Krooninen sairaus

tiivistelmä

MiR-210 on master hypoxamir joka yleensä esiintyy onkogeenisiä ominaisuuksia useimmissa ihmisen kiinteiden kasvainten kuten virtsarakon syöpä (BC). On kuitenkin edelleen tuntematon kliinisestä merkityksestä kiertävän miR-210 tasot BC. Tässä tutkimuksessa havaittiin, että seerumin miR-210 oli säädelty potilailla, joilla BC, ja seerumin miR-210 lisääntyi etenee vaiheeseen ja laatu. Lisäksi seerumin miR-210 ilmentyminen havaittiin vähentää huomattavasti pariksi postoperatiivisen näytteitä ja kohonnut useimmilla potilailla, joilla oli uusiutunut BC. Yhdessä meidän tiedot viittaavat siihen, että seerumin miR-210 voisi olla mahdollinen noninvasive biomarkkeri seulontaan, ennustamiseen ja seurantaan BC.

Citation: Yang Y, Qu A, Liu J, Wang R, Liu Y, Li G , et ai. (2015) Serum miR-210 Auttaa Kasvain Detection, Stage Prediction ja Dynamic Surveillance virtsarakon syövän. PLoS ONE 10 (8): e0135168. doi: 10,1371 /journal.pone.0135168

Editor: Ratna B. Ray, Saint Louis University, Yhdysvallat |

vastaanotettu: 02 kesäkuu 2015; Hyväksytty: 17 heinäkuu 2015; Julkaistu: 07 elokuu 2015

Copyright: © 2015 Yang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat National Natural Science Foundation of China (nro 81271916); Shandongin maakunnassa Natural Science Foundation of China (nro. ZR2010H004, ZR2013HQ063 ja ZR2014HP001); Fundamental Research Funds Shandongin yliopistossa (nro 2014QLKY03); Research Fund Tohtorikoulutuskeskuksen of Higher Education of China (nro 20120131110055) ja National Key kliininen Medical Specialties Foundation. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Virtsarakon syöpä (BC), yleisin maligniteetti virtsateiden maailmanlaajuisesti aiheuttaa huomattavaa sairastuvuutta ja kuolleisuutta [1]. Alkudiagnoosin, noin 70% BC potilaista on syöpiä rajoittuu epiteelin tai epiteelinalaisella sidekudoksen (non-lihas-invasiivisia virtsarakon syöpä, NMIBC, koostuvat vaiheista Ta, Tis ja T1). Yli 50% näistä syövistä toistuisi ja 15-20% edetä lihas-invasiivisia muoto (MIBC, vaiheet T2, T3 ja T4) aikana seurata [2]. Varmasti tämä korkea taudin uusiutumisen edellyttää elinikäistä seurantaa. Tällä hetkellä yleisimmin käytetty testi ei-invasiivisia havaitseminen BC on virtsan sytologia. Tämä testi on rajallinen herkkyys, erityisesti havaitsemiseen huonolaatuisen vaurioiden [3-6]. Kystoskopia-ohjattu koepala histologista arviointia voi tarjota korkea diagnostinen tarkkuus, mutta se on invasiivinen ja kallis, ja epämukavaa yleinen syövän seulontaan. Näin ollen on olemassa tarvetta uusille markkereita, jotka voivat auttaa havaitsemiseksi ei-invasiivisesti ja valvonta BC.

