resurssi biomarkkereiden validointi ja vertailu sekä CA 19-9 Tässä esitetyt tiedot on hyötyä benchmarking ja tutustumiseen suhteita CA 19-9.

Citation: Haab BB Huang Y, Balasenthil S, Partyka K, Tang H, Anderson M, et al. (2015) lopullinen karakterisointi CA 19-9 in kokoisen Haimasyöpä Käyttäen Reference Set of Serum ja plasma näytteet. PLoS ONE 10 (10): e0139049. doi: 10,1371 /journal.pone.0139049

Editor: Zoltán Rakonczay Jr., Szegedin yliopisto, Unkari

vastaanotettu: 18 kesäkuu 2015; Hyväksytty: 07 syyskuu 2015; Julkaistu: 02 lokakuu 2015

Tämä on avoin pääsy artikkeli, vapaa kaikki tekijänoikeudet, ja saa vapaasti jäljentää, levittää, välittää, modifioitu, rakennettu, tai muuten käyttää kuka tahansa laillista tarkoitusta. Teos on saatavilla Creative Commons CC0 julkisuuteen omistautumista

Data Saatavuus: Tällä CA19-9 tiedot ovat saatavilla olevat tiedot.

Rahoitus: Tämä työ rahoitettiin Early Detection Research Network of National Cancer Institute (U01CA152653 BB Haab, RE Brand, ja P. Allen, ja U01CA111302 AM Killary, ML Frazier, ja S. sen). Kirjoittajat myös kiittää Early Detection Research Network tarjoamiseksi haiman näytteitä käytetään tässä tutkimuksessa.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

ennakot tietoa haimasyövän ovat tuottaneet innostusta näkymiä merkittävää edistymistä tätä tappavaa tautia [1, 2]. Muiden alueiden alalla on nähty kehitys ymmärtämään geneettisen aloittamista ja taudin etenemisen [3], rooli strooman edistämisessä syövän ja estää systeemisiä hoitoja [4-7], ja rooli plastisuus syöpä solu [8]. Tätä tietoa on perustava kehittämiseen tehokkaiden hoitojen parannuksia selviytyminen riippuu myös parempaan havaitsemiseen, diagnostiikka ja hoito päätöksiä, jotka perustuvat yksittäisen potilaan ominaisuuksista. Meidän täytyy edetä kykymme havaita haimasyövän varhaisessa vaiheessa, kun se on potentiaalisesti parannettavissa kirurgisella resektio ja tarvitsemme parempia tapoja määrätä reitin huolta siitä, että on tehokkainta kullekin potilaalle.

Molecular biomarkkerit lupaavat tarjota tällaisia ​​tarkkoja, potilaan tiedot, joita [9], mutta niiden kehittäminen ja toteuttaminen on haastavaa ja hidasta. Haimasyövässä tutkimuksen merkittävä pullonkaula kehittämiseen molekyyli biomarkkereiden on rajalliset resurssit arvioimiseksi ja vertailla ehdokas biologisten merkkiaineiden avulla kerättävien alkuvaiheessa syövän kehityksen, kun resektio katua on mahdollista. Merkittävä määrä aikaa yleensä tarvitaan ennen tarkan arvion biomarkkereiden on mahdollista ja ennen päätöksiä lisäinvestointeja voidaan tehdä. Useammin kuin ei, lupaavia tuloksia alussa tutkimuksia ei perusteltuja seurata tutkimusten tai suorituskykyä biomarkkereiden ei vastaa välillä tutkimuksissa [10, 11]. Johdonmukainen ja systemaattinen lähestymistapa arvioida ehdokkaan biomarkkereiden tarvitaan.

Vastatakseen tarvetta arvioida haimasyövän biomarkkerit, yhteistyönä ryhmä sisällä Early Detection Research Network (EDRN) hiljattain kehittänyt viittaus asettaa ihmisen yksilöiden . Motivaatio kehittää referenssisarjassa oli mahdollistaa lopullisen arvioinnin ehdokas biomarkkereita haimasyövän, jotta voitaisiin antaa tarkkoja vertailuja ehdokas biomarkkereiden, ja testata yhdistetyn käytön erilaisia ​​biomarkkereita. Yhteiset yksilöiden, kerättyjen alle tiukimmat useilla toimielimille ja käsittää potilasryhmissä eniten merkitystä kliiniset vaatimukset, on tarpeen näiden tavoitteiden saavuttamiseksi [12]. Useat periaatteet ohjaavat luomista asetettu. Setti oli sisällyttää näytteitä useista laitosten siten, että se ei edusta vain yhden maantieteellisen alueen; Näytekokoelmatodistuksen oli seurata yhden, yksityiskohtainen vakiotoimintamenettely, jotta estetään bias sarjaan; potilaat olivat sisällyttää monet resektoitavissa syöpä, joka on kaikkein vaikea havaita vielä tärkeintä myönteisiä vaikutuksia; ja verrokeilla sisältää sekä terveitä ihmisiä ja joilla on hyvänlaatuinen ehtojen haima, koska tietyt hyvänlaatuiset olosuhteet voivat olla vaikea erottaa haimasyövän ja voisi aiheuttaa kohonneet syöpää biomarkkereiden.