MikroRNA (miRNA, MIRS) ovat uusi luokka endogeenisiä, pieni, ei-koodaavat RNA-oligonukleotidejä, jotka voisivat negatiivisesti säädellä geeniekspressiota kohdistamalla 3′-alueen (3′-UTR), vastaavan mRNA: n [7]. Kumulatiivinen todisteet osoittavat, että miRNA usein väärin säädellystä ihmisen syövissä ja aiheuttavat merkittäviä vaikutuksia syövän kehitykseen [8, 9]. Kiertävä MikroRNA, peräisin primäärikasvain kudoksista, ovat vakaasti havaittavissa seerumin /plasman [10-12]. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että verenkierrossa miRNA voidaan käyttää uusien biomarkkereiden syövät [13-15]. Viime aikoina jotkut verenkierrossa MikroRNA, kuten miR-21, miR-221, miR-375, jne. On ehdotettu biomarkkereita kasvaimen läsnäolo tai hoitovaste paikallisia ja systeemisiä hoitoja [9, 16]. Kuitenkin käyttö kiertävän miRNA kuin veripohjaisten, vähän invasiivisia biomarkkereita potilaille, joilla BC on vielä suhteellisesti vähemmän tutkittu.

MiR-210, master hypoxamir määrä lisääntyy useimmissa ihmisen kiinteiden kasvainten ja yleensä osoittaa onkogeenisten ominaisuudet [17, 18]. Viimeaikaiset tutkimukset osoittivat, että miR-210 oli yläreguloituja BC kudoksissa [19, 20], ja yli-ilmentyminen miR-210 liittyi huono selviytymistä, edistetään solujen kasvua ja muuttoliike, ja se esti apoptoosin BC solujen [21]. Ilmaisu ja kliininen merkitys kiertävän miR-210 BC epäselvää tällä hetkellä. On osoitettu, että korkea kiertävä miR-210 voisi toimia biomarkkeri kasvaimen läsnäolon ja hoitovaste lääkehoitoja potilailla, joilla on rintasyöpä [22]. Vuonna Näiden havaintojen valossa, me postuloivat miR-210 saattaa olla ehdokkaana etsintä kiertoilmana biomarkkerit BC ja se voi antaa ennustavaa tietoa parantamiseksi syövän hoidossa.

Tässä tutkimuksessa keskityimme analyysimme kliinisestä vaikutuksesta verenkierrossa miR-210 havaitsemiseen ja valvontaan BC, hypoteesia, jonka kiertävä miR-210 voisi olla invasiivisia biomarkkeri BC potilaille. Huomasimme, että ennen leikkausta miR-210 ekspressiotasot seerumissa ovat hyödyllisiä havaita BC, ennustaa lihas hyökkäys ja histologinen aste, ja heijastaa kasvaimen dynamiikkaa.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat ja näytteet

tutkimuksessa oli mukana 168 potilasta, joilla oli äskettäin diagnosoitu BC laitoksella Urologiset Kirurgian Qilu sairaala, Shandong University (Jinan, Kiina) vuosien 2006 ja 2010 Histologinen näytteitä kaikilta potilailta tarkistetaan diagnoosin varmistamiseksi BC, ja kasvaimet lavastettuja ja porrastettu 2002 TNM luokittelu ja 1973 WHO luokitusjärjestelmä, vastaavasti. Verta kerättiin 168 BC potilaista ennen leikkausta. Parilliset leikkauksen jälkeinen verinäytteet kerättiin 40 potilasta kuukauden kuluttua leikkauksesta, ja parittomat uusiutumisen ryhmä verinäytteet kerättiin 30 potilasta. Kliinis tiedot potilaiden, kuten sukupuoli, ikä, histologisia erilaistumista ja kasvainten vaiheessa kerättiin takautuvasti. Lisäksi 104 tervettä verrokkia, jotka kävivät sairaalaan lääkärintarkastuksessa otettiin tässä tutkimuksessa. Terveillä valittiin samanlaisia ​​iän ja sukupuolen mittasuhteet kuin ennen leikkausta syöpäpotilailla, ja ne seulottiin sen varmistamiseksi, että ne olivat normaalin rajoissa kaikkien laboratoriotulokset ja ei ollut historian syöpä. Kerääminen ja analysointi kaikki näytteet oli hyväksynyt eettinen komitea Qilu sairaalan, Shandongin yliopistossa, ja kirjallinen suostumus saatiin kunkin potilaan ja valvontaa.

Kokoveri kerättiin valvontaa ja potilaiden laskimosta. Seerumi erotettiin sisällä 1h veren keräys sentrifugoimalla 10000 rpm: ssä 10 min, täysin solujätteen poistamiseksi. Seeruminäytteet siirrettiin sitten RNaasi /DNaasi-vapaata putkiin ja säilytettiin -80 ° C: ssa lisäanalyyseihin saakka. Formaliini-parafiiniin upotetut (FFPE) kudos- näytteet otettiin potilailta, jotka ovat tehtiin radikaaleja cystectomy. Kaikki FFPE näytteitä säilytettiin huoneenlämpötilassa käyttöön asti.

Soluviljely

BC solulinjoja (5637 ja T24), ja ihmisen uroepithelial solulinja (SV-HUC-1) hankittiin American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA). 5637 ja T24 viljeltiin RMPI1640, joka sisälsi 10% naudan sikiön seerumia (FBS, Gibco, Carlsbad, CA), kun taas SV-HUC-1 viljeltiin Dulbeccon muokatussa Eaglen elatusaineessa /F12 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Kaikki solulinjat inkuboitiin 37 ° C: ssa kostutetussa ilmakehässä, joka sisälsi 5% hiilidioksidia.

Protocol havaitsemiseksi miRNA seerumin

cDNA miRNA seerumissa syntetisoitiin kanssa One Step PrimeScript miRNA cDNA Synthesis Kit (Takara Bio Inc., Shiga, Japani). Reaktioseos (20 ui) sisälsi 10 ui 2 x miRNA Reaction Buffer Mix, 2 ui miRNA Primescript RT Enzyme Mix, 2 ui 0,1% BSA ja 3 ui seerumin sekoittaa 3 ui seerumin puskuria (2,5% Tween 20, 50 mmol /l Tris ja 1 mmol /L EDTA [23], ja inkuboitiin 37 ° C: ssa 60 min, 85 ° C: ssa 5 sekuntia ja sitten 4 ° C: ssa 60 min. Kun oli sentrifugoitu 10 000 rpm: llä 10 minuutin ajan 4 ° C: ssa, cDNA säilytettiin -20 ° C: ssa käyttöön asti.

qRT-PCR miRNA suoritettiin lopullisessa tilavuudessa 25 ui käyttäen SYBR PrimeScript miRNA qPCR Kit (Takara Bio Inc., Shiga, Japani), ABI PRISM 7500 Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA). reaktio reagenssit sisälsivät 12.5μl SYBR Premix Ex Taq II, 0,5 pl of DyeII, 2 ui 5 uM forward-aluketta (Ribobio, Guangzhou, Kiina), 1 ui 10 uM Uni-miR qPCR aluketta ja 2.0μl templaatti-cDNA. tilavuus säädettiin RNA-free-H2O. käänteisen transkription reaktio suoritettiin kolmena kappaleena poistaa mahdolliset poikkeavat. mukaan edellisessä tutkimuksessa, yhdistelmä miR-16-5p ja asennuspalveli- 193a-5p käytettiin vertailukohtana geeni [24]. Ja miRNA ilmentyminen kirjattiin suhde vastaan ​​geometrinen keskiarvo kahden viite geenejä. Lisäksi olemme valittu vähintään miR ilmaisu näytteen ja asettaa ilmaisun arvo tämän näytteen 1. ekspressiotasot kaikki muut näytteet olivat yhtä suuri suhteellinen suhde.

n eristäminen RNA: ta, cDNA-synteesi ja määrällinen reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (qRT-PCR) B

Yhteensä RNA soluista ja elatusaineet näytteet tehtiin käyttäen TRIzol reagenssia (Ambion, Life Technologies, Carlsbad, CA, USA), kun taas RNA uuttamalla for- maliini- kiinteät ja parafinoidut (FFPE) näytteet tehtiin käyttäen miRNA eristäminen Kits (Bioteke, Peking, Kiina). Kaikki käsittelyt RNA tehtiin alle RNaasittomalla olosuhteissa. Eristetty RNA säilytettiin -80 ° C: ssa käyttöön asti.