Mitä potilasryhmässä päätimme koota näytteitä potilaista, joilla on vaiheen I tai II syöpä vahvistanut kirurginen patologia. Tällaiset potilaat ovat oikeutettuja kirurginen hoito ja on keskimäärin huomattavasti parempia tuloksia kuin muualla haimasyövän potilaille. Havaitsemaan syöpä jopa aikaisemmin, ts karsinooma in situ tai Panin-3, olisi parempi havaitseminen vaiheessa I koska potilaat, joilla on vaiheen I tyypillisesti vielä kehittyä toistumisen leikkauksen jälkeen. Tällä hetkellä meillä ei ole tapa rutiininomaisesti vahvistaa läsnäoloa Panin-3, joten kokoonpano näytteitä kohortin näillä potilailla ei ole vielä mahdollista. Vaihtoehtoista lähestymistapaa käytettiin aikaisemmin oli koota näytteitä, jotka oli kerätty ennen diagnoosin haimasyövän, tunnistetaan tarkastelun seurannan tietoja massiivisen julkisen terveydenhuollon tutkimuksia löytääkseen henkilöitä, jotka lopulta kehittyi haimasyöpä [13, 14]. Tällaiset näytteet ovat arvokkaita tutustumiseen toteutettavuutta seulonta syövän, mutta niitä ei ole suunniteltu testaamaan havaitsemiseksi ennen vaiheeseen I tai II, koska taudin vaiheesta ei tiedetä. Lisäksi, koska on vaikeaa saada tällaisia ​​näytteitä, ne yleensä ovat periksi vain pieni määrä tutkimuksia. Siksi nähden kokoonpanossa näytteen joukko, joka voidaan käyttää monia tutkimuksia ja että olisi merkitystä tärkeä tavoite haimasyövän hoidossa, havaitseminen enemmän syövät vaiheessa, joka on oikeutettu leikkaus.

CA 19-9 määritys on nykyinen paras serologinen biomarkkereiden haimasyöpä. CA 19-9 monoklonaalinen vasta-aine nostettiin vastaan ​​paksusuolen ja peräsuolen syövän solulinja [15], ja antigeeni se sitoutuu on hiilihydraatti rakenne on kiinnitetty erilaisia ​​proteiineja ja lipidejä [16]. Vaikka sen pitoisuus veressä liittyvät vahvasti haimasyöpä-se on kohonnut 70-80% haiman syöpäpotilaiden ja noin 20% potilaista, joilla lieviä olosuhteita haiman [17] -its suorituskyky ei riitä syövän diagnosoimiseksi, kuten riskin sekä vääriä negatiivisia ja vääriä positiivisia diagnooseja on liian korkea. Noin 5% haimasyövän potilaat eivät nosta CA 19-9 johtuu ituradan mutaatioista johtaa kyvyttömyys tuottaa glykaanirakenteeseen [18], ja toinen joukko potilaita eivät nosta CA 19-9 tuntemattomista syistä. Epäspesifinen kohonneita CA 19-9 riippuvat lähinnä vahinkoa sappitiehyen tai osia haiman kanavat, jotka on päällystetty CA 19-9 antigeeni. Uusia biomarkkereita diagnosoimiseksi kokoisen syövän saa paremmin kuin CA 19-9, niin herkkyys ja spesifisyys, joko yhtenä biomarkkeri tai todennäköisemmin yhdistelmänä.