cDNA syntetisoitiin käyttämällä geenispesifisiä alukkeita (Ribobio, Guangzhou, Kiina) ja M-MLV RT (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) on 20 ui reaktiotilavuudessa. RT-reaktio reagenssit sisälsivät 1 mg RNA-templaatista, 1 ui 10 mM dNTP-seosta, 2 ui 0,1 M DTT, 4 ui ensimmäisen juosteen puskuria, ja 1 pl 40 U /ml RNaasi-inhibiittoria. Tilavuus säädettiin RNA-vapaa H2O. Käänteisen transkription Reaktio suoritettiin kolmena kappaleena poistaa mahdolliset poikkeavat. MiRNA ilmentyminen arvioitiin käyttämällä qRT-PCR ja ABI PRISM 7500 Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA). Taitteen muutokset miRNA ilmentyminen määritettiin käyttäen 2-ΔΔCT menetelmä [10] kanssa U6 pieni ydin- RNA (U6) ohjearvon geenin normalisoinnista. Lisäksi, asetamme ilmentymisen arvo ihmisen uroepithelial solulinja (SV-HUC-1), kuten 1 ja ekspressiotasot kaikki muut näytteet olivat yhtä suuri suhteellinen suhde.

Tilastollinen analyysi

SPSS (Statistical Package for Social Sciences) ohjelmistopaketin, version 18,0 (Chicago, IL, USA), ja MedCalc 9.3.9.0 (MedCalc, Mariakerke, Belgia) ohjelmisto käytettiin analysoimaan kaikki tiedot. Ensin käytettiin Kolmogorov-Smirnov testi määrittää jakelun datan kunkin ryhmän. Tiedot esitetään keskiarvona ± keskihajonta (SD) tai mediaani (kvartiiliväli), kun arvot normaalisti tai epänormaalisti jakautunut, vastaavasti. Tilastolliset erot ryhmien välillä testattiin käyttäen Mann-Whitneyn U-testi, Wilcoxonin t-testiä, Studentin t-testi, tai Kruskal-Wallisin testi tarvittaessa. Vastaanotin toimii (ROC) käyrät perustettiin syrjiä aiheita tai ilman BC. Erot katsottiin tilastollisesti merkittäviksi vain silloin, kun P 0,05. Useita-vertailut katsottiin tilastollisesti merkittäviksi, kun P-arvot olivat alle 0,05 /(lukumäärä kontrastit suoritettu) mukaan Bonferronin usean vertailutestillä.

Tulokset

MiR-210 ilmentymistä ihmisen BC kudoksia ja BC solulinjoissa

vahvista aiemmin raportoitu korkea miR-210 ekspressiotasot BC kudoksissa [25], tutkimme miR-210 ilmaisuja 40 paria ihmisen BC kudosten ja vastaavat ei-syöpäkudokset käyttäen qRT- PCR. Tulokset osoittivat, että miR-210 ilmentymisen BC kudoksissa oli merkittävästi voimistunut verrattuna, että viereisissä normaaleissa kudoksissa (P 0,001, kuvio 1A). Lisäksi olemme tutkineet miR-210 ilmentymistä ihmisen BC solulinjoissa (T24 ja 5637), ja ihmisen uroepithelial solulinja (SV-HUC-1). Tulokset osoittivat, että ekspressiotasot miR-210 BC solulinjoissa olivat merkittävästi korkeampia kuin ihmisen uroepithelial-solulinjassa (kuvio 1 B).

(A) Vertailu miR-210 tasot 40 paria ensisijainen BC kudoksia ja viereisten normaaleissa kudoksissa. Ilmaisu taso miR-210 oli merkitsevä korkeampi ensisijainen BC kudoksissa kuin viereisissä normaaleissa kudoksissa (

P

0,001). (B) Ilmaisulla tasot miR-210 BC solulinjoissa olivat korkeampia kuin ihmisen uroepithelial solulinjassa.

MiR-210 ilmentymisen potilaiden seerumissa BC

ilmaus seerumin miR-210 168 BC potilailla ja 104 ohjaa tutkittiin käyttäen qRT-PCR. Voidakseen vahvistaa vakautta viittaus geeneistä, vertasimme ekspressiotasot miR-16-5p, miR-193a-5p ja yhdistelmä miR-16-5p ja miR-193a-5p (geometrinen keskiarvo) BC potilaiden ja normaali valvonta. Ei ollut näyttöä ero ilmentymisen miR-16-5p, miR-193a-5p ja yhdistelmä miR-16-5p ja miR-193a-5p välillä BC potilaiden ja terveiden verrokkien (S1 Kuva). Ja tulokset osoittivat, että tasot miR-210 merkittävästi yläreguloituja BC potilaita terveisiin kontrolleihin verrattuna (P 0,0001, kuvio 2A). Edustus datan käyttäen ROC-käyrä osoitti vahvaa erottamisen molemmissa ryhmissä, ja AUC 0,898 (95% CI, 0,855-0,931) (kuvio 2B). Käytimme ROC käyrät kanssa Younden indeksin havaitsemaan raja-arvot, jotka voivat syrjiä virtsarakon syöpä potilaat terveillä [26]. Optimaalinen raja-arvo oli merkitty 22.37, joiden herkkyys on 97,6% (95% CI 94,0% -99,3%) ja spesifisyys 69,2% (95% CI, 59,4% -77,9%).

(A) seerumin miR-210 ilmentymisen 168 BC potilailla ja 104 valvontaa. Ylä- ja alarajat laatikoiden ja viivojen sisäpuolella laatikot osoittavat 75. ja 25. persentiili ja mediaani vastaavasti. Ylempi ja alempi vaakasuora baareissa llä 90. ja 10. prosenttipisteet, vastaavasti. (B) Vastaanotin toimineiden (ROC) käyrä analyysi seerumin miR-210 tunnistaa BC potilaille. AUC 0,898 (95% CI ,855-,931) osoittaa hyvää erotteleva voimaa.

Tilastolliset Tulokset osoittivat, että seerumin miR-210 ilmentyminen BC potilailla korreloi merkitsevästi T vaiheessa (P = 0,000) ja M vaihe (P = 0,040). Ei ollut merkittäviä assosiaatioita seerumin miR-210 ilmaisun ja potilaan sukupuoli, ikä, N vaiheessa tai asteeseen (kaikki P 0,05) (taulukko 1).

rooli seerumin miR-210 ennustettaessa kasvain vaiheessa potilailla, joilla BC

tarkempaa analysointia, jaoimme BC potilaita NMIBC ja MIBC, ja totesi, että seerumin miR-210 sekä NMIBC ja MIBC merkittävästi voimistunut verrattuna kontrolleihin (

P

0,0001 ja

P

0,0001, vastaavasti). Vielä tärkeämpää on, merkittävä ero seerumin ilmentyminen miR-210 välillä havaittiin molemmissa potilasryhmissä, joilla NMIBC ja MIBC (

P

0,0001, kuvio 3A). AUC miR-210 käytetään erottamaan NMIBC (Ta-T1) ja MIBC (T2-T4) potilaita ohjaus ei 0,858 (95% CI, ,800-+0,904) ja 0,938 (95% CI, 0,893-+0,968), vastaavasti (kuvio 3B ja 3C). Ja seerumin miR-210 voi luotettavasti erottaa NMIBC potilaiden MIBC potilailla, mistä on osoituksena AUC-arvo 0,736 (95% CI, 0,662-0,800) (kuvio 3D).