tavoitteet Tämän tutkimuksen oli 1) määrittää suorituskykyä CA 19-9 on referenssisarjassa; 2) selkeämmin määritellä suorituskykyä CA 19-9 vaiheen I-II tauti ja viitaten mahdollisesti sekoittavia olosuhteet hyvänlaatuinen sappitietukos ja krooninen haimatulehdus; ja 3) vertailla suorituskykyä ja määritellä alkuperästä erot erillisten CA 19-9 määrityksiä. Ensimmäinen tavoite oli tarpeen antaa vertailukohdan, jonka avulla voimme vertailla ja arvioida ehdokas biomarkkereita. Toisena tavoitteena oli välttämätön, koska monet edelliset tutkimukset CA 19-9 olivat vahvasti painottuen myöhäisvaiheen syöpä, lähinnä näytteitä myöhäisvaiheen syöpäpotilaille ovat helpommin saatavilla. Potilaat, joilla on vaiheen I-II tauti on mahdollisuuksia parantaa tuloksia leikkaukseen, niin tarkka ja varhaisen havaitsemisen tämän tason tauti on ratkaisevan tärkeää. Kolmantena tavoitteena oli tarpeen, koska aiemmissa tutkimuksissa CA 19-9 haimasyövän on eriäviä tuloksia, todennäköisesti johtuen eroista erityispiirteet vasta [19] tai eroja määrityksessä alustoilla. On tärkeää ymmärtää sekä näiden erojen vaikutukset päätöksiä yksittäisille potilaille. Lisäksi lisätietoja glykaanien sitoo kunkin CA 19-9-vasta mahdollisesti auttaisi luonnehtia glykaanien tuottama syöpäpotilaiden ja laatia strategioita havaitsemiseksi suurempi osuus potilaista kuin mahdollista nyt.

Materiaalit ja menetelmät

Soveltuvuusvaatimukset

Jokainen kohde suoritetaan näytekokoelmalla käyttämällä protokollaa, ja kirjallinen suostumus muodossa, jotka olivat hyväksyneet niiden Institutional Review Board. Koehenkilöt annettava kirjallinen, tietoon perustuva suostumus. Sivustot osallistuvat näytekokoelmatodistuksen olivat University of Pittsburgh Medical Center, Memorial Sloan Kettering Cancer Center, University of Michigan, University of Nebraska, ja NorthShore University HealthSystem (aiemmin tunnettu nimellä Evanston Northwestern Healthcare). Seuraavat kriteereillä olivat tarpeen haimasyövän tapauksissa ja valvontaa. Ohjaus ryhmät sisältyvät krooninen haimatulehdus potilaita, akuutti hyvänlaatuinen sappitietukos potilasta, ja terveillä koehenkilöillä.

Haimasyöpä tapauksissa.

Oppiaineet koki parantava haiman resektio varten adenokarsinooman myös negatiivisia marginaaleja ja mieluiten Stage 1 tai 2A (puuttuminen imusolmukemetastaaseja).

Ei ollut aikaisemmin muun pahanlaatuisen paitsi nonmelanoma ihosyöpiä kymmenen vuotta.

Krooninen haimatulehdus tapauksissa.

Kaikki aiheista on ollut vähintään kaksi radiologisen alla luetellut kriteerit, ellei aihe oli historian haiman eksokriinisten vajaatoiminnan, jolloin vain yksi radiologisia kriteeri oli tarpeen.

Vatsan ultraääni, joka on yhdenmukainen krooninen haimatulehdus standardeilla radiologisten kriteerien

Vatsan CT skannaus yhdenmukaisia ​​krooninen haimatulehdus tavanomaisilla radiologisten kriteerien (eli kalsifikaatioiden, laajentuneet haiman kanava, epäsäännöllinen ääriviivat rauhanen, kystinen vaurioita).

Endoskooppinen retrogradinen cholangiopancreatography (ERCP) tentti johdonmukainen jossa krooninen haimatulehdus tavanomaisilla radiologisten kriteerien (laajentuneet mutkikas tärkein haimatiehyeeseen epäsäännöllisten toiset oksat, intraduktaalisissa calculi).

Endoskooppinen ultraääni yhdenmukaisia ​​krooninen haimatulehdus tavanomaisilla sonografinen kriteerit.

haiman kalkkiutuminen tunnistettu tavalliselle elokuva vatsan.

Kaikki koehenkilöt olivat kuvantamisen tutkimus haiman 3 kuukauden kuluessa tutkimuksen ilmoittautuminen joka ei viitannut haiman massa.

Kaikki potilaat oli vakaa kliininen historia viimeisen vuoden aikana ilman epäily syövän (laihtuminen, keltaisuus, tai muutos vatsaoireista).

Kaikki koehenkilöt ollut aiemmin ollut muita maligniteetin paitsi ei-melanoomaihosyöpien kuluneesta kymmenen vuoden aikana.

kaikki koehenkilöt ollut suvussa haimasyöpä.