(A) seerumin miR-210 ilmentyminen 84 NMIBC, 84 MIBC ja 104 valvontaa. Kaikki

P

0,05 /3. (B) ROC käyrät seerumin miR-210 NMIBC ryhmässä (n = 84) vs terveiden yksilöiden (n = 104). AUC = 0,858 (95% CI 0,800-,904). (C) ROC käyrät seerumin miR-210 MIBC ryhmässä (n = 84) vs terveiden yksilöiden (n = 104). AUC = 0,938 (95% CI ,893-,968). (D) ROC käyrät seerumin miR-210 NMIBC ryhmässä (n = 84) vs MIBC ryhmä (n = 84). AUC = 0,736 (95% CI 0,662-0,800).

arviointi, onko seerumin miR-210 voi seurata kasvaimen dynamiikka

Valitsimme 10 BC potilailla, joilla on korkein seerumin miR-210 lauseke (korkea ryhmä) ja toinen 10 BC potilaalla on alhaisin seerumin miR-210 lauseke (matala ryhmä). Vastaava FFPE kudoksia näiden potilaiden kerättiin ja sitten miR-210 ilmaisuja arvioitiin. Tämän seurauksena 9 potilaalla korkean ryhmän miR-210 ilmentymisen BC FFPE kudoksissa osoitti suurempi (90%) kuin potilailla matalan ryhmän (S2 Kuva). Lisäksi tutkimme kiertävän miR-210 ekspressiotasot pariksi ennen ja jälkeen leikkauksen seeruminäytteistä 40 BC potilailla, joille tehtiin parantava cystectomy, ja totesi, että seerumin miR-210 vähensi merkittävästi leikkauksen jälkeinen ryhmä ( P 0,0001) (kuvio 4A). Tutkimme myös seerumin miR-210 parittomia pre-operative (n = 168), leikkauksen jälkeinen (n = 40), ja uusiutumisen (n = 30) seeruminäytteet, ja totesi, että miR-210 taso oli merkitsevästi vähennetään leikkauksen jälkeinen ryhmässä verrattuna pre-operative ryhmä (P 0,0001). Seerumin miR-210 uusiutumisen ryhmässä oli merkittävästi lisääntynyt (P 0,0001) ja osoitti samalla tasolla kuin vuonna ennen leikkausta näytteistä (kuvio 4B). Yhdessä nämä havainnot osoittivat, että verenkierrossa miR-210 voi heijastaa kasvaimen dynamiikkaa BC potilailla.

(A) Vertailu seerumin miR-210 ilmaisuja välillä ennen ja jälkeen leikkauksen näytettä BC potilaiden . Seerumin miR-210 tasot vähensi merkittävästi pariksi postoperatiivisen näytteissä verrattuna pre-operative näytteet (

P

0,0001). (B) sirontakuvaajaan Mir-210 tasot ennen leikkausta (n = 168), leikkauksen jälkeinen (n = 40) ja uusiutumisen (n = 30) seerumin ryhmiä.

arviointi seuranta kasvaimen dynamiikkaa käyttäen miR-210 ilmentymistä elatusaine BC solulinjoissa

on raportoitu, että primaarisen kasvaimen solut voitaisiin erittävät miRNA ympäröiviin ympäristöihin, mukaan lukien viereiset solut ja veren virtaus [27]. Siksi me arveltu, että viljellyt syöpäsolut voi erittää useita syöpään liittyvän miRNA ympäröivään väliaineessa, simuloidaan vaikutusta toisiinsa ensisijainen syöpäsoluja ja viereisen verta. Vahvista hypoteesin, ensin tutkinut miR-210 ilmentymistä viljellyissä väliaineen BC solulinjoissa (5637 ja T24) ja todettu miR-210 ilmaistiin elatusaine sekä 5637 ja T24 soluja. Sitten päällystetty 5637 ja T24-solujen joissa on eri määrä ja kerättiin väliaineen eri ajankohtina varten yksityiskohtainen tutkimus. Tämän seurauksena lisääntynyt suuntauksia miR-210 ilmentyminen vahvistettiin sekä solun numero- ja aikaa tietenkin riippuvainen tavoin (kuvio 5). Nämä tulokset osoittavat, että miR-210 saattaa vapautua ensisijainen virtsarakon kasvainsoluja ympäröivään luontoon, mikä tarkoittaa, että seerumin miR-210 voi olla peräisin ensisijainen BC soluista ja sen seerumin ekspressiotaso voi heijastaa kasvain dynamiikkaa syöpäpotilaiden BC.