Välitön hyvänlaatuinen sappitietukos tapauksissa.

kaikki koehenkilöt täyttivät kaikki seuraavat kliiniset kriteerit:

seerumin bilirubiini taso yli 2,0 mg /dl

Dilated ekstrahepaattisen sappiteihin osoitettu kuvantamistutkimukseen

verinäyte ennen mitään korvaavia toimia.

Kaikki koehenkilöt olivat sappitietukos joka oli hyvänlaatuinen etiologia kuten sappitiekivistä kivi tai hyvänlaatuinen sapen ankara.

primaarisessa sklerosoiva sappitietulehdus (PSC) jätettiin pois.

Kaikki koehenkilöillä oli täydellinen kuvantamisen tehdyssä haima, joka ei ehdottaa haimasyöpä, kuten diskreetti massa vaurio.

Kaikki koehenkilöt ollut aiemmin ollut muita pahanlaatuisen paitsi ei melanoomaihosyöpien viimeisten kymmenen vuotta.

Kaikki koehenkilöt ollut suvussa haimasyöpä.

Terveet verrokit.

Kaikki koehenkilöt täyttivät seuraavat kriteerit.

Ikä , rotu ja sukupuoli sovitettu pätevien haimasyövän tapauksissa.

Ei suvussa haimasyöpä.

Ei henkilökohtainen historia haimatulehduksen tai sappitietukos kuten edellä on määritelty.

Ei samanaikainen vatsakipu.

Ei samanaikaisia ​​selittämätön laihtuminen.

Ei ollut aikaisemmin muun maligniteetin paitsi ei-melanoomaihosyöpien viimeisten kymmenen vuoden aikana.

ei ollut mitään laajennettua seurata kuin aika, että näytteet lähetettiin lopussa keruun ajan. Vaikka on mahdollista, että yksi tai useampi valvonta oli alkava syöpä aikaan näytteen keräämistä, vaikutus tutkimuksen todennäköisesti olisi mitätön. Johtuen kuinka harvinainen tauti on väestössä kanssa elinaikaisen riskin 1 71 potilaalla, se vain odotettavissa, että korkeintaan yksi näistä potilaista on väestössä riski PC koskaan kehittää syöpä elämässään -aika.

seerumi ja plasma kokoelma

Kaikki kokoelmat tapahtui seuraava tietoisella suostumuksella osallistujien ja ennen mitään leikkauksia tai menettelyjä. Näytteet kerättiin 21 helmikuu 2005 on 20 huhtikuu 2011, ja kokeet suoritettiin vuosina 2013 ja 2014. Kaikki verinäytteet kerättiin mukaisesti EDRN vakiotoimintamenettely. Kaikki näytteet jäädytettiin -70 ° C: ssa tai kylmempi 4 tunnin ajan kokoelma. Neljä ml seerumia ja 2 ml plasmaa (käyttäen EDTA antikoagulantti) kuljetettiin osallistumasta sivustoja NCI Biorepository Frederick, Maryland. Näytteet siirrettiin arkistoon tavalla, joka esti sulattaminen käyttämällä hyväksyttyjä transporter tekniikoita. Eriä lähetettiin kuivajäässä sivustoille suorittamista CA 19-9 analysoi, eikä sulatettiin yli kolme kertaa yhteensä ennen käyttöä.

terveillä verrokeilla kerättiin 4 ulos 5 sivustoja osuudet valvonnan vastaavat yleistä osuudet kunkin sivuston (taulukko 1). Seurasimme ohjaus rekrytointi huolehtia oli kohtuullinen sovitus tarkastusten tapaukset, iästä, rodusta ja sukupuolesta, mutta rento algoritmi hieman kanssa krooninen haimatulehdus potilaiden vuoksi varhaisempi aloittaminen suhteessa haimasyövän.

määritelmät kasvaimen vaiheiden

haiman adenokarsinooman oli lavastettu perusteiden mukaisesti Amerikan sekakomiteassa Cancer (AJCC) Välivarastointi käyttöopas 7

painos. Seuraavat määritelmät kasvaimen laajuutta ja imusolmukestatuksesta käytettiin: T1 = Kasvain rajoittuu haima ≤2 cm suurin mitta; T2 = Kasvain rajoittuu haima 2 cm suurin mitta; T3 = kasvain ulottuu haima mutta ilman osallistumista keliakia akselin tai ylempi suolilievevaltimo; N0 = Ei alueellinen imusolmuke etäpesäke; ja N1 = alueellinen imusolmuke etäpesäke. Vaiheet määriteltiin: Stage 1 a = T1N0M0; Vaihe 1b = T2N0M0; Vaihe 2a = T3N0M0; ja Stage 2 b = T1-3N1M0.