Lisääntynyt suuntaukset vahvistettiin solumediumissa sekä solun numero- ja aika-kurssi riippuva käytöstapoja.

keskustelu

Monet geneettiset ja epigeneettiset muutokset havaitaan olevan osallisena kasvainten synnyssä ja etenemistä eri syöpiä. Aiemmat raportit ovat tunnistaneet kasvain erityisiä muutoksia nukleiinihappoihin veressä potilaiden, ja ovat osoittaneet mahdollinen arvo plasman /seerumin nukleiinihapot uusina ei-invasiivisia biomarkkerit potilailla, joilla on syöpiä [28, 29]. Erityisesti, MikroRNA peräisin syöpäsolut ovat osoittautuneet vakaa ja helposti havaita plasmassa tai seerumissa potilailla, joilla on useita syöpiä, jotka voisivat peili ekspressiota neoplastiset kudokset [10, 11]. Mutta itse asiassa vain suhteellisen vähän miRNA jotka ilmentyy runsaana syöpäsolut ovat havaittavissa liikkeessä [30], ja lähes 30% vapautuu miRNA eivät peili ilmentymiskuviot erityisten syöpäsoluja [31]. Nämä raportit korostavat tärkeää löytää uusia kiertävän MikroRNA biomarkkereina syöpiin.

MiR-210 on kaikkein johdonmukaisesti ja voimakkaasti aiheuttama microRNA hypoksiaolosuhteissa ja yleensä esiintyy onkogeeninen ominaisuuksia erilaisissa kasvaimissa [32, 33]. Hypoksia on yhteinen piirre monissa kiinteiden kasvainten, kuten BC, ja on sekaantunut säätelyyn monien geenien. Viimeaikaiset tutkimukset osoittivat miR-210 oli yläreguloituja BC kudoksissa [19, 20]. Tässä tutkimuksessa, ensimmäinen, olemme vahvistaneet korkeampi miR-210 ilmaisujen BC kudoksissa ja solulinjoissa kuin viereisten normaaleissa kudoksissa ja ihmisen uroepithelial solulinjassa. Sitten olemme keskittyneet kliinistä merkitystä kiertävän miR-210 BC. Huomasimme, että se oli merkitsevästi suurempi BC potilailla kuin terveillä vapaaehtoisilla, ja AUC erottamaan eKr terveiden verrokkien oli 0,898, joiden herkkyys on 97,6% ja spesifisyys 69,2%. Tämä tutkimus on ensimmäinen, joka osoittaa mahdollista roolia seerumin miR-210 havaitseminen BC. Olemme myös havainneet, että korkean miR-210 ilmentyminen seerumissa liittyi kehittynyt T vaiheessa ja läsnäolo etäpesäkkeitä. Nämä löydökset olivat yhdenmukaisia ​​muiden raporttien että korkea miR-210 ilmentyminen BC kudos liittyy lihas-invasiivisen aggressiivisuus [19, 20].