CA 19-9 määrityksissä

Kaksi laboratoriota juoksi CA 19-9 määrityksiä alikvootit plasmanäytteistä, jotka saatiin ilman tunnistetietoja. Yksi määritys, EIA-1474 kit [Erä # RN-45868] DRG International (Springfield, NJ), ajettiin laboratoriossa tohtori Killary mukaan aiemmin julkaistu menetelmiä [20]. Toinen määritys kehitettiin ja ajaa laboratoriossa Dr. Haab käyttämällä aiemmin julkaistu protokolla [19, 21, 22]. Myöhemmässä tekstissä viittaamme entisen kuin ”Assay 1” ja jälkimmäinen ”määritys 2” DRG kit nimellisesti on hyväksytty vain seerumia, mutta se aikaisemmin käytettiin plasman saavuttaa samanlaisia ​​tuloksia kuin saavuttaa käyttämällä seerumia [20]. Tässä tutkimuksessa olemme edelleen validoitu sen käyttö plasma vahvistamalla tilastollisen vastaavuuden Pitoisuus 1 ja Abbott Arkkitehti alustan (katso tulokset). Osajoukko näytteistä (n = 82) analysoitiin käyttämällä CA 19-9 määritys on Abbott Arkkitehti Immunoassay alustan yliopiston Health Network Torontossa, Kanadassa. Katso S1-tiedosto lisätietoja protokollien ja määrityksen ominaisuudet.

Tilastollinen

Kullekin ryhmälle vertasimme CA19-9 jakaumia kahden CA19-9 määrityksiä käyttäen parillista t -testi (log-transformoituja CA19-9) ja Wilcoxonin testi. Spearman sijoitus korrelaatiokerroin kahden määrityksissä oli myös lasketaan. Kuvaileva analyysejä, meillä tuotti boxplot kullekin CA19-9 määritystä ja kunkin ryhmän; geometrinen yksittäisillä määrityksissä ja niiden 95% Wald luottamusvälit myös laskettiin.

pareittain vertailuissa keskuudessa terve, hyvänlaatuinen sappitietukos, krooninen haimatulehdus, ja syöpä ryhmät, suoritimme kahden otoksen t-testillä ( log-transformoituja CA19-9 arvot) ja Wilcoxonin Rank Sum testejä. Lisäksi jokaisen pariksi valvontaa ja tapauksessa ryhmä, olemme tuotti nonparametric arvio vastaanottavan käyttöominaisuuksien (ROC) käyrä [23] ja alue-alle-(AUC) Kyseisen CA19-9 määrityksissä ja varten lineaarinen yhdistelmä log-muunnettuja arvoja kahdesta määritykset, jotka ovat peräisin logistinen regressio malleja. Bootstrap käsittävä 500-kertainen resampling käytettiin rakentamisessa luottamusvälit AUC yksittäisten määrityksissä erojen AUC kahden CA19-9 määrityksissä, ja AUC välinen yksittäisten CA19-9 määrityksiä ja yhdistetyt analyysit.

yksilön CA19-9 määritykset, tarkastelimme herkkyydet ja erityispiirteet käyttäen kliinistä sulku 37 U /ml sekä johdettu sulku, joka maksimoi summa herkkyys ja spesifisyys. Olemme myös arvioitu herkkyys ja tarkkuus perustuu kahden edellisen yhdistelmät CA19-9 joissa käytetään ja /tai sääntöjä. Bootstrap käsittävä 500-kertainen resampling käytettiin rakentamisessa luottamusväli herkkyys, spesifisyys, ja summa herkkyys ja spesifisyys.

Glycan array kokeiluja ja analyysi

Ydin laboratorioon Glycan array synteesi (osa Consortium for Functional glykomiikan, CFG) Emory University suoritetaan glykaanirakenteeseen array kokeita ja Alkuanalyysit. Array versiossa käytetään tässä oli 5,1, joka sisältää 610 ainutlaatuinen glykaanien. Kokeet seurasi julkaistujen menetelmien [24]. Käytimme ohjelma GlycoSearch [25] analysoida glykaanirakenteeseen array data.

Tulokset

CA 19-9 vertailu- asetettu

Viittaus joukko sisältyvät seerumi ja plasmanäytteiden kerätty viidessä eri laitoksissa yhteisen vakiotoimintamenettely. Näytteet ovat peräisin 98 potilailla, joilla on vaiheen I-II haimasyöpä, 62 potilailla, joilla on krooninen haimatulehdus, 31, joilla on hyvänlaatuinen sappitietukos, ja 61 terveiden verrokkien (taulukko 1).

Selvitimme CA 19-9 arvot plasmanäytteistä käyttäen kahta erilaista määrityksiä, yksi kaupallisesti saatavilla kit (kutsutaan Assay 1), sekä muut in-house järjestelmä (kutsutaan Pitoisuus 2). Käytimme kahta eri määrityksissä, jotta huomioon mahdollisia eroja määrityksissä, koska edellinen havaintoja tällaisten erojen [26, 27]. Testasimme luotettavuutta määrityksissä käytetään tässä vertailemaan automaattisella alustan (Abbott Arkkitehti CA 19-9 Immunoassay) 82 Näytteiden jakautuu koko potilasryhmille. Arvot kussakin potilasryhmät olivat tilastollisesti vastaa kaikkien kolmen määrityksiä, lukuun ottamatta hieman korkeammat tasot terveiden verrokkien määritystä varten 2 nähden Abbott määritys (taulukko A1 S3 File), sekä syrjintä syövän kontrolliryhmien oli tilastollisesti vastaavia kaikkien määrityksissä (taulukko B S3 Tiedosto ja S1 tiedosto). Tämä tulos vahvistaa luotettavuutta käyttäen saadut tulokset Kokeet 1 ja 2 sekä niiden yleiset vastaavuutta automaattisten alustoilla.

Ensin tarkasteltiin jakaumat arvot kullekin määrityksistä eri potilasryhmissä (kuvio 1A) . Terveillä koehenkilöillä, ja krooninen haimatulehdus potilaalla oli alimmille tasoille; hyvänlaatuinen sappitietukos potilailla oli merkitsevästi korkeampi (p-arvo on pienempi kuin 0,0001 ja yhtä 0,006 Wilcoxonin Rank Sum testi, kuin terveillä koehenkilöillä määritystä varten 1 ja 2 tässä järjestyksessä); ja syöpäpotilaat olivat korkeimmat (p 0,0001 suhteessa terveisiin henkilöihin perustuvat joko t-testiä tai Wilcoxonin Rank Sum testi kutakin määritystä varten). Kaksi määritykset osoittivat vastaavan trendejä. Yksityiskohtaiset tulokset noin geometristen keskiarvojen yksittäisten määritysten ja niiden 95% luottamusvälit on esitetty taulukossa C S3 File, ja p-arvot vertailuja potilasryhmiä on esitetty taulukossa D S3 File.

A) CA 19-9 saavuttamiseksi kussakin ryhmässä. Esitämme log-muunnettuja arvoja paremmin visualisoida kaikki alueet arvot. Laatikot osoittavat kvartiilit jakaumien, vaakaviivat ruutuihin osoittavat keskilinjan ja katkoviivat antaa valikoimia, jossa yksittäiset harha merkitty piireissä. A1, määritys 1; A2, määritys 2. B-D) Vastaanotin-operaattori-(ROC) käyriä verrataan kaikkia haimasyövän potilaat osoitettuun kontrolliryhmiin. Legendat määritä alue-alle-käyrät (AUC) kunkin määritystä, jossa alueet 95%: n luottamusväli.

kysyttiin CA 19-9 pinnat olivat erilaisia ​​eri aikaisemmin vaiheessa (vaiheissa Ia, Ib, ja II) ja myöhemmän vaiheen (vaihe Ilb) potilasta. CA19-9 tasot eivät olleet merkittävästi erilaiset näiden kahden ryhmän välillä (p-arvot perustuvat t-testi ja Wilcoxonin Rank Sum testi); ja alue-alle-käyrän (AUC) arvot vastaanotin-toiminta-(ROC) analyysi myös ei ollut tilastollisesti merkitsevää eroa ryhmien välillä eriyttäminen syövän terveillä koehenkilöillä (S2 File). Siksi seuraavissa analyyseissä me ryhmitelty kaikille syöpäpotilaille yhdessä.