Lisätutkimuksia osoitti miR-210 tasoa voi vain erottaa NMIBC potilaita terveistä ohjata potilaat, vaan myös MIBC mistä NMIBC kanssa AUC-arvo 0,736. Kuitenkin suhteellisen alhainen AUC ja huomattavia päällekkäisyyksiä jakaumat seerumin miR-210 NMIBC ja MIBC osoittavat, että seerumin miR-210 ei voitu käyttää tarkasti erottamaan MIBC ja NMIBC. Silti seerumin miR-210 voidaan käyttää arvioimaan suhteellista todennäköisyyttä lihas-invasiivisen BC puuttuessa luotettavampia kiertävän biomarkkereita. Näin ollen voisi olla hyödyllistä ennen leikkausta ennustettaessa kasvain vaiheessa siinä toivossa, että tämä tieto voisi ohjata hoitovaihtoehto.

tutki myös seerumin miR-210 ekspressiotasot voisi heijastaa kasvaimen dynamiikka BC. Vertailtaessa miR-210 ilmentymistä pariseeruminäytteitä ja ensisijainen kasvaimia paljasti, että korkeat miR-210 edustettuna suurempi ilmaisuja useimmiten ensisijaisen BC kudoksiin. miR-210 tasot verrattiin myös pariksi seeruminäytteistä saatu ennen ja jälkeen parantava leikkauksen, jolla oli merkittävästi vähentäminen leikkauksen jälkeen. Ja seerumin miR-210 potilailta, joilla oli uusiutunut BC oli voimistunut ja saavutti tason, että ennen leikkausta potilailla. Lisäksi olemme selvitettävä, miR-210 tason viljelyalustaan ​​voisi heijastaa tilan BC solulinjojen ja saattavat vapautua syöpäsoluja. Ja tiedot osoittivat selvästi, että miR-210 tasot viljellyissä väliaineessa BC solulinjojen merkittävästi lisääntyi sekä solujen numero- ja aikaa kurssi riippuva käytöstapoja, kun taas miR-210 tasot viljellyissä väliaineessa ihmisen uroepithelial solulinja pysyi ennallaan (tuloksia ei ole esitetty). Nämä havainnot osoittivat, että seerumin ilmentymistaso miR-210 voi olla heijastava kasvaimen dynamiikkaa ja voisi seurata kasvaimen tila.

Vaikka nykyinen määritys voi olla potentiaalisesti käyttökelpoisia BC havaitsemiseen, oli rajoitus käyttää asennuspalveli- 210 yhtenä biomarkkeri diagnoosia BC. Verenkierrossa ilmentyminen miR-210 on myös kuvattu muita kiinteitä syöpiä, kuten rintasyöpää, [22], munuaissyöpä [34], ja haimasyövän [35]. Sen vuoksi voisi olla haasteellista erotella, onko korkea kiertävä miR-210 taso nimenomaan liittyy BC itse tai jos tämä on vain yleinen ilmiö, joka ilmenee seurauksena häiriöiden isännän immuunivastetta aikana etenemisen syöpä [36] . Olemme käsitelleet tätä asiaa osoittamalla, että positiivinen merkittävää korrelaatiota välillä oli primaarikasvaimen kudosten ja seerumin miR-210 ja että seerumin miR-210-pitoisuudet laskivat leikkauksen jälkeen vuonna potilasalaryhmässä korostaen spesifisyys miR-210 erityisenä biomarkkeri BC.

Yhteenvetona tuloksemme säätää vakuuttavia todisteita siitä, että seerumin miR-210 voidaan käyttää noninvasive biomarkkeri seulontaan, vaiheessa pienempienkien seuranta BC. Tämä käsite voidaan sisällyttää kliinisen päätöksiä ei-niin-kaukaisessa tulevaisuudessa vireillä validointi laajamittaisen mahdollisille tutkimuksissa.

tukeminen Information

S1 Kuva. Ct-arvot miR-16-5p, miR-193a-5p, yhdistelmä miR-16-5p ja miR-193a-5p BC potilaiden ja terveiden verrokkien (kaikki

P

0,05).

Ei havaittu merkittävää eroa vajaan 3 viitaten geenejä molemmissa ryhmissä.

doi: 10,1371 /journal.pone.0135168.s001

(TIF)

S2 Kuva. Vertailu miR-210 seerumissa ja vastaavien syöpä kudoksiin.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0135168.s002

(TIF) B