Käytimme AUC kyvyn määrittämiseksi CA 19-9 erottaa ryhmiä. CA19-9 määritykset olivat parhaiten erottaa syövän terveistä kontrolliryhmää (AUC yhtä kuin 0,78 95% CI (0.70,0.84) määritystä varten 1, ja 0,76 (0,68, 0,83) määritystä varten 2) (kuvio 1 B). Analyysit oli myös hyvä suorituskyky erottaa syövän krooninen haimatulehdus ryhmistä (AUC yhtä kuin 0,73 95%: n luottamusväli (0,65, 0,80) määritystä varten 1, ja 0,77 (0,69, 0,83) määritystä varten 2) (kuvio 1 C), mutta ne eivät olleet tehokkaita erottaa syövän hyvänlaatuinen sappitietukos ryhmiä (AUC yhtä kuin 0,56 95%: n luottamusväli (0,47, 0,67) määritystä varten 1, ja 0,62 (0,45, 0,71) määritystä varten 2) (kuvio 1 D). Ei ollut tilastollisesti merkitseviä eroja AUC välillä Analyysit 1 ja 2 kaikissa näissä vertailuissa.

suoremmin liittyvät näiden tulosten kliininen käytäntö, tarkastelimme herkkyydet ja erityispiirteet CA19-9 määritykset on tyypillinen cutoff käytetty käytännössä, 37 U /ml, ja cutoffs joka antoi maksimi summien herkkyys ja spesifisyys (taulukko 2). Tällä 37 U /ml sulku, keskiarvo herkkyyden ja spesifisyyden vaihteli 70 ja 74 syrjinnän syövän terveiden ja krooninen haimatulehdus kontrolliryhmiin. Molemmille määrityksissä, alarajan huomattavasti lisääntynyt herkkyys pienemmällä väheneminen spesifisyys, tuloksena on tilastollisesti merkitsevä parannus keskimääräinen herkkyys ja spesifisyys (taulukko 2).

Patient-by-potilaiden vertailu CA 19-9 määritykset

edellä esitetty analyysi osoittaa, että CA 19-9 suorituskyky on samanlainen koe 1 ja koe 2, kun arvioitiin kaikkien potilaiden, mutta halusimme myös tietää, miten nämä kaksi määrityksiä verrattiin yksittäisten potilaiden. Suora vertailu arvoista, jotka saatiin kullekin potilaalle osoitti suuria eroja tietyille potilaille (kuvio 2). Erot välinen määritykset tasaisesti jakautunut; Joissakin tapauksissa Assay 1 oli suurempi, ja muissa tapauksissa määritys 2 oli korkeampi.

log-transformoituja CA 19-9 arvot kaikista aiheista Assay 1 ja määritys 2 piirrettiin suhteessa toisiinsa. Jokainen ympyrä ilmaisee yksittäisen potilaan näytteestä. Trendiviivan on lineaarinen-pienimmän neliösumman parhaiten, ja spearmanin järjestyskorrelaatiokerroin on 0,74.

Käytännön tasolla, eroavuudet määrityksissä ainoa asia suhteessa cutoffs kliinisessä käytössä. Siksi kysyi kuinka usein tilan otos oli erilainen välillä Assay 1 ja määritys 2 nähden cutoff (taulukko 3). Käyttäen 37 U /ml cutoff, 8 53 syöpäpotilailla (15%) koholla Assay 1 olivat alhaiset Pitoisuus 2, ja 7 52 syöpäpotilaiden (14%) koholla määritys 2 olivat alhaiset Assay 1. seitsemän 128 verrokeilla (5%) ei koholla Assay 1 kohosivat Pitoisuus 2, ja 9 130 ohjaa (7%) ei koholla määritys 2 kohosivat Pitoisuus 1. Erot olivat myös läsnä käyttäen 100 U /ml sulku. Näin ollen vaikka kaksi määritykset antavat yleensä samat yleistä suorituskykyä, erot olivat ilmeisiä yksittäisille potilaille. Kukin määritys toisinaan antanut vääriä negatiivisia tai vääriä positiivisia tuloksia verrattuna muihin.

testaaminen CA 19-9 määrityksissä yhdistettynä

arvioitiin, onko näiden kahden yhdistelmä määritykset antoivat parempia tuloksia kuin kumpikaan määritys yksinään. Tämä konsepti perustuu olettamukseen, että jos vasta-aineet jokaisessa määrityksessä optimaalisesti havaita selvä potilasryhmissä, suurempi prosenttiosuus potilaille voidaan havaita, jos määrityksiä yhdistettiin. Käytimme logistinen regressio johtaa lineaarikombinaatioina log-muunnettuja arvoja kahden määrityksissä ja arvioitiin AUC erottaa syövän kustakin verrokkiryhmien perustuu yhdistettyyn pisteet. Näiden kahden määritykset eivät osoittaneet merkittävää parannusta erottaa syövän terve tai krooninen haimatulehdus ryhmät (kuvio 1 ja taulukko 2). Lisäksi käyttäen yksinkertaisia ​​yhdistelmä perustuvia sääntöjä tai OR operaattoreita, joko optimoitu cutoffs tai tavallinen 37 U /ml sulku oli vähäistä parannusta keskimääräinen herkkyys ja spesifisyys suhteessa yksittäisiin määrityksiin (taulukko 2). Näin ollen, vaikka kaksi määrityksissä mahdollisesti tunnistaa ei-päällekkäistä potilaiden (ehdottivat puute täydellistä korrelaatiota kuviossa 2), ne eivät vaikuta täydentävää, syöpä-tietoja.

erityisyys erot CA 19-9 vasta

Lisätietoja alkuperästä eroja määrityksissä voisi olla hyödyllistä optimoida havaitsemiseksi syöpäpotilaiden minimoiden havaitsemista verrokkien. Antigeeni nimellisesti tunnista CA 19-9 vasta on glykaanitähteen nimeltään sialyyli Lewis [16], jonka sekvenssi Siaα2,3Galβ1,3 (Fucα1,4) GlcNAc, jossa Sia on siaalihappoa, Gal on galaktoosi, Fuc on fukoosia, ja GlcNAc on Nasetyyliglukosamiini-. Sialyyli Lewis A on jäsen Lewis veriryhmä järjestelmä glykaanien punasolujen ja erilaisia ​​glykoproteiinien ja glykolipidien [22, 28]. Vaikka sialyyli Lewis A on tärkein glykaanin sitoo CA 19-9 vasta, muut glykaanien voidaan sitoa [19, 29]. Tehokas työkalu saada enemmän tietoa siitä, mitä muut glykaanien vasta-aine sitoo on glykaanirakenteeseen array [24, 30], joka mahdollistaa mittaukset sitovan proteiinin monille eri glykaanien rinnakkain. Siksi saadaan glykaanin array tietoja käytetyt vasta-aineet Kokeet 1 ja 2

Molemmat vasta-aineet sitovat kanoninen CA 19-9 antigeeni-sialyyli Lewis A-, mutta erot (kuvio 3 ja kuvio 4). Vasta-aineen määritys 2 (9L426) sitoutui voimakkaammin kuin Assay 1-vasta-aine dimeerisen Slea-lea, mistä on osoituksena parempi signaalin pienellä pitoisuudella 0,2 ug /ml, mutta se ei osoittanut sitoutumista siaalihappo variantti Neu5Gc. Se sitoutui myös sialyyli Lewis C (fukosyloimattoman sialyyli Lewis A) pitoisuus on suhteellisen suuri 20 ug /ml. Sen sijaan Assay 1-vasta-ainetta (vain havaitsemisen vasta-aine oli saatavilla kaupallista pakkausta) osoitti suurempaa sitoutumista Neu5Gc, mutta ei muita sitoutumista SLEC. Kolmas vasta-aine (klooni M081221, Fitzgerald, Acton, MA), ei käytetty määritys 1 tai 2, mutta mukaan vertailun, sidottu muihin glykaanien lisäksi, jotka näytetään kanoninen CA 19-9 antigeeni. Tämä vasta-aine reagoi ristiin glykaanien sisältävät sialyyli Lewis X, isomeerin sialyyli Lewis A, jossa kiinnitys fukoosia ja galaktoosin ydinrakenteeseen on kytketty. Siten CA 19-9 vasta-aineilla on päällekkäisiä mutta erillisiä erityispiirteet, myös sitoutumista joitakin rakenteita pidemmälle kanoninen CA 19-9 antigeeni.

Jokainen vasta-ainetta inkuboitiin 2 ug /ml on glykaanitähteen array, joka sisältää 610 erillistä glykaanien (glykaanirakenteessa array versio 5.1 alkaen Consortium for Functional glykomiikan). Kuvaaja sisältää glykaanien osoittaa korkeimman sitoutumisen minkä tahansa vasta-aineita. Kunkin vasta-, me normalisoitui raaka Fluoresenssiarvot asettaa korkein arvo on 1. Luettelo määrittää glykaanien mukana juoni, eikä tarroja yläpuolella sarakkeet ilmaisevat ensisijaisen aihe kussakin glykaania. DRG on Assay 1 vasta-aine, 9L426 on Pitoisuus 2-vasta-aine, ja M081221 on toinen anti-sialyyli Lewis vasta-aineen mukaan vertailun vuoksi.

Kunkin vasta-aineen sitoutumisen intensiteetti on ilmoitettu glykaanien, vuonna